توصيل بلازميدات الحمض النووي إلى بوليثيليوم مثانة الفأر: إجراء قائم على التثقيب الكهربائي لتوصيل بلازميدات الحمض النووي بكفاءة إلى خلايا الظهارة البولية في مثانة الفئران لتوليد نماذج معدلة وراثيا
موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 3:56 دقيقة • April 30th, 2023
للبدء ، قم بإعداد أنثى فأرة مخدرة في وضع الاستلقاء. تأكد من أن مثانتها فارغة تماما. من خلال فتحة مجرى البول ، أدخل قسطرة مشحمة. يساعد التشحيم في ممر مجرى البول السلس للدخول إلى المثانة.
بعد القسطرة ، قم بعمل شق في البطن وتشريح العضلات الداخلية لكشف المثانة. بعد ذلك ، قم بتعليق بلازميدات الحمض النووي الممزوجة بصبغة مناسبة في الطرف الخارجي للقسطرة. ترد بلازميدات الحمض النووي هذه لجين مراسل الفلورسنت.
قم بتوصيل حقنة بالقسطرة وادفعها لتوصيل محلول البلازميد إلى المثانة. تقوم جزيئات الصبغة المحقونة بتلوين المثانة ، مما يؤكد الإدارة الناجحة لمحلول البلازميد. قم بإزالة مجموعة القسطرة وشد فتحة مجرى البول الخارجية لمنع تدفق محلول البلازميد للخارج.
الآن ، اضغط على المثانة باستخدام قطبين متصلين بمولد التثقيب الكهربائي. تطبيق نبضات كهربائية ذات جهد مناسب للفترة المرغوبة على المثانة. يؤدي تعرض ظهارة المثانة ، البطانة الأعمق للمثانة ، إلى المجالات الكهربائية المطبقة إلى مسام مؤقتة في غشاء الخلية البولية.
تسمح نفاذية الغشاء المتزايدة بالتوصيل الفعال لبلازميدات الحمض النووي المحقونة إلى الخلايا. بعد التثقيب الكهربائي ، قم بخياطة الشق الجراحي. اسمح للماوس بالتعافي. تعبر الخلايا البولية المنقولة ببلازميدات الحمض النووي عن بروتينات مراسل الفلورسنت.
لكل مثانة تقوم بتعدادها ، قم بإعداد ما لا يقل عن 20 م
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية