تأثير الأسبرين والإيبوبروفين على قدرة البلعمة للبلاعم

ابدأ بتعليق فطري من Cryptococcus. أضف محلولا من الجسيمات الحيوية المشتقة من الفطريات المقترنة بصبغة فلورية حساسة للأس الهيدروجيني لتلطيخ خلايا المستخفيات.

اغسل لإزالة الصبغة غير المقيدة. انقل المعلق الفطري الملون إلى صفيحة متعددة الآبار مع البلاعم الملتصقة - أو الخلايا المناعية البلعمة.

إدخال الحد الأدنى من التركيز المثبط للدواء ، مثل الأسبرين أو الإيبوبروفين ، واحتضانه لتسهيل امتصاص الدواء.

تتفاعل جزيئات الدواء مع إنزيم سيكلوأكسيجيناز 2 - وهو إنزيم مركب للبروستاجلاندين ، مما يثبط نشاطه.

هذا يمنع تحويل حمض الأراكيدونيك إلى البروستاجلاندين ، مما يحافظ على مستويات المخيم داخل الخلايا ويعزز قدرة البلعمة الضامة ، مما يسهل استيعاب الفطريات.

يندمج البلعمة المحتوية على الفطريات مع الليزوزوم - وهي عضية حمضية ، وتشكل البلعمة ذات الرقم الهيدروجيني الحمضي وتسمح للصبغة بالتألق.

الخلايا المعالجة بالأدوية تألق أعلى من الخلايا غير المعالجة ، مما يشير إلى فعالية الدواء في تعزيز قدرة البلعمة للبلاعم.

ابدأ بثقافة خط خلايا البلاعم الفئران ، المزروعة في وسط RPMI 1640 الكامل ، كما هو موضح في بروتوكول النص.

بالإضافة إلى ذلك ، قم بإعداد ثقافة Cryptococcus neoformans المعلقة في PBS إلى التركيز المطلوب ، كما هو مذكور في بروتوكول النص.

لتلطيخ خلايا المستخفيات ببقعة البلعمة ، قم بتوزيع 999 ميكرولترا من الخلايا في أنبوب الطرد المركزي الدقيق. أضف 1 ميكرولتر من البقعة إلى الأنبوب. احتضان الخلايا لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة ، في الظلام ، مع تحريض بطيء.

بعد الحضانة ، اغسل الخلايا عن طريق الطرد المركزي الأول. ثم تخلص من الطافف. أعد تعليق الخلايا باستخدام PBS وكرر خطوة الغسيل مرتين إضافيتين.

قم بتوزيع 100 ميكرولتر من معلق الخلية Cryptococcus neoformans في آبار الصفيحة المكونة من 96 بئرا التي تحتوي على البلاعم المستزرعة.

لدراسة تأثير أدوية الاختبار على البلعمة البلاعمية ، قم بصرف 100 ميكرولتر من دواء الاختبار المطلوب في الآبار المناسبة للوحة 96 بئرا كما هو موضح في بروتوكول النص.

احتضان اللوحة في حاضنة ثاني أكسيد الكربون لمدة 2 إلى 6 ساعات. في نهاية الحضانة ، قم بقياس التألق من البقعة البلعمة.