تصوير ديناميكيات الكالسيوم تحت الخلايا في الخلايا العصبية لالتهاب الغدة المائية

خذ سلالتين منفصلتين معدلة وراثيا Caenorhabditis elegans على شرائح باستخدام وسادات أجار. تحتوي الوسادات على محلول متدحرج بعامل مشلول يقلل من الحركة.

يحتوي

الحبل العصبي البطني للديدان ، أو VNC ، على الخلايا العصبية الداخلية المثيرة التي تعبر عن مؤشرات الكالسيوم السيتوبلازمي في سلالة واحدة ومؤشرات الكالسيوم في الميتوكوندريا في السلالة الأخرى.

ضع غطاء للف الديدان ، وتوجيه VNC للتصور ، ثم ضعها تحت المجهر الفلوري.

استخدم الضوء المرئي لتحديد موقع الديدان، ثم انتقل إلى وضع التألق.

في الخلايا العصبية المريحة ، يحافظ انخفاض الكالسيوم داخل الخلايا على المؤشرات غير مرتبطة ، مما يؤدي إلى ضعف الفلورة.

يفتح النشاط العصبي التلقائي قنوات الكالسيوم ذات الجهد الكهربائي ، مما يسمح بتدفق الكالسيوم.

في السلالة مع المؤشرات السيتوبلازمية ، يرتبط الكالسيوم بالمؤشرات ، مما يعزز التألق السيتوبلازمي.

يدخل الكالسيوم السيتوبلازمي الزائد إلى الميتوكوندريا من خلال القنوات. في السلالة مع مؤشرات الميتوكوندريا ، يزيد ارتباط الكالسيوم من تألق الميتوكوندريا.

قم بتصوير الخلايا العصبية في كلتا السلالتين لمراقبة ديناميكيات الكالسيوم تحت الخلوية.

في أنبوب ثقافة زجاجي مقاس 13 × 100 ملم ، قم بإعداد 3 ملليلتر من أجار 10٪ عن طريق إذابة أجار الدرجة الجزيئية في M9 والميكروويف لعدة ثوان. لعمل وسادات أجار ، قم أولا بإعداد شريحتين عن طريق