موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 3:07 دقيقة • April 30th, 2023
التصوير داخل الحيوية من خلال نوافذ التصوير البصري التتبع عالي الدقة للخلايا الفردية لدراسة سلوكها في البيئة المكروية الأصلية في حي.
للبدء ، خذ فأرا مخدرا مع حقن دماغه مسبقا بالخلايا السرطانية ووجود نافذة قحفية مزروعة داخل حلقة معدنية. تعبر الخلايا السرطانية عن بروتينات الفلورسنت النووية.
ضع الماوس ، ووجهه لأعلى ، في صندوق التصوير. يساعد الحامل المغناطيسي الموجود في صندوق التصوير على تأمين نافذة الجمجمة المزروعة.
الآن ، انقل صندوق التصوير داخل غرفة التصوير التي يتم التحكم فيها بيئيا في المجهر المقلوب لتحليل سلوك الخلايا السرطانية في الدماغ.
في وضع الفوتون المتعدد ، اضبط الليزر على طول موجي مناسب. ركز على منطقة الورم للكشف عن التألق من الخلايا السرطانية.
حدد مكدس z لكل موضع للحصول على صور متعددة داخل الحيوية للخلايا السرطانية في مستويات بصرية مختلفة.
تتيح هذه الخطوة التقاط نسبة كبيرة من الخلايا السرطانية في البيئة المكروية للورم دون التأثير على حل الخلايا.
بعد ذلك ، احصل على صور من مواضع مختلفة من الورم لفترة طويلة.
يساعدتتبع مسار الخلايا السرطانية في مستويات بصرية مختلفة في تحديد هجرة الخلايا السرطانية الفردية باستخدام البرامج المناسبة.
في النقطة الزمنية التجريبية المناسبة ، ضع الماوس ووجهه لأعلى في صندوق تصوير واضبط هدف الماء 25x على أدنى موضع z. أضف قطرة كبيرة من الماء إلى الهدف وانقل صندوق التصوير إلى غرفة المناخ المظلم بدرجة حرارة 37 درجة مئوية في المجهر.
أحضر الهدف إلى غطاء نافذة التصوير الجمجمي حتى تلامس قطرة الماء الغطاء ، وباستخدام وضع التألق ، راقب الورم من خلال العدسة لتركيز الخلايا.
اضبط الليزر على الطول الموجي الصحيح وحدد الوضع المباشر. بعد تحديد العديد من المواضع ذات الأهمية للتصوير ، قم بتسجيل إحداثياتها في البرنامج. حدد مكدس z لكل موضع للحصول على الحد الأقصى لحجم الخلايا السرطانية دون المساس بدقة الخلية السرطانية ، مع ضبط حجم الخطوة بين الصور على 3 ميكرومتر.
بعد ذلك ، احصل على صور لحجم الورم في مواضع مختلفة كل 20 دقيقة لمدة ساعتين ، مع إضافة الماء إلى الهدف قبل كل الحصول على صورة. بعد الحصول على الصورة الأخيرة ، انقل الماوس إلى وسادة تسخين مع المراقبة حتى الاسترداد التام.