مايو 2, 2012
قمنا بتطوير تقنية مينيملي لخلق أرنب جرح الأذن الدماغية نموذج بقسمة الشريان المركزي والأعصاب والحزمة الوعائية العصبية في الجمجمة. نفق تحت الجلد ثم يقطع كل الأنسجة تحت الجلد. هذا الإجراء يتسبب في تعطيل الحد الأدنى من الجلد ويمكن استخدامها بأمان في الحيوانات بداء السكري.
الهدف العام من التجربة التالية هو جعل من الممكن إحداث جروح إقفارية ، ليس فقط في الأرانب العادية ، ولكن أيضا في الأرانب ذات المقاومة المنخفضة مثل تلك المسنة أو المصابة بالسكري. جميع التقنيات المستخدمة حاليا لإنشاء الجروح الإقفارية شديدة التوغل ، وحتى الآن ، لا يمكن استخدام أي من هذه التقنيات في المصابة بالسكري. يستخدم هذا الإجراء جراحة طفيفة التوغل تبدأ بعمل ثلاثة شقوق جلدية صغيرة فوق حزم الأوعية الدموية الثلاثة.
الخطوة التالية هي عزل وحماية الوريد المركزي وحزمة الأوعية الدموية المدللة بحيث يتم تقليل الدورة الدموية إلى الأذن ولكن لا يتم التخلص منها تماما. أخيرا ، يتم قطع الأوعية والأعصاب والأنسجة تحت الجلد المتبقية أو ربطها عبر شقوق الجلد. يتم تأكيد نقص تروية الأذن من خلال عدم وجود نبض شرياني ، ومظهر الأذن ، واختلاف درجة الحرارة ، وتشبع الأكسجين تحت الجلد.
قد يبدو من الصعب إجراء هذه الجراحة طفيفة التوغل ، لكنها في الواقع سهلة للغاية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تحتوي على القليل جدا من اضطراب الجلد. منذ أن نشرنا هذه التقنية لأول مرة في عام 2007 ، تلقينا العديد من الأسئلة.
ومنذ ذلك الحين قمنا بتبسيط هذا الإجراء. لتسهيل الاستغناء عن استخدام المجهر ، ابدأ بوزن الأرنب المحدد ، وتخدير الأرنب ، باستخدام مزيج من الكيتامين والزيلازين. راقب العلامات الحيوية للأرنب ، ويمكن التعرف على ثلاث حزم وعائية تغذي الأذن على الجانب الظهري.
هذه هي الحزمة المركزية ، وهي الأكبر التي تحتوي على ضمانات متصلة بسفن أخرى. حزمة التدليل التي عادة ما يكون الشريان فيها صغيرا جدا أو غائبا ، وحزمة الجمجمة. على الجانب البطني ، لا يتلقى الجلد البعيد إمدادات الدم من الأوعية القريبة.
بدلا من ذلك ، تحتوي حزم الأوعية الدموية الموجودة على الأذن الظهرية على العديد من الفروع المخترقة عبر الغضروف لتوفير إمداد الدم للجلد البطني البعيد. في بعض الأرانب ، يحدث أيضا وعاء صغير جدا تحت الجلد على الجانب البطني ، والذي يزود الدم بما لا يزيد عن ثلث الجلد البطني. في شق الجلد المحيطي المفتوح ، لا يوجد نزيف من الشق البطني.
قبل المتابعة ، تأكد من أن الأرنب لا يستجيب لمنبهات الألم باستخدام قرصة إصبع القدم وانعكاس العين ، وحماية عيون عن طريق تطبيق دموع اصطناعية. مرهم. حافظ على دفء الأرنب أثناء الجراحة باستخدام وسادة تدفئة. ثم باستخدام البيتادين والكحول ، قم بفرك كلتا الأذنين والجلود المحيطة بالأرنب ، بحيث يتم الكشف عن الأذنين فقط.
ستصبح إحدى الأذنين إقفارية بينما تعمل الأخرى كعنصر تحكم. الأدوات المستخدمة في الجراحة هي سكين جراحي بشفرة رقم 15 ، وزوجان من الشاحنات الصغيرة ، أحدهما للجلد والآخر للأنسجة الرخوة الأخرى. ثلاثة مشابك للبعوض ، زوج أو زوجين من المقصات الدقيقة المنحنية ، زوج واحد من المقصات الصغيرة لقطع الغرز والأنسجة الصلبة ، حامل إبرة وبعض اللكمات المصنوعة من الفولاذ المقاوم للصدأ.
ابدأ الجراحة بتحديد العنق الوعائي الثلاثة وفقا للشرايين والأوردة. باستخدام شفرة رقم 15. قم بعمل شق رأسي واحد بعناية على عنيق الأوعية الدموية المركزي.
عزل الوريد المركزي عن الأنسجة المحيطة وحمايته. هذه الخطوة تحيط. الوريد المركزي للتراجع.
تشريح العصب المركزي مجانا. عادة ما يكون على الجانب المدلل من الوريد. يتم قطع العصب بالمقص.
تشريح الشريان المركزي مجانا. عادة ما يكون على الجانب الجمجمي وأعمق من الوريد ، اربط الشريان وقسمه. نظف الأنسجة حول الوريد المركزي فوق غضروف الأذن.
يتم إجراء شق جلدي ثان فوق عنيق التدلل. للحفاظ على الحزمة. يتم تشريح الأوعية مجانا ومحاطة للحماية.
هذا مفيد بشكل خاص عندما يكون الوريد كبيرا ، كما هو الحال في هذا الأرنب. اصنع نفقا بين هذا الشق والشق الأول. قطع الأنسجة تحت الجلد فوق الغضروف.
يتم إجراء شق جلدي ثالث فوق حزمة الجمجمة. هذه الحزمة بأكملها مربوطة ومنفصلة. يتم قطع الجلد فوق الحزمة الثالثة.
هذا الوريد قريب جدا من الجلد ، لذلك لا تقطع بعمق. ثم يتم تشريح حزمة الوعاء بأكملها وربطها وفصلها. باستخدام سكين ومقص ، قم بعمل نفق تحت الجلد.
تتوقف الشقوق الثلاثة عن جميع الأنسجة تحت الجلد والعضلات والأعصاب والفروع الوعائية الصغيرة. استخدم تشريحا حادا وغير حاد إضافيا لتنظيف القاعدة ، تاركا غضروفا عاريا بعرض حوالي خمسة إلى 10 ملليمترات. يمكن السيطرة على النزيف عن طريق ضغط الشاش.
الكي الكهربائي غير ضروري. لا يتم قطع الجلد داخل الأذن لأنه لا يحمل الكثير من الدم. يتمثل الجانب المهم في هذا الإجراء في ضمان التشريح الكافي للنفق تحت الجلد مع حماية الأوعية.
لا ينبغي أن يكون هذا إجراء صعبا. بعد الإرقاء ، يتم إغلاق الشقوق الجلدية الثلاثة باستخدام أربعة خيوط أو خمسة خيوط أوه وفحصها مرة أخرى للتأكد من إغلاق شقوق الجلد بشكل صحيح وعدم وجود نزيف لاختبار أدوية الجرح ، أربعة. يمكن إنشاء جروح جلدية دائرية كاملة السماكة على الجانب البطني من كل أذن باستخدام ثقب من الفولاذ المقاوم للصدأ بستة ملليمترات.
المسافة بين الجروح لا تقل عن 20 إلى 30 ملم. تتم إزالة الجلد والسمحاق داخل الثقب ، لكن الغضروف لا يتضرر. بعد تكوين الجروح في كلتا الأذنين ، قم بتغطيتها بالشاش مؤقتا وانقل الأرنب إلى غرفة الإجراءات لتطبيق الدواء.
بعد تنظيف الجروح من أي جلطات دموية ، استخدم أدوية الاختبار والمكافحة. الجروح مغطاة بضمادة انسدادية لمنع الجفاف. عند مقارنة دواءين ، ضع كل دواء على كل من الجرح القريب والبعيد.
يتحكم هذا في معدلات الاختلاف في التئام الجروح في الأذن البعيدة والقريبة بعد الجراحة. عادة ما تصبح الأذن الإقفارية باردة وزرقاء مع انخفاض الإحساس البعيد عن الشق. قد تظهر الوذمة الخفيفة لبضعة أيام ، لكنها تختفي من تلقاء نفسها ولا يلزم العلاج.
نبض الشريان المركزي غائب. يتم تقليل حركة الأذن ، ولكن لا يتم التخلص منها تماما لأن بعض العضلات لا تزال مرتبطة بقاعدة الأذن. إذا تم عمل النفق بشكل صحيح ، فيمكن رؤية مسافة بادئة واضحة بين الشقوق.
يتم توصيل رقعة الفنتانيل بجلد الظهر لتخفيف الألم المحتمل بعد الجراحة. يتم قياس درجة حرارة الجلد على كل أذن يوميا باستخدام مقياس حرارة. يتم قياس الدورة الدموية في الأذن باستخدام مقياس شد الأكسجين عبر الجلد أو مقياس تدفق دوبلر بالليزر.
بعد أسبوع واحد ، يمكن إزالة خيوط شقوق الجلد من عام 2007. تم استخدام الإجراء في أكثر من 70 أرنبا. وهذا يشمل 23 أرنبا مصابا بالسكري وأربعة مسنين.
تراوحت الفروق في درجات الحرارة بين الأذن غير الإقفارية والأذن الإقفارية من درجة مئوية إلى 10 درجات مئوية مع معظم الأرانب التي تقع في حدود درجتين إلى ست درجات مئوية. كان الفرق في درجة الحرارة أعلى في الأيام الأولى بعد الجراحة انخفض تدريجيا بعد اليوم 15 ، لكنه ظل لا يزال قائما في نهاية شهر واحد. تم أخذ ست عينات من الأنسجة من كل أذن وتم قياس محتويات الفوسفات عالية الطاقة بواسطة HPLC ، سواء TP أو الطاقة الإجمالية.
كانت التركيزات أعلى في الأذنين الطبيعية منها في الأذنين الإقفارية. كانت أوقات التئام الجروح دائما أطول للأذن الإقفارية مقارنة بالأذن غير الإقفارية في غير السكرية والسكري في 15 أرنبا غير مصابا بالسكري. كان متوسط وقت الشفاء 17.8 يوما على الأذن غير الإقفارية مقابل 21.8 يوما في الأذن الإقفارية.
في 10 مصابة بالسكري لمدة 12 شهرا ، كان متوسط وقت الشفاء 18.3 يوما على الأذن غير الإقفارية مقارنة ب 29.1 يوما في الأذن الإقفارية. في جميع بما في ذلك الأرانب المصابة بالسكري ، تلتئم شقوق الجلد بشكل طبيعي دون أي مضاعفات في الأرانب. مع 24 شهرا من وقت الإصابة بمرض السكري ، تميل الجروح البطنية إلى الإصابة بالعدوى.
هذه الميزة تجعله أقرب إلى جروح السكري البشرية. تظهر عينة الأنسجة التئام النفق تحت الجلد الذي تغيب فيه العضلات ويتم استبدالها بأنسجة ليفية. ومع ذلك ، فإن الجلد سليم.
أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر معاملة بطريقة إنسانية. بمجرد إتقانها ، يمكن القيام بهذه التقنية في أقل من ساعة واحدة. لقد استخدمنا هذه التقنية في أكثر من 70 أرنبا ، بما في ذلك 23 أرنبا مصابا بالسكري دون أي مضاعفات مثل النزيف أو العدوى.
إنه إجراء آمن للغاية باتباع هذا الإجراء. يمكن إجراء طرق أخرى مثل نقص التروية الإضافي وتلف الأعصاب والتلقيح البكتيري من أجل الإجابة على أسئلة إضافية مثل قرحة الأوعية الدموية وتقرحات الضغط والاعتلال العصبي السكري.
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية
تقدم هذه الدراسة تقنية غير جراحية لإنشاء نموذج لجرح الأذن النقصي في الأرانب، وهي مناسبة بشكل خاص للحيوانات المصابة بالسكري. تتضمن الطريقة تشريحًا دقيقًا للحزم الوعائية لتقليل الدورة الدموية مع تقليل اضطراب الجلد.
This technique addresses a critical gap in diabetic wound research by enabling the creation of ischemic wound models in animals with reduced physiological resistance, such as diabetic rabbits. It supports mechanistic de-risking of therapeutic candidates by replicating the vasculopathy component that impairs healing in human diabetic wounds. The paired ischemic and non-ischemic wound design within a single animal enhances predictive confidence and reduces variability in preclinical screening.
The method fits within the discovery continuum from target validation through lead identification to preclinical efficacy testing, particularly for wounds where vascular compromise is a key failure factor.