Name: بروتوكولات لتلقيح المهبل وجمع العينات في النموذج التجريبي للماوس المبيضات المهبل (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-12-08T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 57 s
Description: تعلم تقنيات تلقيح المهبل وجمع العينات في نموذج الفئران التجريبي لدراسة التهاب المهبل بالمبيضات. يتيح هذا الأسلوب قياس العبء الفطري وتحليل الخلايا المناعية بدقة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وأيد هذا العمل من قبل R01 AI32556 (المعدية ، المعهد الوطني للصحة). وأيد أيضا هذا العمل في جزء من ولاية لويزيانا الجنوبية واللقاحات مركز ولاية لويزيانا معهد بحوث الأمراض المعدية التي يرعاها المجلس ولاية لويزيانا من الحكام.

<ol><li>Abraham, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducible+immunity+to+Trichomonas+vaginalis+in+a+mouse+model+of+vaginal+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Inducible immunity to Trichomonas vaginalis in a mouse model of vaginal infection.</a> Infect. Immun. 64, 3571-3571 (1996).</li>
<li>Black, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Major+histocompatibility+haplotype+does+not+impact+the+course+of+experimentally+induced+murine+vaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Lab.+Anim.+Sci%22%5BJournal%5D)">Major histocompatibility haplotype does not impact the course of experimentally induced murine vaginal candidiasis.</a> Lab. Anim. Sci. 49 (6), 668-668 (1999).</li>
<li>Black, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+neutropenia+decreases+inflammation+associated+with+murine+vaginal+candidiasis+but+has+no+effect+on+the+course+of+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Inf.+Immun%22%5BJournal%5D)">Acute neutropenia decreases inflammation associated with murine vaginal candidiasis but has no effect on the course of infection.</a> Inf. Immun. 66, 1273-1273 (1998).</li>
<li>Black, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+severity+of+Candida+vaginitis+in+BALB%2Fc+nu%2Fnu+mice+versus+the+parent+strain+is+not+abrogated+by+adoptive+transfer+of+T+cell+enriched+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Reprod.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Increased severity of Candida vaginitis in BALB/c nu/nu mice versus the parent strain is not abrogated by adoptive transfer of T cell enriched lymphocytes.</a> J. Reprod. Immunol. 45, 1-1 (1999).</li>
<li>Buchannan, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+stromal+and+epithelial+estrogen+receptors+in+vaginal+epithelial+proliferation%2C+stratification%2C+and+cornification%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Role of stromal and epithelial estrogen receptors in vaginal epithelial proliferation, stratification, and cornification.</a> Endocrinology. 139 (10), 4345-4345 (1998).</li>
<li>Clemons, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+susceptibility+of+mice+to+Candida+albicans+vaginitis+correlates+with+host+estrogen+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Genetic susceptibility of mice to Candida albicans vaginitis correlates with host estrogen sensitivity.</a> Infect. Immun. 72, 4878-4878 (2004).</li>
<li>Conrady, C. D., Halford, W. P., Carr, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+the+type+I+interferon+pathway+increases+vulnerability+of+mice+to+genital+Herpes+simplex+virus+2+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Loss of the type I interferon pathway increases vulnerability of mice to genital Herpes simplex virus 2 infection.</a> J. Virol. 85 (4), 1625-1625 (2011).</li>
<li>Cunha, G. R., Cooke, P. S., Kurita, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+estromal-epithelial+interaction+in+hormonal+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Histol+Cytol%22%5BJournal%5D)">Role of estromal-epithelial interaction in hormonal responses.</a> Arch Histol Cytol. 67 (5), 417-417 (2004).</li>
<li>Enjalbert, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+multifunctional%2C+synthetic+Caussia+princeps+luciferase+reporter+for+live+imaging+of+Candida+albicans+infections%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">A multifunctional, synthetic Caussia princeps luciferase reporter for live imaging of Candida albicans infections.</a> 77 (11), 4847-4847 (2009).</li>
<li>Feinen, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+role+of+Th17+responses+in+a+murine+model+of+Neisseria+gonorrhoeae+genital+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">Critical role of Th17 responses in a murine model of Neisseria gonorrhoeae genital infection.</a> Mucosal Immunol. 3 (3), 312-312 (2010).</li>
<li>Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+protective+host+defenses+against+oral+and+vaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Mycol%22%5BJournal%5D)">Distinct protective host defenses against oral and vaginal candidiasis.</a> Med. Mycol. 40, 359-359 (2002).</li>
<li>Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+intravaginal+live+Candida+challenge+in+humans+leads+to+new+hypotheses+for+the+immunopathogenesis+of+vulvovaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">An intravaginal live Candida challenge in humans leads to new hypotheses for the immunopathogenesis of vulvovaginal candidiasis.</a> Infect. Immun. 72, 2939-2939 (2004).</li>
<li>Fidel, P. L., Cutright, J. L., Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+D0870+treatment+of+experimental+Candida+vaginitis%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob.+Agents.+Chemother%22%5BJournal%5D)">Efficacy of D0870 treatment of experimental Candida vaginitis.</a> Antimicrob. Agents. Chemother. 41, 1455-1455 (1997).</li>
<li>Fidel, P. L., Cutright, J. L., Steele, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Reproductive+hormones+on+experimental+vaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Effects of Reproductive hormones on experimental vaginal candidiasis.</a> Infect. Immun. 68, 651-651 (2000).</li>
<li>Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+Candida+glabrata+vaginitis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Inf.+Dis%22%5BJournal%5D)">A murine model of Candida glabrata vaginitis.</a> J. Inf. Dis. 173, 425-425 (1996).</li>
<li>Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+vaginal+cell+populations+during+experimental+vaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Inf.+Immun%22%5BJournal%5D)">Analysis of vaginal cell populations during experimental vaginal candidiasis.</a> Inf. Immun. 67, 3135-3135 (1999).</li>
<li>Fidel, P. L., Lynch, M. E., Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candida-specific+cell-mediated+immunity+is+demonstrable+in+mice+with+experimental+vaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Candida-specific cell-mediated immunity is demonstrable in mice with experimental vaginal candidiasis.</a> Infect. Immun. 61, 1990-1990 (1993).</li>
<li>Fidel, P. L., Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunopathogenesis+of+recurrent+vulvovaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Microbiol.+Rev.+9%22%5BJournal%5D)">Immunopathogenesis of recurrent vulvovaginal candidiasis.</a> Clin. Microbiol. Rev. 9. 9, 335-335 (1996).</li>
<li>Fidel, P. L., Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFidel%2C+PL+%22Murine+Models+of+Candida+Vaginal+Infections%2C+In+Experimental+models+in+antimicrobial+chemotherapy%22">Murine Models of Candida Vaginal Infections, In Experimental models in antimicrobial chemotherapy</a>. Zak, O., Sande, M. , 2nd ed, Academic Press Ltd. London, UK. 741-748 (1999).</li>
<li>Fidel, P. L., Vazquez, J. A., Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candida+glabrata%3A+Review+of+epidemiology%2C+pathogenesis%2C+and+clinical+disease+with+comparison+to+C.+albicans%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Microbiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Candida glabrata: Review of epidemiology, pathogenesis, and clinical disease with comparison to C. albicans.</a> Clin. Microbiol. Rev. 12, 80-80 (1999).</li>
<li>Fulurija, A., Ashman, R. B., Papadimitriou, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+depletion+increases+susceptibility+to+systemic+and+vaginal+candidiasis+in+mice%2C+and+reveals+differences+between+brain+and+kidney+in+mechanisms+of+host+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology%22%5BJournal%5D)">Neutrophil depletion increases susceptibility to systemic and vaginal candidiasis in mice, and reveals differences between brain and kidney in mechanisms of host resistance.</a> Microbiology. 142, 3487-3487 (1996).</li>
<li>Gill, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NK+cells+require+type+I+IFN+receptor+for+antiviral+responses+during+genital+HSV-2+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Immunol%22%5BJournal%5D)">NK cells require type I IFN receptor for antiviral responses during genital HSV-2 infection.</a> Cell Immunol. 269 (1), 29-29 (2011).</li>
<li>Hamad, M., Abu-Elteen, K. H., Ghaleb, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen-dependent+induction+of+persistent+vaginal+candidosis+in+naive+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Estrogen-dependent induction of persistent vaginal candidosis in naive mice.</a> Cell. Immunol. 47 (7), 304-304 (2004).</li>
<li>Hamad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utility+of+the+oestrogen-dependent+vaginal+candidosis+murine+model+in+evaluating+the+efficacy+of+various+therapies+against+vaginal+Candida+albicans+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Mycoses%22%5BJournal%5D)">Utility of the oestrogen-dependent vaginal candidosis murine model in evaluating the efficacy of various therapies against vaginal Candida albicans infection.</a> Mycoses. 49 (2), 104-104 (2006).</li>
<li>LeBlanc, D. M., Barousse, M. M., Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+dendritic+cells+in+immunoregulation+during+experimental+vaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">A role for dendritic cells in immunoregulation during experimental vaginal candidiasis.</a> Infect. Immun. 74, 3213-3213 (2006).</li>
<li>McGrory, T., Garber, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+intravaginal+infection+with+Trichomonas+vaginalis+and+role+of+Lactobacillus+acidophilus+in+sustaining+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Mouse intravaginal infection with Trichomonas vaginalis and role of Lactobacillus acidophilus in sustaining infection.</a> Infect. Immun. 60, 2375-2379 (1992).</li>
<li>Naglik, J. R., Fidel, P. L., Odds, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+mucosal+Candida+infection%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS.+Microbiol.+Lett%22%5BJournal%5D)">Animal models of mucosal Candida infection.</a> FEMS. Microbiol. Lett. 283 (2), 129-129 (2008).</li>
<li>Nomanbhoy, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaginal+and+oral+epithelial+cell+anti-Candida+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Inf.+Immun%22%5BJournal%5D)">Vaginal and oral epithelial cell anti-Candida activity.</a> Inf. Immun. 70, 7081-7081 (2002).</li>
<li>Pietrella, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+beta-glucan-conjugate+vaccine+and+anti-beta-glucan+antibodies+are+effective+against+murine+vaginal+candidiasis+as+assessed+by+a+novel+in+vivo+imaging+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">A beta-glucan-conjugate vaccine and anti-beta-glucan antibodies are effective against murine vaginal candidiasis as assessed by a novel in vivo imaging technique.</a> Vaccine. 28 (7), 1717-1717 (2010).</li>
<li>Redondo-Lopez, V., Cook, R. N., Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+role+of+Lactobacilli+in+the+control+and+maintenance+of+the+vaginal+bacterial+microflora%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Emerging role of Lactobacilli in the control and maintenance of the vaginal bacterial microflora.</a> Rev Infect Dis. 12 (5), 856-856 (1990).</li>
<li>Saavedra, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+production+of+chemokines+during+experimental+vaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Inf.+Immun%22%5BJournal%5D)">Local production of chemokines during experimental vaginal candidiasis.</a> Inf. Immun. 67, 5820-5820 (1999).</li>
<li>Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+and+epidemiology+of+vulvovaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+N.+Y.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis and epidemiology of vulvovaginal candidiasis.</a> Ann. N. Y. Acad. Sci. 544, 547-547 (1988).</li>
<li>Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+and+treatment+of+recurrent+vulvovaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis and treatment of recurrent vulvovaginal candidiasis.</a> Clin. Infect. Dis. 14, Suppl 1. S148-S153 (1992).</li>
<li>Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vulvovaginal+candidiasis%3A+Epidemiologic%2C+diagnostic%2C+and+therapeutic+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Obstet.+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Vulvovaginal candidiasis: Epidemiologic, diagnostic, and therapeutic considerations.</a> Am. J. Obstet. Gynecol. 178 (2), 203-203 (1998).</li>
<li>Song, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+and+humoral+immune+responses+against+primary+and+repeat+Neisseria+gonorrhoeae+genital+tract+infections+of+17%CE%B2-estradiol-treated+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Local and humoral immune responses against primary and repeat Neisseria gonorrhoeae genital tract infections of 17β-estradiol-treated mice.</a> Vaccine. 26, 5741-5741 (2008).</li>
<li>Taylor, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+virulence+of+Candida+albicans+isolates+causing+mucosal+infections+in+people+infected+with+the+human+immunodeficiency+virus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">In vivo virulence of Candida albicans isolates causing mucosal infections in people infected with the human immunodeficiency virus.</a> J. Infect. Dis. 182, 955-955 (2000).</li>
<li>Taylor, B. N., Saavedra, M., Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+Th1%2FTh2+cytokine+production+during+experimental+vaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Mycol%22%5BJournal%5D)">Local Th1/Th2 cytokine production during experimental vaginal candidiasis.</a> Med. Mycol. 38, 419-419 (2000).</li>
<li>Tirabassi, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mucosal+vaccination+approach+for+herpes+simplex+virus+type+2%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">A mucosal vaccination approach for herpes simplex virus type 2.</a> Vaccine. 29 (5), 1090-1090 (2011).</li>
<li>Broeck, W. V. anden, Derore, A., Simoens, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+and+nomenclature+of+murine+lymph+nodes%3A+descriptive+and+nomenclatory+standardization+in+BALB%2FcAnNCrl+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Anatomy and nomenclature of murine lymph nodes: descriptive and nomenclatory standardization in BALB/cAnNCrl mice.</a> J. Immunol. Methods. 312 (1-2), 12-12 (2006).</li>
<li>Wormley, F. L., Chaiban, J., Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+adhesion+molecule+and+lymphocyte+activation+marker+expression+during+experimental+vaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Cell adhesion molecule and lymphocyte activation marker expression during experimental vaginal candidiasis.</a> J. Immunol. Methods. 69, 5072-5072 (2001).</li>
<li>Yano, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+cell-derived+S100+calcium-binding+proteins+as+key+mediators+in+the+hallmark+acute+neutrophil+response+during+Candida+vaginitis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Epithelial cell-derived S100 calcium-binding proteins as key mediators in the hallmark acute neutrophil response during Candida vaginitis.</a> Infect. Immun. 78 (12), 5126-5126 (2010).</li>
</ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

وقد تم إنشاء نموذج الفأر تجريبية من المهبل والمبيضات تستخدم تاريخيا على مدى العقود القليلة الماضية لدراسة المخاطية استجابة المضيف لالمبيضات وكذلك لاختبار العلاجات المضادة للفطريات 3،4،11،13،16،17،19،21،24 ، 25،37. قدم البروتوكولات تتضمن هنا أقل كفاءة وسائل كثيفة العمالة ، ويبدو أن أحد أنظمة النموذج الأكثر الأمثل من المهبل المبيضات صفها حتى الآن. هذه التقنيات تمكن الكمي السريع لأعباء الفطرية وجمع عينات من المهبل. وعلاوة على ذلك ، والدراسات السا...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><td> اسم الكاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> الإناث CBA / J الفئران </td><td> مختبرات نهر تشارلز </td><td> 01C38 </td><td> 5-6 أسابيع من العمر </td></tr><tr><td> المبيضة البيضاء (3153A) </td><td> الوطنية مجموعة من الفطريات الممرضة ، والمملكة المتحدة </td><td> NCPF3153 </td><td></td></tr><tr><td> زيت السمسم </td><td> سيغما الدريخ </td><td> S3547 </td><td> ليس من الضروري أن يكون ما قبل تعقيمها قبل استخدامها </td></tr><tr><td> Β استراديول - 17 - فاليرات </td><td> سيغما الدريخ </td><td> E1631 </td><td> 0.1 - 0.5mg في زيت السمسم </td></tr><tr><td> ببتون فيتون </td><td> بيكتون ديكنسون </td><td> 211906 </td><td> الملحق مع الجلوكوز 0.1 ٪ </td></tr><tr><td> التريبان الأزرق الحل </td><td> سيغما الدريخ </td><td> T8154 </td><td></td></tr><tr><td> أغار سابورو الدكستروز </td><td> بيكتون ديكinson </td><td> 211584 </td><td></td></tr><tr><td> النوع الرابع كولاجيناز </td><td> سيغما الدريخ </td><td> C5138 </td><td> 0.25 ٪ </td></tr><tr><td> Dispase </td><td> Invitrogen </td><td> 17105-041 </td><td> 1.7 U / مل </td></tr><tr><td> شاشات سلكية </td><td> TWP </td><td> 060X060S0065W36T </td><td> رقم 60 سلكية ، غير القابل للصدأ </td></tr><tr><td> هانكس &quot;محلول ملحي متوازن </td><td> Invitrogen </td><td> 24020-117 </td><td></td></tr><tr><td> CytoPrep تثبيتي </td><td> فيشر العلمية </td><td> 12-570-10 </td><td> يحفظ الشرائح مسحة </td></tr><tr><td> بابانيكولاو صمة EA - 65 </td><td> EMD كيماويات </td><td> 7054X - 85 </td><td></td></tr><tr><td> بابانيكولاو صمة OG - 6 </td><td> EMD كيماويات </td><td> 7052X - 85 </td><td></td></tr><tr><td> الهيماتوكسيلين الشب هاريس </td><td> EMD كيماويات </td><td> 638A - 85 </td><td></td></tr><tr><td> Isoflurane </td><td> باكستر للرعاية الصحية </td><td> NDC 10019-773-60 </td><td> تستخدم مع المرذاذ isoflurane أو في نظام مغلق قطرة مخدر الغرفة </td></tr></table>

بروتوكولات لتلقيح المهبل وجمع العينات في النموذج التجريبي للماوس المبيضات المهبل

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

الفرجية المهبلية المبيضات (VVC) ، التي تسببها الأنواع المبيضات ، هو عدوى فطرية لانخفاض المسالك التناسلية للإناث الذي يؤثر على ما يقرب من 75 ٪ من النساء الأصحاء خلال سنوات الإنجاب 18،32-34. وتشمل العوامل المؤهبة استخدام المضادات الحيوية ، والسكري غير المنضبط واضطراب في مستويات الهورمونات التناسلية بسبب الحمل ، وحبوب منع الحمل أو العلاج بالهرمونات البديلة 33،34. VVC المتكررة (RVVC) ، على النحو المحدد ثلاثة أو أكثر من نوبات سنويا ، ويصيب 5 منفصلة إلى 8 ٪ من النساء مع عدم وجود عوامل مؤهبة 33. وقد تم إنشاء نموذج الفأر VVC التجريبية واستخدامها لدراسة والمرضية المخاطية استجابة المضيف ل3،4،11،16،17،19،21،25،37 المبيضات. كما تم توظيف هذا النموذج لاختبار العلاجات المضادة للفطريات محتملة في الجسم الحي 13،24. نموذج يتطلب أن يكون الحفاظ على الحيوانات في حالة pseudoestrus لتختارimal المبيضات الاستعمار / 6،14،23 العدوى. في ظل هذه الظروف ، لن يكون تلقيح الحيوانات الفطرية المهبلية للكشف العبء لمدة أسابيع أو شهور. دراسات سابقة تظهر موازية عالية للغاية بين النموذج الحيواني والعدوى البشرية بالنسبة إلى الخصائص المناعية والفسيولوجية 3،16،21. الخلافات ، ولكن ، وتشمل عدم وجود المبيضات المهبلي والنباتات الطبيعية ودرجة الحموضة المهبلية محايدة في الفئران. هنا ، علينا أن نظهر سلسلة من الطرق الرئيسية في الفأر نموذج المهبل والتي تشمل التلقيح المهبلي ، وجمع عينات من المهبل السريع ، وتقييم عبء الفطرية المهبلية ، والتحضيرات لاستخراج الأنسجة الخلوية / العزلة. ويعقب ذلك من خلال نتائج ممثلة لمكونات السائل غسل المهبل ، وعبء الفطرية ، وتجفيف المحاصيل الكريات البيض العقدة اللمفية. مع استخدام مواد التخدير ، ويمكن جمع عينات غسيل عند نقاط زمنية متعددة على نفس الفئران لتقييم الطولي للالعدوى / الاستعمار. وعلاوة على ذلك ، فإن هذا النموذج يتطلب أية عوامل مناعة لبدء العدوى ، والسماح للدراسات مناعية في ظل ظروف محددة المضيفة. أخيرا ، عرض نموذج وأسلوب كل هنا يمكن أن يحتمل أن يؤدي إلى استخدام منهجيات لدراسة الأمراض المعدية الأخرى لانخفاض المسالك التناسلية للإناث (البكتيرية والطفيلية والفيروسية) ، ومنها دفاعات المضيف المحلي أو النظامية.

