تسجيل إمكانات المجال المحلي في شرائح قشرة الحصين والخلفي في الفأر

قم بتأمين شريحة قشرة الحصين والجزء الداخلي من الفأر في غرفة تسجيل مغمورة.

تدفق ACSF المؤكسج باستمرار عند درجة حرارة ثابتة للحفاظ على صلاحية الأنسجة.

ضع ماصة تحفيزية مملوءة بمحلول إلكتروليت داخل الطبقة رادياتوما لمنطقة CA3 الحصينية، والتي تحتوي على خلايا عصبية تتلقى معلومات من القشرة المخية الداخلية

أدخل ماصة تسجيل مملوءة ب ACSF في الطبقة الهرمية لمنطقة CA1 ، والتي تتكون من خلايا عصبية تشكل نقاط اشتباك عصبي مع إسقاطات محورية من CA3.

باستخدام ماصة التحفيز، استخدم نبضة كهربائية لتحفيز إمكانات الفعل في الخلايا العصبية CA3 قبل المشبكي.

يحفز جهد الفعل إطلاق الناقلات العصبية ، والتي ترتبط بالمستقبلات الموجودة على الخلايا العصبية CA1 بعد المشبكي. يؤدي الارتباط إلى تدفق الأيونات ، مما يؤدي إلى تغيير في إمكانات الغشاء.

يتم تسجيل التغييرات المجمعة في إمكانات الغشاء لخلايا الخلايا العصبية CA1 المتعددة بعد المشبكي ، والتي تسمى إمكانات المجال المحلي أو LFP ، خارج الخلية بواسطة ماصة التسجيل.

لتسجيل إمكانات المجال المحلي ، املأ دورق سعة 400 مل ب ACSF المغطى بالكربوجين ، وضع أحد طرفي أنبوب المضخة في الدرق. قم بتشغيل مضخة تمعجية بسرعة ثمانية إلى 10 ملليلتر في الدقيقة ، لتوجيه ACSF من دورق 400 مل إلى خزان ساخن ومن الخزان إلى غرفة التسجيل عند 32 درجة مئوية.

بعد ذلك ، قم بتثبيت الأنبوب لفترة وجيزة ، وقم بإيقاف تشغيل المضخة لإيقاف التدفق مؤقتا. باستخدام ملقط دقيق ، انقل شريحة من أنسجة المخ إلى غرفة التسجيل بجوار زاوية ورق العدسة الذي تستقر عليه المنديل ، وقم بتقطيعه لأسفل. انزع ورق العدسة ، واترك الشريحة مغمورة في غرفة التسجيل ، واستخدم قيثارة لتأمين الشريحة.

باستخدام معالج دقيق يدوي، قم بدفع طرف ماصة التحفيز المملوءة بكلوريد الصوديوم ببطء إلى سطح الشريحة بزاوية 30 إلى 45 درجة. بعد ذلك، استخدم معالجا دقيقا ثانيا لدفع طرف ماصة محتملة المجال المحلي المملوءة ب ACSF ببطء إلى المنطقة ذات الاهتمام بزاوية 30 إلى 45 درجة، وتسجيل إمكانات المجال المحلي للعينة وفقا للبروتوكولات القياسية.