التصور القائم على الفحص المجهري TIRF لتشكيل البلعمة وإغلاقها
موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 4:13 دقيقة • July 8th, 2025
خذ طبقا زجاجيا مطلي بالبوليمر يحتوي على خلايا الدم الحمراء المتوافقة مع IgG أو كرات الدم الحمراء الملتصقة بسطحه.
ضع الطبق على مرحلة المجهر الفلوري الانعكاس الداخلي الكلي ، مع الحفاظ عليه في درجة حرارة فسيولوجية.
أضف البلاعم التي تحتوي على ببتيدات سيتوبلازمية مصنفة فلورسنت ترتبط بالأكتين المبلمر ، مما يسهل تصور الهيكل الخلوي.
أثناء التصوير ، قم بتوجيه شعاع الليزر بزاوية أعلى من الزاوية الحرجة ، مما يتسبب في انعكاس داخلي وتوليد موجة زائلة عند نقطة الاتصال.
تضيء الموجات الزائلة بشكل انتقائي الفلوروفورات في واجهة العينة الزجاجية ، مما يسمح بالتصور في الوقت الفعلي للبلعمة.
ترتبط مستقبلات Fc للبلاعم بكرات الدم الحمراء IgG-opsonized ، مما يتسبب في تجمع المستقبلات حول منطقة التلامس.
يؤديالتجميع إلى تشغيل مسارات الإشارات داخل الخلايا وتنشيط GTPase ، مما يؤدي إلى بلمرة الأكتين وتجنيد الدينامين ، وتشكيل الكاذب.
تمتد الأرجل الكاذبة حول كرات الدم الحمراء ، وتشكل كوبا بلعمة.
في النهاية ، تندمج أطراف الأرجل الكاذبة. يتوسط الدينامين المتراكم في انفصال البلعمة عن غشاء الخلية ، مما يؤدي إلى استيعاب كرات الدم الحمراء المضادة.
للتثبيت غير التساهمي ل SRBCs ، صب 2 ملليلتر من الخلايا المضادة ل IgG في كل من الأطباق المطلية بالبولي ليسين ، وقم بالطرد المركزي للعينات في جهاز طرد مركزي دوار متأرجح. تخلص من
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية