تحديد اختبار تأثير هرمون النمو على الخلايا العصبية كيسببتين باستخدام خلية كاملة التصحيح المشبك

قم بتأمين شريحة ما تحت المهاد من الفأر المعدلة وراثيا في غرفة تسجيل مملوءة ب aCSF.

تحتوي

الشريحة على خلايا عصبية كيسببتين تعبر عن بروتين الاندماج الفلوري ، وهي ضرورية لتنظيم الجهاز التناسلي.

قم بتجميع ماصة دقيقة تشتمل على قطب تسجيل في محلول داخلي.

تحديد موقع خلية عصبية كيسببتين الفلورية مجهريا.

اضغط إيجابيا على الماصة ودفعها نحو الخلية العصبية المستهدفة. عند التلامس ، يخلق الضغط فجوة على الغشاء العصبي.

استخدم ضغطا سلبيا قصيرا ، لتشكيل مانع تسرب عالي المقاومة بين الماصة الدقيقة والغشاء.

اضبط جهد الإمساك على إمكانات الراحة الفسيولوجية للخلية العصبية لإجراء قياسات دقيقة.

قم بتطبيق نبضات ضغط سلبي قصيرة لكسر الغشاء ، وإنشاء تكوين خلية كاملة.

تأكد من صلاحية الخلايا العصبية من خلال مراقبة المعلمات.

إدخال اختبار هرمون النمو, تحريك مسارات الإشارات والحث على تغييرات في إمكانات غشاء الخلايا العصبية.

قياس التغيرات في الغشاء إمكانات لتحديد تأثير هرمون النمو المثبط على النشاط العصبي.

انقل شريحة من الدماغ ذات الاهتمام، واحدة تلو الأخرى، إلى غرفة التسجيل باستخدام ماصة نقل الأكريليك. أمسك الشريحة بمرساة شريحة حتى لا تتحرك أثناء نضح aCSF. ضع الشريحة في منتصف غرفة التسجيل باستخدام العدسة الموضوعية منخفضة الطاقة في المجهر الغاطس 10x أو 20x.

يعد موضع الشريحة أمرا بالغ الأهمية للسماح برؤية جيدة للمنطقة