موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 3:18 دقيقة • April 30th, 2023
الكبيبة عبارة عن شبكة معقدة من الشعيرات الدموية داخل الكلى تقوم بتصفية الفضلات وإزالة السوائل الزائدة من الدم. يعتمد معدل الترشيح الكلوي على هذا الهيكل المتخصص ، والذي يمكن فحصه باستخدام صبغة Periodic Acid Schiff أو PAS.
للبدء ، خذ قسما من قشرة الكلى البارافين على شريحة زجاجية. عالج الشريحة مع الزيلين. تعمل جزيئات الزيلين على إذابة شمع البارافين من قسم الأنسجة. بعد ذلك ، قم بتعريض العينة لتركيزات متناقصة من الكحول. يزيل الكحول آثار الزيلين أثناء إعادة ترطيب قسم الأنسجة لربط البقعة لاحقا.
الآن ، أضف الحمض الدوري إلى العينة. يحول الحمض الدوري الديولات الموجودة في السكريات الأنسجية ، مثل الجليكوجين أو الميوسين ، إلى ألدهيدات. تتفاعل هذه الألدهيدات مع كاشف شيف ، وهو مزيج من حمض الفوشين والكبريت ، ويشكل صبغة أرجوانية اللون تلطخ قسم الأنسجة. اشطف الشريحة لإزالة البقع الزائدة.
بعد الشطف ، أضف الحديد الهيماتوكسيلين ، وهو بقعة نواوية مرتبطة بالحمض النووي وتلطخه باللون الأرجواني. يغسل لإزالة البقع الزائدة. أخيرا ، قم بتجفيف العينة بقوة متزايدة من الكحول متبوعا بالزيلين ، الذي يعمل كعامل تطهير. تساعد هذه الخطوة على تحسين تباين قسم الأنسجة للفحص المجهري.
يمكن تصور المرض الكبيبي على أنه سماكة الغشاء القاعدي ، والشعيرات الدموية المتغيرة ، والخلايا غير الطبيعية التي تتعلق بضعف وظائف الكلى.
للتصور التفصيلي للخلايا الكبيبية والمصفوفة المتوسطة ، جفف عينات قشرة الكلى الثابتة المضمنة في البارافين عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة ، متبوعا بإزالة البارافين مع غمر الزيلين المتتالي والإيثانول التنازلي. أعد ترطيب العينات في الماء المقطر لمدة 5 دقائق واحتضان الشرائح في محلول الحمض الدوري في خزانة الدخان.
بعد 5 دقائق ، اشطف الشرائح بثلاث غسلات لمدة 5 دقائق في 100 مل من الماء المقطر ، تليها حضانة لمدة 15 دقيقة في كاشف شيف. في نهاية الحضانة ، اغسل الشرائح في ماء الصنبور الجاري لمدة 5 دقائق وقم بمضاد البقع باستخدام الهيماتوكسيلين لمدة 3 ثوان قبل شطفها جيدا في ماء الصنبور الجاري لمدة 15 دقيقة أخرى.
بعد ذلك ، قم بتجفيف الشرائح بغمر الإيثانول التصاعدي وغمرين متتاليين من الزيلين لمدة 3 دقائق. بعد تجفيف الهواء ، يمكن تركيب الشرائح بوسيط تركيب قائم على الزيلين لتقييم هيكلها الكبيبي على مجهر ضوئي بتكبير 400X.