فحص لفحص الجسيمات النانوية النشطة بيولوجيا لتثبيط إشارات المستقبلات الشبيهة بالحصيلة

خذ صفيحة متعددة الآبار مع بلاعم مراسلة مختلفة تؤوي الفوسفاتيز القلوي الجنيني المفرز ، أو SEAP ، الجين أو جين لوسيفيراز مفرز تحت المحفزات المحفزة.

أضف وسائط تحتوي على أنواع مختلفة من الجسيمات النانوية الببتيد والذهب الممزوجة بعديدات السكاريد الدهنية أو LPS إلى الآبار المحددة.

يرتبط LPS بمستقبلات شبيهة بحصيلة البلاعم ، أو TLR ، مما يؤدي إلى الاستيعاب في الجسيم الداخلي.

تنقل مضخة البروتون الداخلية البروتونات إلى الداخل. يؤدي التحمض إلى إشارات TLR ، مما يؤدي إلى تنشيط عوامل النسخ.

تحفز هذه العوامل على التعبير عن جينات المراسل ، وتنتج SEAP أو luciferase.

بدلا من ذلك ، يؤدي استيعاب LPS جنبا إلى جنب مع الهجينة إلى قيام مجموعات الببتيد سالبة الشحنة بعزل البروتونات اللمعية ، مما يمنع التحمض الداخلي وتثبيط إشارات TLR.

اجمع الوسائط ، وأجهزة الطرد المركزي لفصل المادة الطافية ، وأضف ركائز ل SEAP و luciferase.

يقوم

SEAP بتحويل ركيزته إلى منتج ملون ، بينما يحفز لوسيفيراز ركيزته لإنتاج اللمعان.

يشير الانخفاض في إشارات المراسل إلى فعالية الهجينة في تثبيط إشارات TLR.

أجهزة الطرد المركزي 20 حجما من محلول الببتيد-GNP الهجين في أنابيب eppendorf سعة 1.5 ملليلتر عند 18,000 مرة جم لمدة 30 دقيقة. تخلص بعناية من المواد الطافية. انقل الهجينة إلى أنبوب واحد طازج ، واغسلها مرتين باستخدام 1 مليلتر من PBS. بعد ذ