موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 2:31 دقيقة • April 30th, 2023
لبدء التشريح الكبير ، خذ شريحة زجاجية تحمل عينة من الأنسجة. بالإضافة إلى ذلك ، خذ شريحة مرجعية تحمل نفس عينة الأنسجة وقم بلطخها باستخدام الهيماتوكسيلين واليوزين لصبغة H& E.
في الخلايا الطبيعية ، يضفي الهيماتوكسيلين بقعة زرقاء على الأحماض النووية ، بينما يظهر صبغة اليوزين البروتينات الخلوية باللون الوردي. يساعد اللون الأزرق الغامق للنواة في تمييز الخلايا السرطانية عن الخلايا الطبيعية.
قم بتراكب الشريحة الملطخة ب H & E مع الشريحة غير الملوثة لمحاذاة عينات الأنسجة. حدد موقع الجزء الذي يحتوي على الخلايا السرطانية على الشريحة الملطخة ب H&E. ضع علامة على المنطقة المقابلة على الشريحة غير الملوثة.
اكشط الأنسجة المرغوبة من الشريحة غير الملطخة. باستخدام طرف ماصة مبللة، اجمع الأنسجة المكشطة لضمان سهولة نقل عينة الأنسجة. انقل الأنسجة إلى أنبوب يحتوي على عازلة للتحلل. تقوم مكونات المخزن المؤقت للتحلل بهضم الأنسجة ، وتطلق مكونات الخلية.
عالج المحللة ببروتياز مناسب واحتضانها عند درجة حرارة عالية. يشق البروتياز الحمض النووي الملوثة ، وبالتالي يحمي الحمض النووي من التدهور. قم بتخزين الحمض النووي المحتوي على محللات الأنسجة لتحليله في اتجاه مجرى النهر.
تحديد الأنسجة السرطانية في منطقة الورم الأكثر ملاءمة للتشريح الكبير وفقا للقسم الملون ب H& E المناسب. بعد ذلك ، قم بتشريح الأنسجة السرطانية بناء على القسم المحدد. خذ شفرة حلاقة نظيفة واكشط الأنسجة السرطانية برفق من الشريحة ، محاولا الاحتفاظ بها في قطعة واحدة. استخدم طرف الماصة لنقل الأنسجة المكشطة إلى قارورة التحلل العازلة.
كرر هذه العملية مع بقية الشرائح. بعد أن يكون كل الأنسجة في الأنبوب ، استخدم الحافة للتأكد من أن الأنسجة مغمورة بالكامل وليست ملتصقة بالحائط. أضف 20 ميكرولترا من بروتياز السيرين المرتبط بالسوبتيليسين إلى القارورة وقم بالنقر برفق للخلط. ضع القارورة في كتلة حرارية 55 درجة مئوية لمدة 4 ساعات على الأقل أو طوال الليل ، مع التأكد من الدوامة قليلا بعد ساعتين.