الفحص اللوني للقياس الكمي للاكتات في عينات الاختبار

0 views • 3:08 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في الخلايا الحية، في ظل الظروف اللاهوائية، يحول إنزيم نازعة هيدروجين اللاكتات البيروفات - وهو منتج نهائي لتحلل السكر - إلى لاكتات - مستقلب رئيسي. تعكس كمية اللاكتات المنتجة في الخلايا حالة التمثيل الغذائي لها.

لتحديد تركيز اللاكتات داخل الخلايا ، ابدأ بعينة اختبار من محللة الخلايا الخيطية الخالية من البروتين. استكمل الآبار الأخرى لصفيحة متعددة الآبار بمحلول لاكتات بتركيزات مختلفة معروفة.

يفتقر المحللة إلى جميع الإنزيمات البروتينية ، بما في ذلك نازعة هيدروجين اللاكتات الذاتية ، مما يضمن القياس الكمي الدقيق لللاكتات.

أضف مخزن مخزن لاکتات في كل بئر للحفاظ على درجة الحموضة المناسبة للنشاط الأنزيمي الأمثل. استكمل الآبار بمزيج تفاعلي يحتوي على إنزيم نازعة هيدروجين اللاكتات ، ونيكوتيناميد الأدينين ثنائي النوكليوتيد - NAD - وهو إنزيم مساعد ، ومسبار قياس الألوان واحتضانه.

أثناء الحضانة ، يحفز نازعة هيدروجين اللاكتات أكسدة اللاكتات الخلوية إلى البيروفات ، مع تقليل NAD في وقت واحد إلى NADH. يتفاعل NADH المتولد مع المسبار اللوني لإنتاج منتج أرجواني.

قياس امتصاص المحلول الأرجواني طيفيا لعينة الاختبار ومعايير اللاكتات عند 570 نانومتر. ارسم قيم الامتصاص لمعايير اللاكتات وقم بإنشاء منحنى المعايرة.

أخيرا ، قارن قيمة امتصاص العينة بمعايير اللاكتات لتحديد كمية اللاكتات الموجودة في عينة الاختبار.

لقياس تركيز اللاكتات ، استخدم مجموعة مقايسة القياس اللوني لإجراء تحليل مكرر لعينات الاختبار. أضف 10 ميكرولترات من عينات الاختبار إلى كل بئر من صفيحة 96 بئرا ، ثم أضف مخزن فحص اللاكتات إلى كل عينة لضبط الحجم إلى 50 ميكرولترا.

تمييع معيار 100 ملليمولار لتر (+) -لاكتات مع مخزن مقايسة اللاكتات إلى 1 ملليمول. ثم ، في سلسلة من الآبار ، أضف 0 و 2 و 4 و 6 و 8 و 10 ميكرولتر من معيار L (+) -Lactate المخفف. أضف 50 ميكرولترا من مزيج التفاعل في كل بئر ، واحتضنه في درجة حرارة الغرفة محمية من الضوء لمدة 30 دقيقة على الأقل حتى يتطور اللون.

أخيرا ، استخدم قارئ الصفيحة الدقيقة لقياس امتصاص كل بئر عند 570 نانومتر. اطرح امتصاص مزيج التحكم في الخلفية من امتصاص مزيج التفاعل. بعد ذلك ، ارسم منحنى اللاكتات القياسي ، واحسب تركيزات اللاكتات من المنحنى بضرب كل تركيز في 2.25.

08:57

قياس متزامنة من بيروكسيد الهيدروجين فائق أكسيد/وإنتاج NADH Dehydrogenases المتقدرية المحتوية على فلافين

Related Videos

0 Views

06:18

رسم الخرائط الأيض: رصد النشاط نازعة لاكتات مباشرة في الأنسجة

Related Videos

0 Views

04:33

القياس الكمي لنشاط عزل البلغم الذاتي السائب في خلايا الثدييات

Related Videos

0 Views

03:04

الكشف اللوني عن المؤشر الحيوي البكتيري باستخدام اختبار عباد الشمس المعدل

Related Videos

0 Views

06:47

قياس وتحليل حمض خارج الخلية الإنتاج لتحديد معدل حال السكر

Related Videos

0 Views

04:41

قياس النشاط الأنزيمي اللاكتاز في مختبر التدريس

Related Videos

0 Views

10:05

كشف اللونية من البكتيريا عن طريق محك الاختبار

Related Videos

0 Views

10:44

الطيف الكتلي والنهج القائم Luminogenic للتميز المرحلة الأولى الاستقلابية الكفاءة من في المختبر الثقافات خلية

Related Videos

0 Views

09:35

قياس الألوان فحوصات من داخل الخلايا لاكتات الصغيرة وبيروفات في السلكية ايليجانس كاينورهابديتيس

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026