تلطيخ الخلايا بالحمض الدوري: تقنية في المختبر للكشف عن مستويات الجليكوجين في خلايا الدم المحيطية أحادية النواة

خلايا الدم المحيطية أحادية النواة ، أو PBMCs ، هي خلايا دم الدورة الدموية ذات النوى المفردة الكبيرة ، والتي تتكون من الخلايا الليمفاوية B و T ، والخلايا القاتلة الطبيعية ، والخلايا الوحيدة ، والخلايا المتغصنة. تخزن PBMCs فائض الجلوكوز في شكل بوليمري مثل الجليكوجين - عديد السكاريد المتفرع - في السيتوبلازم.

للكشف عن وجود الجليكوجين في PBMCs ، قم بإعداد مسحة موحدة من PBMCs المعزولة على شريحة زجاجية. عالج الخلايا بالفورمالين - محلول مثبت يربط الجزيئات الحيوية الخلوية ، ويحافظ على السلامة الهيكلية ل PBMCs.

اغمر الشريحة جزئيا في محلول الأميليز. يدخل هذا الإنزيم إلى الخلايا ويتحلل الجليكوجين في الخلايا المعالجة. ينتج عن هذا مجموعتين متميزتين من الخلايا - الخلايا المعالجة بالإنزيم ، ونقص الجليكوجين ، والخلايا الغنية بالجليكوجين غير المعالجة بالأميليز.

قم بتراكبها بمحلول حمضي دوري يحول مجموعات الهيدروكسيل من جزيئات الجليكوجين إلى ألدهيدات.

اشطف الشريحة بالماء لوقف تفاعل الأكسدة وإزالة الحمض الدوري الزائد. عالج الشريحة باستخدام كاشف شيف ، الذي يتفاعل مع مجموعات الألدهيد من الجليكوجين الدوري المعالج بالحمض ، مما ينتج عنه مركب غير قابل للذوبان بلون أرجواني.

قم بتطبيق وسائط التركيب لكبح الخلايا أثناء التصوير. ضع غطاء لنشر وسائط التثبيت على سطح الشريحة بالكامل للحصول على تصور أفضل. تخيل الخلايا