الرحلان الكهربائي الشعري لتقارب تحول الحركة: طريقة لتحليل تفاعلات العينة والترابط اعتمادا على الهجرة التفاضلية لمجمعات البروتين والترابط

ترتبط الروابط ، مثل أيونات المعادن ، بشكل غير تساهمي ببروتين معين ، وتشكل مركبا أيونيا من البروتين والمعدن. يغير هذا الارتباط الشحنة الإجمالية للبروتين ، مما يسمح بتوصيف هذه المجمعات باستخدام الرحلان الكهربائي الشعري للتقارب.

للبدء ، خذ شعيرات دموية زجاجية رقيقة ومكيفة مسبقا مع مجموعات سيلانول مشحونة على السطح الداخلي. اشطف الشعيرات الدموية بمحلول EDTA. EDTA هو عامل مخلب يزيل أي شوائب أيونية معدنية. الآن ، قم بحقن محلول العينة الذي يحتوي على البروتين المطلوب في الشعيرات الدموية من نهايته الموجبة أو الأنود.

قم بتطبيق جهد عال لإنشاء تدفق كهربائي تناضحي ، مما يجبر البروتينات في شكلها الأصلي مع الشحنات الكامنة على التحرك داخل الشعيرات الدموية باتجاه الكاثود. سجل نمط هجرة البروتينات غير المرتبطة من الشعيرات الدموية.

بعد ذلك ، أدخل محلول ربط محدد في الشعيرات الدموية مع عينات البروتين ، وقم بتطبيق نفس الجهد. داخل الشعيرات الدموية ، ترتبط جزيئات الترابط بشكل غير تساهمي بالبروتين المستهدف ، وتشكل مجمعات.

يؤدي هذا إلى تغيير توافقي في البروتينات ، مما يؤدي إلى تغيير في شحناتها المتأصلة ، مما يؤثر على نسبة الشحنة إلى الحجم. تعدل هذه التغييرات تفاعلاتها مع السطح المشحون للشعيرات الدموية ، مما يؤدي إلى تدفقها بشكل مختلف مقارنة بالبروتين غير المرتبط.

سجل هذه التغييرات في الحركة الكهربية ، والتي ترتبط بقوة التفاعل بين البروتين والترابط.

بعد تحضير طريقة القياسات بدون روابط ، قم بإعداد طريقة القياسات باستخدام الروابط ، أولا باستخدام محلول EDTA 0.1 مولار لشطف الشعيرات الدموية عند 2.5 بار لمدة دقيقة واحدة. ثم استخدم الماء منزوع الأيونات لشطف الشعيرات الدموية. بعد ذلك ، قم بموازنة الشعيرات الدموية باستخدام محلول الترابط لشطفها عند 2.5 بار لمدة 1.5 دقيقة.

بعد ذلك ، قم بحقن محلول الأسيتانيليد عند 0.05 بار لمدة 6 ثوان ، وقم بتغيير قوارير المدخل والمخرج إلى قوارير العازلة المحتوية على الترابط. ضع 0.05 بار لمدة 2.4 ثانية ، من أجل دفع محلول الأسيتانيليد إلى الداخل من طرف الشعيرات الدموية. ضع 10.0 كيلو فولت لمدة 6 دقائق ، واكتشف ذروة الأسيتانيليد بطول موجي يبلغ 200 نانومتر.

بعد شطف الشعيرات الدموية ب EDTA ، والماء منزوع الأيونات ، ومحلول الترابط كما كان من قبل ، قم بحقن عينة البروتين ، وقم بتغيير قوارير المدخل والمخرج إلى قوارير عازلة جديدة تحتوي على الترابط. في النهاية ، كرر أخذ القياسات مع الروابط وبدونها.