تفاعل البوليميراز الرقمي المتسلسل: طريقة لتوليد تفاعلات تفاعل البوليميراز المتسلسل بالقطرات النانوية للكشف عن طفرات الورم النادرة

يقسم تفاعل البوليميراز الرقمي المتسلسل بالقطرات أو تقنية dPCR المواد المتفاعلة لتفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل الفردي إلى ملايين تفاعلات تفاعل البوليميراز المتسلسل بالقطرات النانوية. يكتشف هذا التقسيم الشامل متبوعا بالتضخيم كمية ضئيلة من الحمض النووي المتحور على خلفية كبيرة من الحمض النووي من النوع البري ، مما يتيح الكشف المبكر عن السرطان.

للبدء ، قم بشفط مزيج dPCR الرئيسي الذي يحتوي على قليل النوكليوتيدات المسمى بالفلورسنت جنبا إلى جنب مع كواشف تفاعل البوليميراز المتسلسل الأخرى وزيت تثبيت القطرات. أضف هذا المزيج الرئيسي مباشرة في قاع كل بئر في أنبوب شريط PCR لتجنب فقاعات الهواء. بعد ذلك ، أضف عينات الحمض النووي إلى خليط التفاعل والماصة عدة مرات للخلط.

الآن ، انقل خليط التفاعل بالكامل إلى شريحة متخصصة لأداة توليد القطيرات. قم بتركيب أنبوب شريط PCR جديد على أداة توليد القطيرات. يجمع مولد القطرات بين العينة والزيت لتكوين قطرات نانوية منفصلة مع منطقة مغلفة تمنع التلوث المتبادل بين القطرات.

بمجرد اكتمال القطرات ، انقل أنبوب شريط PCR إلى جهاز تدوير حراري لتضخيم الحمض النووي المستهدف. بعد ذلك ، قم بتحميل منتج PCR في قارئ قطرات يحتوي على كاشف مضان ، والذي يحسب قطرات الفلورسنت الموجبة والسالبة. يمكن استخدام عدد القطرات الموجبة لحساب تركيز الحمض النووي المستهدف في العينة.

قبل البدء في إجر