موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء
0 مشاهدة • 3:47 دقيقة • July 8th, 2025
لتقييم انسداد المسالك البولية ، ابدأ بتثبيت جنين الفأر في الفترة المحيطة بالولادة في وضع الاستلقاء. الآن ، قم بتشريح تجويف البطن للجنين لتحديد موقع المسالك البولية المكتملة النمو ، والتي تتكون من زوج من الكلى والحالب ومثانة مشتركة مع مجرى البول.
بعد ذلك ، خذ حقنة فارغة متصلة بالأنبوب المزود بإبرة دقيقة. املأ المجموعة بمحلول الميثيلين الأزرق - صبغة تتبع زرقاء عميقة. أدخل الإبرة الدقيقة في تجويف الحوض الكلوي - طرف قريب متوسعة يشبه القمع من الحالب في الكلى - وحقن محلول الصبغة.
بسبب الضغط الهيدروستاتيكي ، تتدفق الصبغة من الحوض الكلوي للكلى عبر الحالب وتتراكم أخيرا في تجويف المثانة. كرر إجراء حقن الصبغة مع الكلية المقابلة للتحقق من تدفق الصبغة من الجانب المقابل من المسالك البولية.
أخيرا ، استخدم مجهر مجسمة مزود بكاميرا لتصوير المسالك البولية. عند التصوير ، تظهر المسالك البولية غير العائقة مثانة ملطخة بعمق ، في حين أن المسالك البولية غير الطبيعية مع انسداد تقيد التدفق الحر للصبغة. اعتمادا على درجة الانسداد ، لوحظ غياب كامل أو جزئي للصبغة في تجويف المثانة.
باستخدام الملقط ، قم بتمزيق الجلد بعناية لفتح تجويف البطن للجنين. بعد ذلك ، قم بإزالة الأعضاء والأنسجة الزائدة بعناية مثل الكبد والمعدة والأمعاء بالملقط عن طريق قطعها أو سحبها لفضح الكلى والحالب والمثانة الموجودة ظهريا. امتصاص الدم الزائد من الجنين المقطوع باستخدام ضمادات شاش معقمة ، ثم استمر في حقن الصباغة.
قم بإزالة الفقاعات الموجودة في الإبرة والأنابيب عن طريق طرد محلول الميثيلين الأزرق من طرف الإبرة عن طريق الضغط الهيدروستاتيكي. ارفع المحقنة التي تحتوي على محلول الصبغة فوق مستوى طرف الإبرة لبدء التدفق ثم اخفض المحقنة لإيقاف التدفق. بعد ذلك ، أدخل الإبرة في الحوض الكلوي بالقرب من الحالب القريب ، مع الحرص على عدم إزعاجها بمجرد وضعها. إجراء حقن الصبغة في الكلى لتحديد انسداد المسالك البولية.
يحدد الإدخال المناسب لإبرة في الحوض الكلوي نجاح هذا الاختبار. يجب إدخال إبرة في الحوض الكلوي باتجاه الحالب ، ولا تمر عبر الكلى ولا باتجاه الأوعية الدموية.
ارفع المحقنة لأعلى حوالي 20 سم لتوفير الضغط الهيدروستاتيكي واترك 15 إلى 16 ميكرولترا من محلول الصبغة يتدفق. بعد ذلك ، راقب اللون الأزرق للصبغة بدءا من الحوض الكلوي أولا ، ثم بطول الحالب ، وأخيرا في تجويف المثانة. ضع المحقنة لأسفل لإيقاف تدفق الصبغة وإزالة الإبرة من الكلى. قم بعمل سجل لاستسقاء الكلى في الكلى ، والحالب المائية ، والموضع النهائي لمحلول الصبغة في دفتر ملاحظات المختبر.
أخيرا ، قم بإجراء حقن الكلية المقابلة واترك الصبغة تتدفق لمدة 20 ثانية إجمالا. التقط صورا للكلى والحالب والمثانة التي تم تتبعها بمحلول الصبغة باستخدام الكاميرا وبرنامج التصوير المتصل بمجهر مجسم.