مقايسة الربط التنافسي لتحديد المركبات التي تعطل تفاعلات المستقبلات والترابط

يحدد اختبار الربط التنافسي الجزيئات الصغيرة التي تعطل تفاعلات المستقبلات والترابط من خلال الارتباط التنافسي بمستقبل مستهدف ، مما يثبط ارتباط الترابط الطبيعي.

لتحديد تفاعلات المستقبل مع الترابط الطبيعي في وجود مضاد جزيئي صغير خاص بالمستقبلات ، ابدأ بتعليق خلايا الخلايا الليمفاوية التائية البشرية التي تعبر عن المستقبل المستهدف.

أضف معلق الخلية إلى آبار صفيحة متعددة الآبار تحتوي على تركيزات متزايدة من المضاد. حضن. يرتبط المضاد بموقع الارتباط التقويمي — موقع ربط الترابط الطبيعي للمستقبل.

أضف تركيزا ثابتا من الروابط الطبيعية المسماة بالفلورسنت إلى الآبار. حضن.

عند التركيزات المنخفضة ، تحتل المضادات عددا قليلا من مواقع الربط التقويمي ، مما يسمح بالارتباط الطبيعي بالمستقبلات. ومع ذلك ، عند التركيزات العالية ، يحتل الخصوم معظم مواقع الربط التقويمي ، مما يسمح بالحد الأدنى من ارتباط مستقبلات الترابط الطبيعي.

جهاز طرد مركزي لتكسير الخلايا. تخلص من المادة الطافية. أعد تعليق الخلايا في بارافورمالدهيد لإصلاحها ، مع الحفاظ على التشكل الخلوي.

باستخدام مقياس التدفق الخلوي ، قم بتحليل إشارات التألق من الخلايا الليمفاوية التائية الفردية التي تعبر عن المستقبلات المرتبطة بالمضاد والفلورسنت.

يشير

الانخفاض المعتمد على الجرعة في متوسط شدة التألق مع زيادة تركيزات المضاد الخاص بالمستقبلات إلى ارتباط تنافسي