التصوير رائحة مستدعى الأنشطة في لمبة الماوس الشم باستخدام الانعكاس الضوئية وإشارات تألق ذاتي

الهدف العام من هذه التجربة هو رسم خريطة للأنشطة التي تثيرها الرائحة على سطح البصلة الشمية للفئران باستخدام الإشارات الضوئية الجوهرية وإشارات البروتين الذاتي الفلوري أو تصوير FAS بعد تخدير الفأر وفضح الجمجمة. يتم ترقق العظم فوق البصلة الشمية. يتم رسم سديلة عظمية باستخدام طرف شفرة مشرط ثم إزالتها ، وهي غرفة مصنوعة من الأسمنت السني وتحيط بالسطح المكشوف للبصلة الشمية.

تمتلئ بالحروس ويوضع غطاء زجاجي فوق هذا المستحضر. يتم الحصول على الخرائط الشمية بالتتابع في نفس الماوس باستخدام الإشارات الضوئية الجوهرية والتصوير FAS ، ويمكن أن يساعد تصوير الأنشطة الأخرى المستحثة في لمبة حاسة الشم بالماوس باستخدام الانعكاس البصري وإشارات الفلورسنت الذاتي في الإجابة على الأسئلة الرئيسية المتعلقة بالطلاء الخاص للطلبات في المصباح الشمي. تتمثل الميزة الرئيسية لهذه التقنية على الطرق الحالية مثل تصوير الجلوكوز الدوكسي أو FMRI في إتاحة تسجيل أنشطة استحضار الطلب بدقة خاصة لقائمة بريق واحدة.

بشكل عام ، سيواجه الأفراد الجدد في هذه الأساليب صعوبات في بداية عملهم لأن كل من المهارات الجراحية والآلية بطيئة في اكتسابها. يعد العرض البصري لهذه الطريقة أمرا بالغ الأهمية للفت الانتباه إلى الخطوات الحاسمة للإجراءات الجراحية والتصويرية. اضغط على المخلب الخلفي للفأر لتأكيد التخدير وإزالة الشعر من فروة الرأس باستخدام المقص.

امسح أي شعر متبقي عن الجلد باستخدام ضمادات شاش معقمة مبللة بالماء المقطر. ضع الماوس في الإطار التجسيمي بحيث يكون الخطم في نفس مستوى الجزء الخلفي من الرأس. من أجل وضع البصلة الشمية أفقيا ، قم بتأمين قضبان الأذن والأنف بإحكام لمنع الحركة.

ضع مرهم العين على العينين لمنع الجفاف أثناء التصوير ، ثم قم بتطهير منطقة فروة الرأس بالبيتادين باستخدام مقص معقم. قم بعمل شق في مؤخرة الرأس بين الأذنين ، ثم قم بقص كلا الجانبين باتجاه قاعدة الأذن وفي الاتجاه الخلفي الأمامي باتجاه الجبهة على طول الجفون. قم بإنهاء إزالة فروة الرأس عن طريق قطع الجلد على الخطم.

استخدام شريط الأنف كدليل. ضع تحت مجهر استريو واستخدم قطعة قطن مبللة بالمحلول الملحي لفصل السمحاق برفق في الجزء العلوي من الجمجمة. استخدم زوجا من الملقط لإزالة الأنسجة المتبقية وكشط سطح الجمجمة بمشرط لضمان تحضير نظيف للحفاظ على رطوبة منطقة البصلة الشمية طوال التجربة.

ضع قطعة من الجيلاتين القابل للامتصاص ، إسفنجة مبللة بالماء المقطر على العظم فوق البصلة الشمية الموجودة بين العينين. قم بإزالة إسفنجة الجيلاتين وابدأ بكشط العظم برفق بشفرة مشرط رقم 10. حافظ على زاوية ثابتة تبلغ 45 درجة بين الشفرة والعظم وحرك الشفرة من الجفون إلى الجانب السهمي من منطقة المصباح.

الحرص على عدم الضغط الرأسي على العظم أو خدش العظم فوق الجيوب الأنفية الوريدية أثناء عملية التخفيف. توقف كل خمس دقائق وضع إسفنجة جيلاتين رطبة على العظم لتبريد المستحضر. امسح الجمجمة بالإسفنجة لإزالة العظام والغبار وامسح طرف المشرط بشكل دوري للحفاظ على نظافته وإبقائه حادا.

استمر حتى تظهر طبقة العظام الإسفنجية أو التربيق. عندما تكون الأوعية الدموية الدقيقة للبصلة الشمية مرئية ، توقف عن خدش العظم واستخدم طرف مشرط رقم 11 لرسم منطقة مستطيلة وإغلاق البصلة الشمية. يستمر الحفاظ على النافذة داخل حدود الجيوب الأنفية الوريدية في خدش العظم داخل المنطقة المستطيلة.

كن حذرا للغاية من عمق طرف المشرط لتجنب لمس سطح الجافية. من أجل التعرف على سمك العظم المتبقي ، ادفعه برفق بطرف فقرة من الملقط. إذا انثنى العظم تحت الضغط ، فانتقل إلى الخطوة التالية.

أضف قطرة من المحلول الملحي واستخدم طرف المشرط الموجه أفقيا لرفع سديلة العظم. قم بإزالة السديلة بعناية باستخدام ملقط لتجنب تمزق العظم المتبقي. بمجرد أن ينكشف سطح البصلة الشمية ، تحقق من عدم وجود أي نزيف أو أوعية دموية. مفاغرة.

امسح المنطقة بإسفنجة جيلاتين مبللة بالمحلول الملحي. من أجل الحفاظ على رطوبة البصلة الشمية ، ضع أسمنت الأسنان بولي أكريليت باستخدام حقنة قياس 29 لتشكيل بئر على العظم حول نافذة الجمجمة. ضع قطرة من نقطة الانصهار المنخفضة فوق الجافية وضع غطاء زجاجي معقم فوق نافذة الجمجمة للتصوير.

ضع الإطار التجسيمي تحت المجهر الاستريو مع توسيط نافذة الجمجمة في مجال الرؤية لعرض الشعيرات الدموية. قم بالتبديل إلى الضوء الأخضر 580 نانومتر والتقط صورة تحكم تشريحي للتحقق من حالة التحضير أثناء التصوير. ثم تابع التقاط تجارب التحفيز باستخدام إما تصوير الإشارات الضوئية الجوهرية تحت إضاءة 630 نانومتر أو تصوير إشارة الفلورسنت الذاتي للبروتين الفلافو تحت إضاءة 480 نانومتر ، تتضمن جلسة التصوير القياسية خط أساس من خمس إلى 10 ثوان حيث يتم توصيل الهواء فقط ، متبوعا بتحفيز الرائحة لمدة ثلاث إلى 10 ثوان اعتمادا على تركيز الرائحة المختار.

وأخيرا ، يتم تسجيل 70 إلى 82 ثانية من توصيل الهواء للتعافي الأساسي. هنا ، يتم تصوير الأوعية الدموية للبصلة الشمية من خلال نافذة الجمجمة ، متبوعة بنتائج تجربة التحفيز باستخدام h sinal كرائحة تم التقاطها باستخدام كل من تصوير iOS و FAS. باستخدام تصوير iOS ، يظهر النشاط الذي يثير الرائحة حيث يشار إلى المناطق المظلمة من مناطق الامتصاص التي يتم تنشيطها بواسطة AL بواسطة الأسهم البيضاء ، ويمكن رؤية المناطق النشطة في كل من التجارب الفردية والمتوسطة المتعددة.

الآن التحول إلى تصوير FAS في نفس نشاط OD المسبب للفأر كمناطق بيضاء من الانبعاث الذاتي المشار إليه بواسطة الأسهم السوداء ، ويمكن رؤيته أيضا في كل من التجارب الفردية والمتوسطة. لاحظ أن كلا من مناطق الامتصاص السوداء التي شوهدت باستخدام تصوير iOS والمناطق البيضاء من انبعاث التألق الذاتي التي شوهدت باستخدام تصوير FAS تتداخل. تؤكد هذه المطابقة المكانية أن التقنيتين تسمحان بتصور نفس الكبيبات الشمية بمجرد أن يتم استحضار طلب التصوير الرئيسي ، يمكن إجراء الأنشطة باستخدام الانعكاس البصري وإشارات التألق الذاتي في ساعة واحدة للجراحة وساعتين للحصول على الصور.

تتمثل العيوب الرئيسية لاستخدام طرق التصوير البصري هذه في حقيقة أنه لا يمكن تطبيقها لتصور الخرائط الشمية بطريقة حرة للفئران الحرة. وبسبب الاختراق المحدود للفوتونات في الأنسجة البيولوجية ، فإنها لا تتيح الوصول إلى الكبيبات الشمية البطنية بعد تطورها في أواخر التسعينيات ، وتسجيل الإشارات الجوهرية في الجهاز الشمي. ربما طريقة للباحثين في مجال التصوير البصري لاستكشاف خصائص الطلاء الخاص للod.

في المصباح الشمي ، يعد التصوير الذاتي الفلوري للبروتين تقنية واعدة لإعطاء رؤى جديدة في الطلاء الخاص للتطوير التنظيمي باستخدام الإشارات الضوئية الذاتية.