التحليل الطيفي لتذبذب التألق لدراسة القلة المتجانسة للبروتين
موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 4:48 دقيقة • July 8th, 2025
يمكن أن يحدد التحليل الطيفي لتذبذب التألق حالة قلة البروتينات في العينة.
للبدء ، خذ شريحة ذات حجرة تحتوي على محلول مونومر بروتين يحمل علامة الفلورسنت. ضع الشريحة تحت مجهر متحد البؤر. ركز شعاع الليزر على جزء صغير من العينة — الحجم متحد البؤر — لإثارة مونومرات البروتين.
تنتشر جزيئات البروتين داخل وخارج الحجم متحد البؤر بسبب الحركة البراونية. تسبب هذه الحركة تغيرات سريعة في شدة التألق ، مما يؤدي إلى تقلبات في شدة التألق بمرور الوقت.
أضف عامل الثنائي - وهو رابط ثنائي التكافؤ يساعد اثنين من مونومرات البروتين على الارتباط ، وبالتالي تشكيل ثنائي. بسبب الاختتاث ، يجتمع ملصقان فلوريان معا لتشكيل جسيم واحد ، مما يزيد من شدة التألق لكل جسيم - السطوع الجزيئي.
تزيد الزيادة في السطوع الجزيئي بسبب التعتيم من اتساع تقلبات التألق - حيث يدخل ملصقان فلوريان ويخرجان الحجم متحد البؤر معا.
احصل على صور للحجم متحد البؤر عبر الزمن قبل وبعد إضافة عامل الثنائي.
احسب سطوع وحدات البكسل الفردية في الصور متحدة البؤر، واحصل على متوسط منحنى السطوع بمرور الوقت.
تؤديإضافة عامل التعتيم إلى زيادة السطوع بمقدار ضعفين بسبب إشارات التألق المزدوجة من كل جسيم ، بينما يظل العدد الإجمالي لجزيئات البروتين كما هو - مما يشير إلى تكوين ثنائيات.
لإعداد مصفوفة الألواح متعددة الآبار ، أولا ، قم بإعداد محلول من 100 نانومولار منقى
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية