توليد متغيرات هروب فيروس الأنفلونزا ضد الأجسام المضادة المعادلة

خذ معلق فيروس الأنفلونزا ، الذي يحتوي على سلالات من النوع البري والمتحولة.

يرتبط بروتين سكري مغلف فيروسي يسمى الهيماجلوتينين ، أو HA ، بحمض السياليك على سطح الخلية المضيفة ، مما يتوسط في دخول الفيروس.

أضف جسما مضادا معادلا في التركيزات المتناقصة التي ترتبط ب HA ، مما يمنع موقع ارتباط حمض السياليك.

تسمى

السلالات الطافرة ، التي تحمل طفرات في HA تساعد على تجنب تحييد الأجسام المضادة ، بمتغيرات الهروب.

حقن الخليط في بيض الدجاج الجنين الخالي من مسببات الأمراض ، وتوصيل الفيروسات إلى السائل الآلانتوي ، واحتضانه.

لا يمكن للفيروسات المعادلة بالأجسام المضادة دخول خلايا الغشاء المشيمي. تدخل الفيروسات الطافرة غير المعادلة إلى الخلايا وتتكاثر وتنطلق في السائل الآلانتوي.

حصاد سائل الألانتويك المحتوي على الفيروس.

إدخال جسم مضاد خاص ب HA بتركيزات متناقصة ، مما يؤدي إلى تحييد السلالات الأخرى باستثناء متغيرات الهروب.

أدخل خلايا الدم الحمراء للدجاج أو كرات الدم الحمراء. ترتبط متغيرات الهروب غير المعادلة بالخلايا، مما يتسبب في تكتل كرات الدم الحمراء - والتي تسمى تضخم الدم، مما يؤكد توليد متغير الهروب.

يتم تحليل الأجسام المضادة المعادلة التي لها نشاط HI بشكل أكبر عن طريق تحضير 4 تخفيفات من الجسم المضاد ذي الأهمية في زيادة التركيزات في 1 مرة PBS بحجم 100 ميكرولتر لكل تخفيف. بعد ذلك ، قم بإعداد مخزون فيروسات من 1 مليون وحدة تشكيل البلاك لكل مليلتر في 1 مرة PBS في حجم 400 ميكرولتر.

بعد ذلك ، امزج 100 ميكرولتر من 1 مليون وحدة مكونة للبلاك لكل مليلتر من الفيروس مع 100 ميكرولتر من كل تخفيف للأجسام المضادة أو 100 ميكرولتر من 1 مرة PBS. احتضان العينات لمدة ساعة واحدة في حاضنة 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون.

بعد الدوامة لفترة وجيزة ، قم بحقن 200 ميكرولتر من كل خليط في بيض دجاج مجنم وخالي من مسببات الأمراض. ثم احتضن البيض عند 37 درجة مئوية بدون ثاني أكسيد الكربون لمدة 40 إلى 44 ساعة. بعد الحضانة ، قم بالتضحية بالبويضات الجنينية المصابة بالفيروس عن طريق وضعها على 4 درجات مئوية لمدة 6 ساعات على الأقل. بعد ذلك ، احصد السائل الآلانتوي من البيض كما هو موضح سابقا.

أخيرا ، قم بتأكيد متغيرات الهروب عن طريق إجراء مقايسة HI كما هو موضح في بروتوكول النص.