كروماتوغرافيا التفاعل الكارهة للماء المعتمدة على الكالسيوم: تقنية لتنقية البروتينات المرتبطة بالكالسيوم بناء على التفاعلات الكارهة للماء

كروماتوغرافيا التفاعل الكارهة للماء المعتمدة على الكالسيوم هي تقنية لفصل البروتينات المرتبطة بالكالسيوم عن البروتينات الأخرى غير المرتبطة بالكالسيوم في العينة.

للبدء ، خذ عمودا كروماتوغرافيا مجمعا مسبقا يحتوي على مصفوفة من حبات الاغاروز المتشابكة المشتقة من مجموعات الفينيل الكارهة للماء لتسهيل التفاعلات مع البروتينات المستهدفة. قم بتوازنها مع مخزن مؤقت ملزم يحتوي على تركيز عال جدا من أيونات الكالسيوم لتحقيق أقصى قدر من تفاعل الراتنج والبروتين المستهدف أثناء تحميل العينة اللاحق.

خذ عينة تحتوي على خليط البروتين المخلل في الكلى واستكملها بتركيز متساو من كلوريد الكالسيوم كما هو مستخدم في المخزن المؤقت الملزم لتوازن العمود. هذا يزيد من ارتباط البروتين بالعمود.

ترتبط أيونات الكالسيوم ببروتينات معينة في المحللة ، مما يؤدي إلى تغيير توافقي في جزيئات البروتين هذه مما يعرض مناطقها الكارهة للماء.

قم بتصفية الخليط لفصل الشوائب والركام لمنعها من انسداد العمود. قم بتحميل هذا الترشيح في العمود المتوازن مسبقا. تتفاعل البروتينات ذات المناطق الكارهة للماء المكشوفة مع مجموعات الفينيل الكارهة للماء المقابلة للراتنج.

اغسل باستخدام المخزن المؤقت الملزم المحتوي على الملح لإزالة البروتينات غير المرتبطة لتعزيز نقاء العينة في الخطوات اللاحقة. قم بتمرير المخزن المؤقت للشطف الخالي من كلوريد الكالسيوم الذي يحت