اختبار السمية الخلوية بوساطة البروتين البكتيري خارج الخلية على PMNs

خذ مزرعة المكورات العنقودية الذهبية، وهي بكتيريا مسببة للأمراض تفرز الليوكوسيدين - وهو سم مكون للمسام - يتكون من مكونات S و F أحادية.

حبيبات الخلايا وتخفيف المادة الطافية بشكل متسلسل. انقل المادة الطافية المحتوية على الكريات البيض إلى صفيحة دقيقة تحتوي على كريات البيض متعددة الأشكال ، أو PMNs ، واحتضنها.

يرتبط المكون S بمستقبلات غشاء محددة على PMNs ، متبوعا بقلة القلة غير المتجانسة مع مكون F لإدخاله في غشاء الخلية ، مما يؤدي إلى تكوين المسام.

تسبب المسام انخفاضا في أيونات البوتاسيوم داخل الخلايا ، مما يؤدي إلى تنشيط بروتين 3 أو NLRP3 من عائلة البيرين العائلي NLR.

NLRP3 يرتبط ببروتين يشبه البقع المرتبط بموت الخلايا المبرمج يحتوي على مجال تجنيد كاسباز ، أو ASC ، الذي يجند pro-caspase-1 ، مكونا التهابا.

يؤدي التحلل البروتيني التلقائي إلى تحويل pro-caspase-1 إلى caspase-1 النشط، مما يؤدي إلى موت الخلايا.

حصاد الخلايا على فترات محددة. أضف يوديد البروبيديوم أو PI ، الذي يدخل الخلايا الميتة من خلال الأغشية التالفة لربط الحمض النووي ، مما ينبعث منه تألق.

باستخدام قياس التدفق الخلوي ، حدد الخلايا الملطخة ب PI لتقييم التأثير السام للخلايا لكل من تركيز الليوكوسيدين ووقت الحضانة.

استزراع المكورات العنقودية الذهبية بين عشية وضحاها في الوسائط المناسبة ، باستخدام حاضنة اهتزاز مثبتة عند 37 درجة مئ