فحص امتصاص الكالسيوم في الميتوكوندريا: طريقة قائمة على قارئ الألواح لقياس امتصاص الكالسيوم في الميتوكوندريا المعزولة

تمتص الميتوكوندريا الكالسيوم العصاري الخلوي لأنه ضروري لأدائها بشكل صحيح.

يؤدي

التدفق المفرط للكالسيوم إلى مصفوفة الميتوكوندريا - الحمل الزائد للكالسيوم في الميتوكوندريا - إلى فتح قناة غشاء داخلية ، أو مسام انتقال نفاذية الميتوكوندريا ، أو MPTP. تسمح المسام المفتوحة بزيادة تدفق الكالسيوم من الميتوكوندريا ، مما يتسبب في خلل في الميتوكوندريا.

لقياس امتصاص الكالسيوم في الميتوكوندريا ، ابدأ بصفيحة متعددة الآبار تحتوي على ميتوكوندريا معزولة معلقة في مخزن مؤقت مناسب. استكمل البئر بالبيروفات والمالات ، وهما ركائز منتجة ل ATP. اخلطي محتويات البئر واحتضنها.

أثناء الحضانة ، يتم تحويل البيروفات والمالات إلى ATPs ، مما ينشط الميتوكوندريا. أضف محلولا يحتوي على جزيئات صبغة فلورية غير منفذة لغشاء الميتوكوندريا وحساسة للكالسيوم. قم بتوزيع المخزن المؤقت المحتوي على الكالسيوم إلى الميتوكوندريا المنشطة.

راقب مضان الكالسيوم في الصبغة حيث ترتبط جزيئات الصبغة بالكالسيوم الحر في المخزن المؤقت.

أضف المزيد من أيونات الكالسيوم لبدء تدفق الكالسيوم في الميتوكوندريا. يقلل كالسيوم الميتوكوندريا المتزايد تدريجيا من أيونات الكالسيوم في المخزن المؤقت ، مما يقلل من مضان الكالسيوم في الصبغة.

بمجرد أن تصل الميتوكوندريا إلى أقصى قدرة لها على حمل الكالسيوم ، فإن الإضافة الإضافية لأيونات الكالسيوم تفتح قنوات MPTP وتستور