اختبار الربط في المختبر القائم على SELEX لتحديد تفاعلات الحمض النووي الريبي والبروتين
موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 6:30 دقيقة • July 8th, 2025
التطور المنهجي للروابط عن طريق التخصيب الأسي ، SELEX ، بتحديد تسلسلات الحمض النووي الريبي المرتبطة بالبروتين.
أولا ، احصل على تجمع RNA عشوائي يحتوي على RNAs ذات علامات إشعاعية مع تسلسلات عشوائية تطوى في هياكل عالية التحديد. احتضان مع البروتين المستهدف. يرتبط البروتين بجزيئات الحمض النووي الريبي ذات التسلسلات المحددة والهياكل ثلاثية الأبعاد ، بينما تظل الحمض النووي الريبي غير المحدد غير مرتبطة.
مرر الخليط عبر مرشح النيتروسليلوز. يمر الحمض النووي الريبي غير المرتبط عبر مسام المرشح ، بينما تظل مجمعات بروتين الحمض النووي الريبي محتفظ بها.
قم بتقطيع المرشح المحتوي على مركب بروتين الحمض النووي الريبي إلى شظايا. كرر تفاعل الحمض النووي الريبي والبروتين عن طريق احتضان تجمع الحمض النووي الريبي بتركيز منخفض للبروتين المستهدف - مما يسمح فقط بربط تسلسل عالي التقارب ، بينما تفشل التسلسلات منخفضة التقارب في الارتباط.
قم بتحميل هذا الخليط على هلام بولي أكريلاميد وقم بإجراء الرحلان الكهربائي. تهاجر مجمعات بروتين الحمض النووي الريبي ببطء عبر الجل مقارنة بالحمض النووي الريبي منخفض التقارب وغير المرتبط. يظهر تصوير هلام الأشعة السينية تحولا في النطاق يتوافق مع موقع مركب بروتين الحمض النووي الريبي.
قطعي جزء الجل المحتوي على المركب إلى شرائح. أضف Proteinase K إلى شظايا المرشح وشرائح الهلام ، وهضم ال
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية