الفحص المجهري الفلوري لمصائد العدلات خارج الخلية أو NETs: تقنية لمراقبة التفاعل اللاصق بين الخلايا السرطانية و NETs

في ظل الظروف المرضية مثل السرطان ، تطلق العدلات المنشطة مصائد عدلات خارج الخلية أو NETs - وهي شبكة من الحمض النووي خارج الخلية مع الإنزيمات المرتبطة بها والبروتينات المضادة للميكروبات - التي تحبس الخلايا السرطانية المنتشرة.

لتصور التفاعل اللاصق بين NETs والخلايا السرطانية في المختبر ، ابدأ بزراعة العدلات منخفضة الكثافة ، وهي نوع فرعي من العدلات ، في طبق مزرعة مطلي بالبوليمر يعزز ارتباط الخلية. احتضن لبضع ساعات لتحفيز العدلات على تكوين شبكات شبيهة بالويب.

أضف معلقا من الخلايا السرطانية ذات العلامات بالفلورسين الأحمر إلى مزرعة العدلات. احتضان الخلايا السرطانية باستخدام NETs لفترة وجيزة لتسهيل تفاعل الخلايا السرطانية NET. يعمل NET-DNA كعامل كيميائي يجذب الخلايا السرطانية ويعزز التصاقها ب NETs.

قم بإزالة الوسط المستهلك. اغسل المزرعة برفق بوسط جديد مناسب لإزالة أي خلايا سرطانية غير متصلة من المزرعة جيدا.

الآن ، أضف بقعة نووية فلورية خضراء غير منفذة للغشاء لتلوين الشبكات خارج الخلية بشكل انتقائي. راقب الثقافة تحت المجهر الفلوري. تظهر المصائد خارج الخلية العدلات على شكل هياكل خضراء تشبه الخيوط تشكل شبكة ترتبط بها الخلايا السرطانية الحمراء.

أعد تعليق العدلات المعزولة منخفضة الكثافة عند 5 أضعاف 10 إلى الخلايا السادسة لكل مليلتر من وسط RPMI 1640 المكملة بتركيز FBS وبذرة 1 مليلتر من العدلات ل