اختبار استخدام ATP لتحديد بقاء البكتيريا تحت العلاج بالمضادات الحيوية
موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 2:56 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بزرع ثقافة بكتيرية في لوحة فحص. ثم احتضن اللوحة.
تحتويالخلايا البكتيرية على مواد لاصقة سطحية وبيلي تمكنها من الالتصاق ببعضها البعض ، وتشكيل مجاميع صغيرة.
أضف تركيزات مختلفة من المضادات الحيوية إلى الآبار ، مع ترك واحدة دون معالجة للمراقبة.
تتفاعل جزيئات المضادات الحيوية مع البكتيريا الحساسة ، مما يؤثر على قدرتها على النمو والتكاثر ، مما يؤدي إلى وفاتها.
تظل البكتيريا المقاومة للمضادات الحيوية نشطة في التمثيل الغذائي ، وتنتج جزيئات ATP.
استخدم جهاز صوتي لتعطيل الخلايا البكتيرية ، وإطلاق محتوياتها داخل الخلايا ، بما في ذلك ATP.
أضف كاشف توهج استخدام ATP الذي يحتوي على لوسيفيرين وإنزيم لوسيفيراز وعوامل مساعدة أخرى.
يستخدملوسيفيراز ATP والأكسجين لتحويل لوسيفيرين إلى أوكسيلوسيفيرين متحمس.
ينتقل الأوكسيلوسيفيرين لاحقا إلى حالته الأرضية ، وينبعث منه ضوء مضيء.
قم بقياس الامتصاص باستخدام قارئ لوحة.
يشيرانخفاض الامتصاص عند تركيزات المضادات الحيوية العالية إلى انخفاض إنتاج ATP ، مما يشير إلى انخفاض معدل بقاء البكتيريا.
قم بقياس الكثافة الضوئية عند 650 نانومتر أو OD650 لتحديد تركيز البكتيريا العالقة ، واضبط تركيز GC إلى حوالي 1 × 108 وحدات تشكيل مستعمرة لكل مليلتر. بعد ذلك ، أضف 99 ميكرولترا من معلق GC في آبار فردية من صفيحة 96 بئرا ، واترك البكتيريا تتجمع عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أ
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية