تصوير إطلاق الناقل العصبي باستخدام المراسلين الفلوريين المعتمدين على الناقل العصبي القائم على الخلية
موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 4:13 دقيقة • June 17th, 2025
خذ فأرا بنافذة جمجمة تحتوي على طبقة رقيقة من الجمجمة لتمكين تصور الدماغ.
يتمتقييد حركة الرأس باستخدام قضيب رأس متصل.
يتم حقن القشرة مسبقا بمراسلين هندسيين من الفلورسنت القائم على الخلايا ، أو CNiFERs ، وهي خلايا مراسل تسمح بالكشف في الوقت الفعلي عن إطلاق الناقل العصبي.
تعبر CNiFERS عن مستقبل ناقل عصبي مقترن ببروتين G وكاشف الكالسيوم السيتوبلازمي ، والذي يتكون من مجال ربط الكالسيوم المدمجة مع الفلوروفورات المانحة والمتقبلة.
باستخدام مجهر ثنائي الفوتون ، قم بإثارة الكاشف لإحداث انبعاث مضان للمتبرع ، وتمكين تصور CNiFER.
يؤديالنشاط العصبي الذي يصل إلى القشرة إلى إطلاق الناقل العصبي.
ترتبط هذه الناقلات العصبية بمستقبلات CNiFER وتنشط مسارات الإشارات التي تحفز إطلاق الكالسيوم من الشبكة الإندوبلازمية.
يرتبط الكالسيوم السيتوبلازمي المتزايد بالكاشف ، مما يتسبب في حدوث تغيير توافقي يجلب الفلوروفورات على قرب.
ينقل المتبرع الطاقة إلى المستقبل لتحفيز انبعاث مضان المستقبل ، مما يشير إلى إطلاق الناقل العصبي.
ضع منصة التصوير مع الماوس المقيد بالرأس تحت هدف الغمر في الماء 10x في مجهر تصوير ثنائي الفوتون. أدخل مكعب المرشح لتصوير الحنق الذي يحتوي على مرآة ثنائية اللون عند 505 نانومتر ومرشحات ممر النطاق التي تمتد من 460 نانومتر إلى 500 نانومتر لقياس ECFP و 520 نانومتر إلى 560 نانومتر لقياس السترون.
ثم أضف ACS
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية