مقايسة سحب بروتين الحمض النووي الريبي لعزل البروتينات المرتبطة بالحمض النووي الريبي عن طريق استخراج التقارب

لعزل البروتينات المرتبطة بالحمض النووي الريبي ، أو RBPs - منظمات ما بعد النسخ - خذ تعليقا من مجسات الحمض النووي الريبي الصغيرة التي تحتوي على عنصر غني بالأدينيلات واليوريديلات ، أو ARE - وهو تسلسل معترف به بواسطة RBPs المستهدفة. يتم تصنيف مجسات الحمض النووي الريبي ب desthiobiotin - مشتق من البيوتين.

أضف حبيبات مغناطيسية مطلية بالستربتافيدين - وهو بروتين له تقارب مع البيوتين. احتضان تحت التحريض لمنع الخرز من الاستقرار. يرتبط الحمض النووي الريبي المسمى بالديستيوبيوتين بالستربتافيدين ، وبالتالي يشل حركة الحمض النووي الريبي على الخرز.

تحت المجال المغناطيسي ، تتجمع الخرزات على جانب الأنبوب. قم بإزالة المادة الطافية. أعد تعليق الخرزات في مخزن مؤقت لتوفير درجة حموضة مثالية لربط RBP-RNA.

عند التعرض للمغناطيس ، تتجمع الخرزات على جانب الأنبوب. تخلص من المادة الطافية. أعد تعليق الخرزات في محلول يحتوي على RBPs المستهدفة واحتضانها تحت التحريض.

تمتلك

RBPs المستهدفة أشكال التعرف على الحمض النووي الريبي التي تتعرف على تسلسل ARE وترتبط بالحمض النووي الريبي ، وبالتالي تشكل مركب بروتين الحمض النووي الريبي الثابت على الخرز.

تحت المجال المغناطيسي ، تتحرك الخرزات نحو المغناطيس دون إزعاج تفاعلات البروتين والحمض النووي الريبي. تخلص من المادة الطافية. أعد تعليق الخرزات في مخزن مؤقت للشطف يحتوي على البيوتين