نمذجة سرطان البروستاتا في نماذج الفئران المعدلة وراثيا: تقنية تحرير الجينات الموضعية بوساطة CRISPR / Cas9 في خلايا فص البروستاتا الأمامي للفأر
موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 4:40 دقيقة • April 30th, 2023
ابدأ بنموذج فأر مخدر ومجهز CRISPR / Cas9 يحمل جينوم مصمم للتعبير عن نوكليازات Cas9 والبروتينات الفلورية الخضراء ، أو GFPs ، بواسطة مروج قوي في المنبع. يتم إدخال كاسيت FLOXED-STOP أو LSL الذي يتم إدخاله مباشرة في اتجاه مجرى النهر إلى المروج يمنع نسخ Cas9 و GFP في ظل الظروف العادية.
شق جدار بطن الفأر لكشف فص البروستاتا الأمامي المتصل بالحويصلة المنوية. حقن المعلق الغدي المطلوب في الفص الأمامي لتسهيل توصيل الجينوم الفيروسي المستهدف إلى الخلايا. ضع فص البروستاتا مرة أخرى في تجويف البطن وخيط الشق.
داخل الخلايا المصابة بالفيروس ، يعبر الجينوم الفيروسي عن إنزيمات Cre recombinase و RNAs الإرشادية التي تستهدف الجين المراد تحوره. تتعرف إنزيمات Cre على كاسيت LSL وتستأصل مانع النسخ الفلوكس. تسمح هذه الخطوة للمروج بدفع التعبير عن نوكليازات Cas9 و GFPs.
بعد ذلك ، تشكل نوكليازات Cas9 مجمعات مع دليل الحمض النووي الريبي المشفر بالفيروسات والذي يوجه هذه المجمعات إلى التسلسل المستهدف داخل الجين المراد تحوره. يسمح هذا التوطين لنوكيل كلياز Cas9 بشق الحمض النووي الجيني داخل الجين المستهدف ، مما يؤدي إلى تغيير جيني.
يتسبب التغيير الورمي في تحول الخلايا الطافرة إلى سرطانية. يسهل التعبير المشترك لبروتينات مراسل GFP داخل الخلايا الطافرة تحديد وتتبع تطور السرطان.
لتوصيل الفيروس إلى البروستاتا ، بعد تخدير فأر
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية