Name: تشكيل الأنبوبة Matrigel القائم على الفحص لتقييم نشاط الخلايا السرطانية مكون للأوعية (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min
Description: تعلم تقييم نشاط الأوعية الدموية للخلايا السرطانية باستخدام فحص تشكيل الأنابيب على Matrigel. تُساعد هذه الطريقة الباحثين على دراسة القدرة الإنجيوجينية في المختبر.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وأيد هذا العمل من قبل لجنة التحقيق الوطنية R01 CA120659 (RS).

1. تشكيل الأنبوبة Matrigel القائم على الفحص لتقييم نشاط الخلايا السرطانية مكون للأوعية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ونمت الخلايا السرطانية في الدماغ مثل U87 الخلايا خلايا سرطان الجلد B16F1 ، وسرطان الثدي MDA - MB - 435 ، وخلايا سرطان القولون في HCT116 DMEM تستكمل مع FBS 10 ٪ والبنسلين / الستربتوميسين (جميع من Invitrogen : إعداد الخلايا السرطانية والخلايا البطانية الاوعية الدموية الدقيقة ). وكانت الخلية البطانية مثقف خط خلايا بطانة الاوعية الدموية الدقيقة (HMVECs) في EBM2 المتوسطة (Lonza) تستكمل مع هيدروكورتيزون ميكروغرام / 1 مل و 1 نانوغرام / مل عامل نمو البشرة ، و 10 ٪ FBS والبنسلين / الستربتوميسين. وكانت تغسل مع الخلايا ثلاث مرات منفصلة مع برنامج تلفزيوني و0.05 ٪ التربسين / EDTA (Invitrogen). بعد الطرد المركزي مع 2000 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق ، وكانت الخلية الكريات غسلها مرة أخرى مع برنامج تلفزيوني. ثم تم فرز الخلايا مكعبات مع عدادة الكريات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Matrigel إعداد : حدث قسامة من النمو وانخفاض عامل تحسنت Matrigel دينار بحريني (العلوم البيولوجية) حتى في درجة حرارة الغرفة. قبل إذابة تماما ، ونقلت على الجليد وكان يحتفظ السائل على الثلج لمدة لا تقل عن 10 دقيقة. ثم كان مطلي 50 ميكرولتر من Matrigel إلى 96 - جيدا لوحات على المستوى الأفقي الذي يسمح لتوزيع Matrigel بالتساوي ، وحضنت لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشكيل أنبوب : خلايا كانت (1-2 × 10 4) إعادة العالقة مع المصل خالية DMEM عن الخلايا السرطانية أو EBM - 2 لخلايا بطانة الأوعية الدموية ، وتحميلها على الجزء العلوي من Matrigel. إذا تم استخدام هذا الاختبار لقياس تأثير بعض العوامل على التنمية أنبوبية ، وأضيفت هذه العوامل (محفزات أو مثبطات) إلى المتوسطة المصل الحرة. يرد كل مجموعة الشرطي 4-6 الآبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الصور وتحليل البيانات : في الحضانة وبعد 37 درجة مئوية خلال الليل ، تم تحليل كل بئر مباشرة تحت المجهر. إذا كانت هناك حاجة لتثبيت الأنابيب ، وأضيف بلطف 100 ميكرولتر من 10 ٪ محلول ملحي المستندة الفورمالين وعشر دقائق في وقت لاحق ، انها مستعدة لتحليلها. تحت المجهر مع النقيض من المرحلة 10X ، تم تصوير الأنابيب في كل حقل ، وكان يحسب بمتوسط ​​نبيبات 3-5 حقول عشوائية في كل بئر. </li></ol> 2. ممثل النتائج : واستخدمت HMVECs كعنصر تحكم إيجابية ، حيث وضعت هذه الأنابيب واضحة من أجسام الخلايا التي تربط ممدود لتشكيل شبكة مضلع. B16F1 ، U87 ، ونجمة داود الحمراء ميغابايت 435 الخلايا المتقدمة نبيبات الأوعية الدموية مشابهة لتلك التي شكلتها HMVECs ، ولكن لم HCT116 الخلايا (الشكل 1). تم اختبار أنبوب تشكيل خلية تعتمد على الجرعة في U87 الخلايا. شكلت خلايا 10000 كما هو موضح في الشكل 2 ، نبيبات وقفها. مرة واحدة وتضاعف الخلايا ، وشبكة الأوعية الدموية صلبة مماثلة لتلك التي ظهرت في HMVECs. في المقابل ، فشل الخلايا أقل من 5000 لتشكيل النمط الظاهري في الأوعية الدموية. <img src="/files/ftp_upload/3040/3040fig1.jpg" alt="الشكل 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 1"> الشكل 1. الأنبوبة الناجم عن تشكيل HMVECs ، U87 ، MDA - MB - 435 ، وخلايا B16F1 ، ولكن لا تم تحميلها HCT116 خلايا جميع الخلايا (2 × 10 4) على Matrigel وحضنت بين عشية وضحاها. وكانت المصورة باستخدام الأنابيب النقيض المرحلة. واستخدمت HMVECs كعنصر تحكم إيجابية. وعرضت ممثلة 3-5 المجالات. شريط : 100 ميكرومتر. <img src="/files/ftp_upload/3040/3040fig2.jpg" alt="الشكل 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 2"> واستخدمت الشكل 2. U87 الخلية التي يسببها نبيبات في عدد الخلايا التي تعتمد على الطريقة. أعداد مختلفة من الخلايا U87 كما هو مبين في زوايا لتشكيل الأنبوب. كانت تستخدم لمراقبة HMVECs إيجابية. شريط : 100 ملم.

<ol><li>Shao, R., Guo, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+microvascular+endothelial+cells+immortalized+with+human+telomerase+catalytic+protein%3A+a+model+for+the+study+of+in+vitro+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+%26+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Human microvascular endothelial cells immortalized with human telomerase catalytic protein: a model for the study of in vitro angiogenesis.</a> Biochemical & Biophysical Research Communications. 321, 788-794 (2004).</li>
<li>Ribeiro, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemostatic+properties+of+the+SV-40+transfected+human+microvascular+endothelial+cell+line+%28HMEC-1%29.+A+representative+in+vitro+model+for+microvascular+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Hemostatic properties of the SV-40 transfected human microvascular endothelial cell line (HMEC-1). A representative in vitro model for microvascular endothelium.</a> Thromb Res. 79, 153-1561 (1995).</li>
<li>Ades, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HMEC-1%3A+establishment+of+an+immortalized+human+microvascular+endothelial+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">HMEC-1: establishment of an immortalized human microvascular endothelial cell line.</a> J Invest Dermatol. 99, 683-690 (1992).</li>
<li>Shao, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acquired+expression+of+periostin+by+human+breast+cancers+promotes+tumor+angiogenesis+through+up-regulation+of+vascular+endothelial+growth+factor+receptor+2+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+%26+Cellular+Biology%22%5BJournal%5D)">Acquired expression of periostin by human breast cancers promotes tumor angiogenesis through up-regulation of vascular endothelial growth factor receptor 2 expression.</a> Molecular & Cellular Biology. 24, 3992-4003 (2004).</li>
<li>Shao, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((YKL-40%2C+a+secreted+glycoprotein%2C+promotes+tumor+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">YKL-40, a secreted glycoprotein, promotes tumor angiogenesis.</a> Oncogene. 28, 4456-4468 (2009).</li>
<li>Basu, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+role+for+cyclooxygenase-2+in+regulating+vascular+channel+formation+by+human+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">A novel role for cyclooxygenase-2 in regulating vascular channel formation by human breast cancer cells.</a> Breast Cancer Research. 8, R69-R69 (2006).</li>
<li>Scavelli, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vasculogenic+mimicry+by+bone+marrow+macrophages+in+patients+with+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Vasculogenic mimicry by bone marrow macrophages in patients with multiple myeloma.</a> Oncogene. 27, 663-674 (2008).</li>
<li>El Hallani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+alternative+mechanism+in+glioblastoma+vascularization%3A+tubular+vasculogenic+mimicry%5BTitle%5D)+AND+%22+Brain%22%5BJournal%5D)">A new alternative mechanism in glioblastoma vascularization: tubular vasculogenic mimicry.</a> Brain. 133, 973-982 (2010).</li>
<li>Maniotis, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+channel+formation+by+human+melanoma+cells+in+vivo+and+in+vitro%3A+vasculogenic+mimicry%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Vascular channel formation by human melanoma cells in vivo and in vitro: vasculogenic mimicry.</a> American Journal of Pathology. 155, 739-752 (1999).</li>
<li>Hendrix, M. J., Seftor, E. A., Hess, A. R., Seftor, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vasculogenic+mimicry+and+tumour-cell+plasticity%3A+lessons+from+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">Vasculogenic mimicry and tumour-cell plasticity: lessons from melanoma.</a> Nature Reviews Cancer. 3, 411-421 (2003).</li>
<li>Folberg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+cell+plasticity+in+uveal+melanoma%3A+microenvironment+directed+dampening+of+the+invasive+and+metastatic+genotype+and+phenotype+accompanies+the+generation+of+vasculogenic+mimicry+patterns%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Tumor cell plasticity in uveal melanoma: microenvironment directed dampening of the invasive and metastatic genotype and phenotype accompanies the generation of vasculogenic mimicry patterns.</a> American Journal of Pathology. 169, 1376-1389 (2006).</li>
<li>Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostate-specific+membrane+antigen+directed+selective+thrombotic+infarction+of+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Prostate-specific membrane antigen directed selective thrombotic infarction of tumors.</a> Cancer Research. 62, 5470-5475 (2002).</li>
<li>Sood, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinical+significance+of+tumor+cell-lined+vasculature+in+ovarian+carcinoma%3A+implications+for+anti-vasculogenic+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Biology+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">The clinical significance of tumor cell-lined vasculature in ovarian carcinoma: implications for anti-vasculogenic therapy.</a> Cancer Biology & Therapy. 1, 661-664 (2002).</li>
<li>Shirakawa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemodynamics+in+vasculogenic+mimicry+and+angiogenesis+of+inflammatory+breast+cancer+xenograft%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Hemodynamics in vasculogenic mimicry and angiogenesis of inflammatory breast cancer xenograft.</a> Cancer Research. 62, 560-566 (2002).</li>
<li>Ruf, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+role+of+tissue+factor+pathway+inhibitors+1+and+2+in+melanoma+vasculogenic+mimicry%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Differential role of tissue factor pathway inhibitors 1 and 2 in melanoma vasculogenic mimicry.</a> Cancer Research. 63, 5381-5389 (2003).</li>
<li>Seftor, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cooperative+interactions+of+laminin+5+gamma2+chain%2C+matrix+metalloproteinase-2%2C+and+membrane+type-1-matrix%2Fmetalloproteinase+are+required+for+mimicry+of+embryonic+vasculogenesis+by+aggressive+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Cooperative interactions of laminin 5 gamma2 chain, matrix metalloproteinase-2, and membrane type-1-matrix/metalloproteinase are required for mimicry of embryonic vasculogenesis by aggressive melanoma.</a> Cancer Research. 61, 6322-6327 (2001).</li>
<li>Shirakawa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vasculogenic+mimicry+and+pseudo-comedo+formation+in+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Vasculogenic mimicry and pseudo-comedo formation in breast cancer.</a> International Journal of Cancer. 99, 821-828 (2002).</li>
</ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

من أجل هذا الاختبار أن تنجح ، يجب اختبار نوعية Matrigel الأولى. ويمكن الحصول على عينة صغيرة من العلوم البيولوجية دينار بحريني إلى ما قبل تشغيل الفحص باستخدام HMVECs. قد منتجات مختلفة دفعة عرض الصفات التي تختلف بعض الكثير لا توفر شرط الأمثل لتشكيل الأنبوب. ثانيا ، ينبغي تجنب أي فقاعات عندما يتم تحميل وقسامة من Matrigel في لوحات 96 - جيدا ، لأن الفقاعات يمكن أن تعطل تشكيل نبيب. إذا تم العثور على فقاعات صغيرة في بئر ، يمكن Matrigel انتقلت على الفور إلى أنابيب Matrigel الأصلية التي يج...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم كاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 11995 </td></tr><tr><td> FBS </td><td> Invitrogen </td><td> 16000-044 </td></tr><tr><td> عامل نمو مخفض Matrigel </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 47743-720 </td></tr><tr><td> EBM2 طقم </td><td> Lonza </td><td> CC - 3156 </td></tr><tr><td> نيكون المجهر ECLIPSE TS100 </td><td> نيكون </td><td></td></tr></tbody></table>

تشكيل الأنبوبة matrigel القائم على الفحص لتقييم نشاط الخلايا السرطانية مكون للأوعية

A Matrigel-Based Tube Formation Assay to Assess the Vasculogenic Activity of Tumor Cells

على مدى العقود العديدة الماضية ، وهي مقايسة تشكيل باستخدام أنبوب عامل نمو مخفض تم Matrigel يعملون عادة للتدليل على النشاط عائية من خلايا بطانة الأوعية الدموية في المختبر 1-5. ومع ذلك ، فقد أظهرت أدلة متزايدة مؤخرا ان لا يقتصر هذا الاختبار لاختبار سلوك الأوعية الدموية للخلايا بطانة الأوعية الدموية. بدلا من ذلك ، كما تم استخدامها لاختبار قدرة عدد من الخلايا السرطانية لتطوير النمط الظاهري الأوعية الدموية 6-8. وهذه القدرة بما يتفق مع سلوكهم مكون للأوعية التي تم تحديدها في الحيوانات xenotransplanted ، وهي عملية تعرف باسم مكون للأوعية المحاكاة (VM) 9. هناك العديد من الأدلة تثبت أن الخلية السرطانية بوساطة VM تلعب دورا حيويا في تطوير الورم ، ومستقلة عن الأوعية الدموية الخلية البطانية 6 ، 10-13. على سبيل المثال ، تم العثور على الخلايا السرطانية للمشاركة في الدم perfused ، وتشكيل قناة الأوعية الدموية في عينات من الانسجة من المرضى سرطان الجلد وورم أرومي دبقي 8 ، 10 ، 11. هنا ، وصفنا هذا الاختبار شبكة أنبوبية ، باعتبارها أداة مفيدة في تقييم نشاط مكون للأوعية من خلايا الورم. وجدنا أن بعض خطوط الخلايا السرطانية مثل سرطان الجلد B16F1 خلايا ورم أرومي دبقي U87 خلايا ، وسرطان الثدي MDA - MB - 435 الخلايا قادرة على تشكيل الأنابيب الأوعية الدموية ، ولكن البعض لا مثل سرطان القولون HCT116 الخلايا. وعلاوة على ذلك ، فإن هذا النمط الظاهري الأوعية الدموية تعتمد على الأرقام الخلية مطلي على Matrigel. لذا ، قد يكون هذا الفحص بمثابة أداة قوية لفحص الأوعية الدموية المحتملة لمجموعة متنوعة من أنواع الخلايا بما فيها خلايا الأوعية الدموية ، والخلايا السرطانية فضلا عن خلايا أخرى.

ويستخدم فحص أنبوب تشكيل لتقييم نشاط الأوعية الدموية للخلايا السرطانية.

تشكيل الأنبوبة Matrigel القائم على الفحص لتقييم نشاط الخلايا السرطانية مكون للأوعية

على مدى العقود الماضية، استُخدم عادةً مقايسة تكوين الأنابيب باستخدام Matrigel المختزل لعوامل النمو لإثبات القدرة الوعائية...

الهدف العام من التجربة التالية هو قياس تكوين الأنابيب لأنواع مختلفة من الخلايا الورمية في المختبر (in vitro) كوسيلة لتقدير النشاط الوعائي في الجسم الحي (in vivo). ويتم تحقيق ذلك عن طريق إضافة الخلايا الورمية إلى ماتريجيل (matrigel) من أجل تحفيز تكوين الأنابيب. وكخطوة ثانية.تُحضن الخلايا الموجودة على matri gel طوال الليل عند 37 درجة مئوية، مما يسمح بحدوث عملية تكوين الأنابيب. بعد ذلك، يتم تصوير الأنابيب التي أنتجها كل نوع من الخلايا. ومن أجل تحديد متوسط عدد الأنابيب التي شكلها كل نوع من الخلايا كمياً، يتم الحصول على نتائج توضح القدرة الكامنة لهذه الخلايا على تكوين الأوعية الدموية في الجسم الحي بناءً على نماذج الأورام المزروعة غريبة النوع (xenograft).يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على أسئلة جوهرية في مجال أبحاث السرطان، مثل كيفية قياس النشاط الوعائي في المختبر (in vitro). لتحضير الخلايا الورمية، ابدأ بزراعة خلايا الميلانوما UAD seven، أو B 16 F1 MDA، أو MB 4 35، أو خلايا القولون HCT one 16 في وسط DMEM مكمل بـ 10% FBS والبنسلين. يتم زراعة الخلايا البطانية الوعائية الدقيقة البشرية (H ECS) في وسط EBM two مكمل بـ 1 µg/mL من الهيدروكورتيزون، و 1 ng/mL من عامل نمو البشرة، و 10% FBS والبنسلين.اغسل الخلايا باستخدام PBS، ثم افصلها باستخدام 0.05% trypsin EDTA، وقم بترسيب الخلايا عند 2000 RRP M لمدة خمس دقائق. بعد ذلك، اغسلها مرة أخرى باستخدام PBS. قم بعد الخلايا باستخدام مقياس كرات الدم (hemocytometer) لتحضير الـ matrigel الدافئ.يتم تدفئة 1 مل من الـ Matrigel المختزل لعوامل النمو حتى درجة حرارة الغرفة، ثم يوضع فوراً على الثلج لمدة 10 دقائق. بعد ذلك، يتم سحب 50 µL ونقلها بواسطة الماصة إلى آبار طبق يحتوي على 96 بئراً.ولتحضين الطبق عند 37 °C لمدة 30 دقيقة، قم بإعادة تعليق 1 إلى 2 × 10⁵ من الخلايا الورمية أو الخلايا البطانية في DMEM أو eBM2 على التوالي، ثم قم بتحميلها فوق الـ matrigel. وفي حال دراسة تأثيرات الكواشف على تطور الأنابيب، أضف الكاشف إلى الوسط الخالي من المصل وقم بالتحضين طوال الليل عند 37 °C. ولتحليل الصور، أضف 10 µL من محلول فورمالين وملحي بتركيز 10% لمدة 10 دقائق.ثم قم بالتصوير باستخدام مجهر تباين الأطوار تحت عدسة شيئية بقوة 10x. قم بعدد الأنيبيبات في ثلاثة إلى خمسة حقول عشوائية من كل بئر، ثم استخرج المتوسط الحسابي هنا.استُخدمت خلايا HMCs كضابط موجب نظرًا لأن هذه الأنيبيبات تطورت من أجسام خلوية مستطيلة وواضحة اتصلت ببعضها لتشكل شبكة مضلعة. كما طورت خلايا B 16 F1 U 87 و MDA MB 4 35 أنيبيبات وعائية مشابهة لتلك التي شكلتها خلايا H ecs، بينما لم تفعل خلايا HCT one 16 ذلك.تم اختبار تكوين الأنابيب المعتمد على جرعة الخلايا في خلايا U 87. وكما هو موضح في هذا الشكل، شكلت 10,000 خلية أنابيب غير متصلة بمجرد مضاعفة عدد الخلايا. وكانت الشبكة الوعائية الصلبة مماثلة لتلك التي شوهدت في H ecs.وفي المقابل، فإن البدء بأقل من 5,000 خلية أدى إلى الفشل في تكوين نمط ظاهري وعائي. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إعداد تجربة مقايسة تشكل الأنابيب باستخدام الماتريجيل بنجاح لقياس تشكل الأنابيب للخلايا السرطانية في المختبر.

a-matrigel-based-tube-formation-assay-to-assess-vasculogenic-activity

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

مقايسة تشكيل أنبوب هو، طريقة للقياس لقياس سريع في المختبر الأوعية الدموية. يتم الجمع بين الخلايا البطانية مع وسائل الإعلام مشروطة ومطلي على استخراج الغشاء القاعدي. يحدث تشكيل أنبوب خلال ساعات والأنابيب التي شكلت حديثا كميا بسهولة.

البطانية أنبوب تشكيل خلية الفحص ل<em&gt; في المختبر</em&gt; دراسة الأوعية الدموية

نصف مقايسة matrigel لتوضيح إمكانات تولد الأوعية الدموية لمجموعة من العوامل التي تفرزها الخلايا السرطانية باستخدام طريقتين للتصوير التكميلي ، الموجات فوق الصوتية والفحص المجهري. يتم استخدام matrigel ، وهو هلام مقلد خارج الخلية (ECM) ، لإدخال المضيف (الفأر) بعوامل الأوعية الدموية التي تفرز في الوسائط التكييف (CM).

مراقبة وظائف والصرف من الأوعية الدموية تجنيده من قبل العوامل التي يفرزها الخلايا المولدة للورم النمو السريع

تصف هذه المخطوطة مقايسة تكوين الأنبوب لتحديد تأثيرات مركب أو حالة معينة على تكوين الأوعية باستخدام تكوين أنبوب الخلية البطانية في بيئة خاضعة للرقابة.

الاستراتيجية غشائي أنبوب خلية تشكيل الفحص: مقارنة خارج الخلية مصفوفة وعامل نمو مخفض خارج الخلية مصفوفة

وتعرض هذه الورقة إجراء شامل لتقييم في المختبر ما إذا كان يوجد ورم الكلاسيكية تولد الأوعية في هيمانجيوبلاستوماس (HBs) ودورها في ميزانيات. وتسليط الضوء على الطابع المعقد لغبطة-نيوفاسكولاريزيشن النتائج توحي بأن هذا النموذج الموحد لتولد الأوعية فقط إليه تكميلية في غبطة-نيوفاسكولاريزيشن.

إجراء شامل تقييم أداء نيوفاسكولاريزيشن هيمانجيوبلاستوما المفترضة استخدام كروي تنتشر في التحليل في المختبر

هنا، نقوم بتقييم آثار استخراج المياه من روتا graveolens على تشكيل شبكة السفينة باستخدام اختبار تشكيل أنبوب على مصفوفة الطابق السفلي الهلامية.

هوفيك أنبوب تشكيل التبوّع تقييم تأثير المنتجات الطبيعية على تكوين الأوعية الدموية

الذرية البطانية المستمدة من الخلايا الجذعية متعددة القوى المستحثة (iPSC-EPs) لديها القدرة على إحداث ثورة في علاجات أمراض القلب والأوعية الدموية وتمكين خلق نماذج أكثر إخلاصا لأمراض القلب والأوعية الدموية. هنا، يتم وصف تغليف iPSC-EPs في البيئات الدقيقة الكولاجين ثلاثية الأبعاد (3D) وتحليل كمي للإمكانات الأوعية الدموية لهذه الخلايا.

نموذج ثلاثي الأبعاد في المختبر وخط أنابيب حسابي لتحديد الإمكانات الأوعية الدموية لالذرية البطانية المشتقة من iPSC

يستخدم هذا الفحص الخلايا الجذعية الجنينية للفأر المتمايزة إلى أجسام جنينية مستزرعة في هلام الكولاجين 3D لتحليل العمليات البيولوجية التي تتحكم في تكوين الأوعية الدموية في المختبر. يمكن تطبيق هذه التقنية لاختبار الأدوية ، ونمذجة الأمراض ، ودراسة جينات معينة في سياق عمليات الحذف القاتلة من الناحية الجنينية.

في المختبر مقايسة تنبت ثلاثية الأبعاد لتكوين الأوعية الدموية باستخدام الخلايا الجذعية الجنينية للفأر لنمذجة أمراض الأوعية الدموية واختبار الأدوية

يمكن للطريقة المعروضة هنا تقييم تأثير الكواشف على تكوين الأوعية الدموية أو نفاذية الأوعية الدموية في الجسم الحي دون تلطيخ. تستخدم الطريقة حقن ديكستران-FITC عبر الوريد الخلفي لتصور الأوعية الجديدة أو تسرب الأوعية الدموية.

تعديل في الجسم الحي مصفوفة هلام المكونات مقايسة لدراسات تولد الأوعية

يسمح البروتوكول الحالي باستعادة الهياكل الشبيهة بالأنبوب التي تشكلت في مقايسة تكوين الأوعية الدموية الكلاسيكية في المختبر حيث تنظم الخلايا ، مثل خلايا الأرومة الغاذية ، في هياكل شبيهة بالشعرات الدموية فوق طبقة من مصفوفة الغشاء القاعدي خارج الخلية. تستخدم الهياكل المستردة لعزل الحمض النووي الريبي والبروتين لمختلف التحليلات الكيميائية الحيوية.

استعادة خلايا الأرومة الغاذية من مقايسة تكوين الأوعية الدموية لتحليل تعبير علامة التمايز

تقدم هذه الدراسة مقايسة هجرة جرح الخدش ثنائية الأبعاد (2D) ومقايسة تنبت كروية ثلاثية الأبعاد (3D) ، جنبا إلى جنب مع طرق تحليل المصب الخاصة بكل منها ، بما في ذلك استخراج الحمض النووي الريبي والكيمياء المناعية ، كمقايسات مناسبة لدراسة تكوين الأوعية في المختبر.

التحقيق في تكوين الأوعية الدموية على المستوى الوظيفي والجزيئي من خلال الاستفادة من مقايسة هجرة جرح الخدش ومقايسة تنبت كروية

تعلم تقييم نشاط الأوعية الدموية للخلايا السرطانية باستخدام فحص تشكيل الأنابيب على Matrigel. تُساعد هذه الطريقة الباحثين على دراسة القدرة الإنجيوجينية في المختبر.

تشكيل الأنبوبة Matrigel القائم على الفحص لتقييم نشاط الخلايا السرطانية مكون للأوعية

استكشف المزيد من الفيديوهات