اختبار قائم على الخلايا لتقييم امتصاص بروتين تاو بواسطة الخلايا الدبقية الصغيرة

ابدأ بصفيحة مسطحة القاع متعددة الآبار تحتوي على الخلايا الدبقية الصغيرة الملتصقة بالفئران - الخلايا البلعمية في الدماغ.

إدخال وسط خال من المصل يحتوي على مجمعات مناعية. تتكون هذه المجمعات من أجسام مضادة مرتبطة بمجاميع بروتين تاو الفسفرية ، والتي تتشكل خلال بعض الأمراض التنكسية العصبية.

يتم تصنيف مجاميع تاو بصبغة فلورية خضراء حساسة للأس الهيدروجيني.

أثناء الحضانة ، تتفاعل هذه المجمعات المناعية مع مستقبلات Fc للخلايا الدبقية الصغيرة ، مما يسهل ابتلاعها.

يندمج هذا الجسيم الداخلي المحتوي على المركب المناعي مع الليزوزوم ، مكونا الجسيم الداخلي. تتسبب البيئة الحمضية للجسيم الداخلي في تألق جزيئات الصبغة.

يغسل لإزالة المجمعات المناعية غير الداخلية.

عالج بمحلول التربسين EDTA لفصل الخلايا.

انقل تعليق الخلية إلى صفيحة قاع على شكل حرف U موضوعة فوق الجليد لتثبيت الجسيم الداخلي. حبيبات الخلايا والتخلص من المادة الطافية.

اغسل الخلايا وأعد تعليقها باستخدام عازلة FACS.

باستخدام FACS ، حدد الخلايا الحية المفردة وحدد كثافة التألق الأخضر لتقييم امتصاص تاو بواسطة الخلايا الدبقية الصغيرة.

في اليوم الأول من التجربة ، قم بإعداد خلايا BV-2 عن طريق غسلها أولا باستخدام 1x PBS في القارورة التي تمت زراعتها فيها. ثم احتضنها بنسبة 0.05٪ تريبسين EDTA عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون₂ حتى تنفصل عن القارورة.