Name: CD4 + T - اللمفاويات التقاط باستخدام رقاقة ميكروفلويديك المتاح لفيروس نقص المناعة البشرية (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T13:03:52.000+00:00
Duration: 12 min 44 s
Description: تعلم التقاط الخلايا اللمفاوية التائية المساعدة الموجبة لـ CD4 باستخدام جهاز ميكروفلويديك دقيق من PDMS. يتيح هذا الأسلوب تحليل الخلايا في البيئات ذات الموارد المحدودة بدقة عالية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعد قناة ميكروفلويديك مع سطح CD4 + المضادة للbiotinlayted. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضخ 10 مليلتر من الدم في العينة 5 مل / دقيقة في قناة ميكروفلويديك مع ضخ حقنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اخراج الدم في 20 مل / دقيقة لمدة 20 دقيقة مع برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن محلول مخفف FACS lysing (مخفف إلى 10 ٪ من الأسهم مع حل PBS) في 5ul/min لمدة 15 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان لمدة 15 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن CD3 الابتدائي + الحل الأضداد (مخفف إلى 10 ٪ من الأسهم مع حل PBS) في 5 مل / دقيقة لمدة 20 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان لمدة 2 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> طرد قناة مع برنامج تلفزيوني في 5 مل / دقيقة لمدة 15 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضخ 20 ٪ AF488 CD4 + الأضداد ، و 0.2 ٪ محلول المخزون دابي ، و 10 ٪ CD3 الثانوية في الضد + 5 مل / دقيقة لمدة 20 دقيقة في نفس الوقت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان لمدة 20 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> طرد قناة مع برنامج تلفزيوني في 5 مل / دقيقة لمدة 15 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عدد الخلايا تحت المجهر الفلورسنت : <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أبيض (بصري) -- الأسود والأبيض : خلية والغبار </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأشعة فوق البنفسجية (دابي) -- أزرق : الخلية فقط </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأزرق (CD4 +) -- الأخضر : T - اللمفاويات والوحيدات </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأخضر (CD3 +) -- الأحمر : T - اللمفاويات فقط </li></ol></li></ol>

<table><tbody><tr><td>قناة PDMS دقيقة</td><td></td><td></td><td></td><td>تم تصنيعها بواسطة قالب SU-8</td></tr><tr><td>دم</td><td></td><td></td><td></td><td>دم متبرع به من شخص بشري سليم. مستشفى ماس جنرال (Mass General Hospital)، 10 X كريات دم بيضاء عالية الكثافة أو مستشفى بريغهام والنساء (Brigham and Women&amp;rsquo;s Hospital).</td></tr><tr><td>PBS</td><td>محلول منظم</td><td>Invitrogen</td><td>14190</td><td>محلول ملحي منظم بالفوسفات من دولبيكو (Dulbecco&amp;rsquo;s Phosphated Buffered Saline) بتركيز 1x.</td></tr><tr><td>محلول تحلل FACS</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>349202</td><td>مخفف إلى 10% من المحلول المركز باستخدام PBS.</td></tr><tr><td>جسم مضاد Anti-CD4+ مرتبط بالبيوتين</td><td></td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>IM0704</td><td>تم تحضير السطح باستخدام جسم مضاد Anti-CD4+ مرتبط بالبيوتين، مخفف إلى 10% من المحلول المركز باستخدام PBS/BSA بعد الخلط مع 0.2mg من المركز و1ml من الماء منزوع الأيونات.</td></tr><tr><td>goat anti-hCD3delta</td><td>pAB</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>sc-1128</td><td>مخفف إلى 10% من المحلول المركز باستخدام PBS</td></tr><tr><td>rabbit anti-goat IgG PE</td><td></td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>sc-3755</td><td>جسم مضاد ثانوي للجسم المضاد anti-CD3، مخفف إلى 10% من المحلول المركز باستخدام PBS</td></tr><tr><td>anti-human CD4+</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>557695</td><td>موسوم بـ Alexa Fluor 488، مخفف إلى 20% من المحلول المركز باستخدام PBS.</td></tr><tr><td>DAPI</td><td></td><td>Invitrogen</td><td>D1306</td><td>محلول 4&amp;rsquo;,6-dianidino-2-phenylindole, dihydrochloride، مخفف إلى 0.2% من المحلول المركز باستخدام PBS.</td></tr></tbody></table>

cd4 + t - اللمفاويات التقاط باستخدام رقاقة ميكروفلويديك المتاح لفيروس نقص المناعة البشرية

CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV

CD4 + T - اللمفاويات التقاط باستخدام رقاقة ميكروفلويديك المتاح لفيروس نقص المناعة البشرية

مرحباً، اسمي ريتشارد لين وأنا باحث هنا في مجموعة البروفيسورة TI Mercy في قسم العلوم الصحية والتكنولوجيا في جامعة هارفارد ومعهد ماساتشوستس للتكنولوجيا. المشروع الذي أعمل عليه هو قياس وعزل الخلايا التائية اللمفاوية الإيجابية لـ CD four والإيجابية لـ C3. سيتم استخدام دم المرضى في البيئات محدودة الموارد.أمامنا هنا جهاز ملء دقيق (microfill) مكون من مادة PDMS، وهي بولي ثنائي ميثيل السيلوكسان. يبلغ ارتفاع القناة في الجهاز 50 µm، والحجم الإجمالي داخل الجهاز هو 10 µL. لذا، فإن هذا الجهاز دقيق للغاية وسنستخدمه لالتقاط الخلايا اللمفاوية التائية المساعدة (T helper lymphocytes).بشكل أساسي، يمثل هذا المعيار التشخيصي لمرضى HIV. لقد تم بالفعل تحضير سطح جهاز الموائع الدقيقة بالبروتين، مع وجود أجسام مضادة إيجابية لـ CD4 في المحقنة. لدينا الآن محلول PBS المنظم البيولوجي عند pH 7.4، وسنقوم بتدفيقه في القناة لغسل الأجسام المضادة الإيجابية لـ CD4 الزائدة.في هذه المرحلة، لا نحتاج إلى التحكم في المعدل لأننا نحاول فقط غسل المواد الزائدة، ولا يهم حقاً ما هو المعدل المستخدم. هنا ستكون مداخل الجهاز، وستكون هذه هي المخرجات إلى يساري وإلى يمينكم هنا. والآن سأقوم بغسل محلول الجسم المضاد الزائد، وإذا لاحظتم من المخرج، ستجدون السائل يتدفق للخارج؛ هذه كمية ضئيلة جداً، ولكن إذا نظرتم عن كثب، يمكنك رؤية السائل يخرج م

cd4-t-lymphocyte-capture-using-a-disposable-microfluidic-chip-for-hiv

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

القبض على خلية باستخدام جهاز ميكروفلويديك

تصور هذه التجربة هو بمثابة دليل لاستخدام استنساخ الفلورسنت لفيروس نقص المناعة الجزيئية للعيش تجارب التصوير مبائر.

تصور الخلية إلى خلية نقل فيروس نقص المناعة البشرية باستخدام النسخ نيون فيروس نقص المناعة البشرية ومتحد البؤر المجهري لايف

قمنا بتطوير lentiviral التي تمتلك ناقلات ، بالإضافة إلى LTR تات التي تستجيب ، العنصر رؤيا الاستجابة (RRE) التي يمكن أن تنظم مراسل التعبير الجيني بطريقة HIV - 1 تات وتعتمد على رؤيا. الموجه تصاريح محددة للكشف فيروس نقص المناعة البشرية في تكرار الخلايا الحية عن طريق التعبير عن GFP.

تمييز خلايا محددة HIV - 1 الإيجابية باستخدام المتجهات التي تعتمد على رؤيا Lentiviral وإذ تعرب عن البروتين الأخضر نيون

وقد تم تطوير رقاقة متكاملة بالحرارة ميكروفلويديك لاستخدامها بوصفها التشخيص الجزيئي. رقاقة يؤدي استخلاص الحمض النووي، الناسخ العكسي، وPCR. يتم وصف طرق لانتاج وتشغيل الشريحة.

ميكروفلويديك تصنيع المعالج وطريقة للكشف عن الأنفلونزا

في هذه المقالة نقدم رقاقة ميكروفلويديك لتحليل خلية واحدة. أنه يسمح للالكمي للبروتينات الخلايا، والإنزيمات، العوامل المساعدة، ورسله الثاني عن طريق فحوصات الفلورسنت أو المناعية.

رقاقة ميكروفلويديك للتحليل الكيميائي للخلايا متعددة الاستخدامات واحدة

يصف هذا البروتوكول الطرق في بناء نموذج أنسان من نخاع العظام / الكبد / الفأر الصعترية مع مناعة هندسية قائمة على الخلايا الجذعية ضد عدوى فيروس نقص المناعة البشرية.

الخلايا الجذعية وبناء الحصانة المهندسة ضد العدوى بفيروس نقص المناعة البشرية في نموذج إنساني ماوس

وصف منهجية كوانتيتاتي الجينات 96 وأعرب 18 البروتينات السطحية من خلايا مفردة فيفو السابقين، مما يسمح للتعرف على خلطات الجينات والبروتينات في الخلايا المصابة بالفيروس بالنسبة للخلايا مصابة. نقوم بتطبيق نهج لدراسة CD4 المصابة بسيف+ تي الخلايا المعزولة من macaques الريسوسي.

كوانتيتيشن خلية واحدة مرناً و "سطح التعبير البروتين" في خلايا CD4 المصابين "فيروس نقص المناعة القردي"+ "تي الخلايا المعزولة" من macaques ريسوس

يظهر هنا بروتوكول لنهج التصوير الفلوري ، multiplex immunofluorescent cell-based detection of DNA ، RNA ، و protein (MICDDRP) ، وهي طريقة قادرة على التصور المتزامن لخلية واحدة من البروتين الفيروسي والأحماض النووية من أنواع مختلفة وتقطعت بهم السبل. يمكن تطبيق هذا النهج على مجموعة متنوعة من الأنظمة.

التصوير الفلوري متعدد الخلية أحادي الخلية لتصور الأحماض النووية الفيروسية والبروتينات ومراقبة فيروس نقص المناعة البشرية و HTLV و HBV و HCV وفيروس زيكا وعدوى الأنفلونزا

هنا، نقدم بروتوكولا يتم فيه مراقبة الخلايا المفردة للأحداث الحادة والعدوى المنتجة بفيروس نقص المناعة البشرية-1 على جهاز نانوفلويدي. تحدد بيانات التصوير تفاعلات مستقبلات الفيروس المضيف وديناميكيات مسار الإشارات. هذه هي الطريقة الأولى لثقافة الخلايا الواحدة عالية الإنتاجية النانوية والتصوير لدراسة الحركية الإشارات والتفاعلات الجزيئية.

توصيف أحادي الخلية لتدفق الكالسيوم والعدوى بفيروس نقص المناعة البشرية-1 باستخدام منصة متعددة المقاييس Optofluidic

رقاقة الموائع الدقيقة السريرية هي تقنية تحليل طبي حيوي مهمة تبسط المعالجة المسبقة لعينات دم المريض السريرية وتلطخ الخلايا السرطانية المنتشرة في الموقع على الرقاقة ، مما يسمح بالكشف السريع وتحديد CTC واحد.

منصة رقاقة الموائع الدقيقة السريرية لعزل الخلايا السرطانية المنتشرة متعددة الاستخدامات

تعتبر الخلايا السرطانية المنتشرة (CTCs) أمرا بالغ الأهمية لدراسة تطور السرطان والورم الخبيث. تقدم هذه المقالة بروتوكولا متكاملا عالي الإنتاجية لتخصيب CTC وتسلسل CTC أحادي ، مما يحسن كفاءة الالتقاط ونقاء CTC مع تقليل تكاليف التلوث والتسلسل ، وبالتالي تطوير أبحاث الأورام الدقيقة والتطبيقات السريرية.

تقنية فرز الخلايا السرطانية المنتشرة عالية الإنتاجية القائمة على الموائع الدقيقة وتقنية تسلسل الخلية الواحدة

تعلم التقاط الخلايا اللمفاوية التائية المساعدة الموجبة لـ CD4 باستخدام جهاز ميكروفلويديك دقيق من PDMS. يتيح هذا الأسلوب تحليل الخلايا في البيئات ذات الموارد المحدودة بدقة عالية.

CD4 + T - اللمفاويات التقاط باستخدام رقاقة ميكروفلويديك المتاح لفيروس نقص المناعة البشرية

استكشف المزيد من الفيديوهات