مفتاح التقنيات المستخدمة في تقييم<em&gt; المبيضات</emموصوفة&gt; المهبل في نموذج حيواني التجريبية. وسوف تسمح الأساليب جمع العينات السريع لمفاوي من المهبل وتجفيف الغدد الليمفاوية أسفل الظهر. هذه التقنيات يمكن أن تؤدي إلى نماذج الماوس من الأمراض الأخرى في المسالك التناسلية للإناث أقل.

تُعد داء المبيضات الفرجِي المهبلي (VVC)، الذي تسببه أنواع المبيضات (Candida)، عدوى فطرية تصيب الجهاز التناسلي الأنثوي السفلي، وتؤثر على ما يقرب من 75% من ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو توضيح مشكلات إجرائية محددة مرتبطة باستخدام النموذج الحيواني التجريبي لداء المبيضات المهبلي كوسيلة لقياس العبء الفطري المهبلي، وأيضاً لاستخدام الخلايا المهبلية أو اللمفاوية في فحوصات محددة مثل الفحوصات المناعية والنسيجية. سيتم تحقيق ذلك أولاً من خلال توضيح تقنية التلقيح المهبلي في الفئران المعالجة بالإستروجين. بعد ذلك، وبعد قتل الفأر رحيماً، سيتم إجراء غسيل مهبلي لاستعادة المبيضات.بعد ذلك، سيتم استئصال أنسجة المهبل و/أو العقد اللمفاوية المهبلية المصرفة. يمكن فحص سائل الغسيل مجهريًا لإظهار فطريات candida المرتبطة بالخلايا الظهارية المهبلية، أو زرعه على أغار لتقدير العبء الفطري المهبلي. كما يمكن استخدام مسحة من الجزء الخلوي لصبغ الخلايا الظهارية والخلايا اللمفاوية.تتمثل الميزة الرئيسية لاستعراض هذه التقنية في تمكين مستخدمي النموذج الحيواني لالتهاب المهبل من تنفيذها بأقصى قدر من الكفاءة والفاعلية. وتجيب هذه التقنية على أسئلة جوهرية في مجال التهاب المهبل وعلم البيئة، مثل الاستجابات المناعية للمضيف، والتوزيع الخلوي، وفاعلية الأدوية، وفاعلية العلاج المناعي، بالإضافة إلى تأثيرات التحصين، وذلك من خلال استعراض التقنية. ستقوم اليوم طالبة الدراسات العليا في مختبري، Junco Yano، بإصابة فأر بـ C albicans بعد ثلاثة أيام من إعطاء حقنة من beta estradiol.ابدأ بتثبيت الفأر على سطح gRED مستوٍ لتمكينه من التشبث. بعد ذلك، أمسك قاعدة الذيل بإصبعين وارفع الورك للأعلى بحيث تكون الفتحة المهبلية مواجهة إليك. أدخل طرف الماصة بعمق خمسة مليمترات تقريبًا في التجويف المهبلي، ثم اسحب ما يصل إلى 20 µL من معلق اللقاح.أتمِ هذه الخطوة بأسرع ما يمكن وبكل رفق لتقليل توتر الفأر. بعد فترة الحضانة المطلوبة، قم بقتل الحيوان رحمةً وفقاً للبروتوكول المتبع في منشأتك. ثم، وباستخدام إصبعين، أمسك الفأر من قاعدة الذيل بحيث يكون موجهاً للأسفل لتصبح فتحة المهبل مكشوفة لاستخدام الماصة.أدخل 100 µL من محلول PBS المعقم في التجويف المهبلي، وقم بإجراء عملية الغسيل عن طريق السحب والتحريك المتكرر. إذا انسدت طرف الماصة بالخلايا، قم بتفريغ الخلايا المسببة للانسداد وواصل عملية الغسيل بما تبقى من محلول PBS. اجمع سائل الغسيل في أنبوب طرد مركزي دقيق.بعد الانتهاء من إجراء الغسيل المهبلي، ضع الفأر على ظهره وقم بتشبيع منطقة الأربية بـ 70%ethanol. وباستخدام ملقط، ارفع الفتحة البولية للأعلى بحيث تصبح فتحة المهبل مكشوفة. أدخل ملقطاً منحنياً في تجويف المهبل وحدد موقع عنق الرحم مع الحفاظ على إمساك محكم بواسطة الملقط.استخرج عنق الرحم عبر التجويف المهبلي، واستأصل المهبل عند قاعدة فتحة المهبل، ثم افصل عنق الرحم عن المهبل باستخدام مقص جراحي. نظرًا لأن أنسجة المهبل تكون منكمشة، قم بقلبها للحفاظ على التوجيه الأصلي، أو افتحها على شكل ورقة عن طريق إجراء شق جانبي لاستئصال العقد اللمفاوية القطنية والحيوان في وضعية الاستلقاء على ظهره. قم بإشباع منطقة البطن بـ 70%ethanol.قم بإجراء شق جانبي يبدأ من أسفل البطن وصولاً إلى الصدر، ثم قم بكشف الأعضاء الداخلية باستخدام ملقطين في كلتا اليدين. حرك الأمعاء إلى الأعلى حتى تصبح الأوعية الدموية المركزية مرئية. حدد موقع الوريد الأجوف السفلي والشريان الأورطي البطني.يمكن تحديد زوج من العقد اللمفاوية القطنية المجاورة للشريان الأورطي البطني، والتي تقع تقريبًا في منتصف المسافة بين منشأ الشرايين الكلوية والشرايين الحرقفية المشتركة. ويمكن تمييز هذه العقد اللمفاوية بصريًا عن الأنسجة الدهنية من خلال قوامها المرن، كما أنها تكون أفتح لونًا وأكثر عتامة مقارنة بالأنسجة الدهنية. كما أنها تكون أكبر حجمًا بشكل ملحوظ في الحيوانات المصابة مقارنة بتلك غير الملقحة.يتم استئصال العقد الليمفاوية من الحيوانات عن طريق وضع ملاقط دقيقة تحت العقدة ثم سحبها بلطف لفصلها عن الأنسجة المحيطة. وبعد استئصال الأنسجة، تُنقل العقد الليمفاوية إلى شاشة سلكية معقمة موضوعة داخل طبق بتري زجاجي معقم يحتوي على حوالي 10 milliliters من محلول هانك الملح الموازن (Hank's balanced salt solution). لعزل الخلايا الليمفاوية، يُرجى الرجوع إلى البروتوكول المكتوب.تتكون الأجزاء الخلوية لسائل غسيل المهبل من الفئران التي تم تلقيحها قبل أربعة أيام على الأقل عادةً من خلايا ظهارية مصابة بالكانديدا ورشاحات خلوية، كما هو موضح هنا بواسطة المجهر للفحص المباشر. يمكن التعرف على الكانديدا من خلال وجود PHA بالإضافة إلى الخميرة. هنا يتم صبغ تحضيرات لطخات من سائل غسيل المهبل.باستخدام تقنية لطاخة باب (pap smear) لفحص الخلايا الظهارية وكريات الدم البيضاء المتسللة والتي تعد الخلايا المتعادلة هي الخلايا الرئيسية فيها، ويمكن التعرف عليها من خلال الفصوص الثلاثية النواة. يُكشف عن عدد قليل جداً من الخلايا المتعادلة، إن وجدت، في الفئران غير الملقحة. يوضح هذا الشكل مثالاً على العبء الفطري المهبلي.يتم جمع سائل الغسل المهبلي في نقاط زمنية محددة واستزراعه لتعداد وحدات تشكيل المستعمرات (CFU). في هذا المثال، جُمع السائل في اليوم الخامس بعد التلقيح، ثم خُفف تسلسلياً، ووُزع على أطباق الاستزراع، وحُضن لمدة 48 ساعة. بعد ذلك، يتم عد المستعمرات وحساب العبء الفطري المهبلي؛ حيث يستمر الاستعمار المهبلي أو العدوى بفطر candida لعدة أسابيع في الفئران الملقحة والمعالجة بالإستروجين.بينما تفشل المبيضات (candida) في تكوين استعمار مهبلي في الفئران الملقحة غير المعالجة بالإستروجين، تظل الفئران غير الملقحة والمعالجة بالإستروجين سلبية للمبيضات طوال الفترة الزمنية. بالإضافة إلى ذلك، يمكن إجراء الغسولات المهبلية إما لمرة واحدة على فئران منفصلة في كل نقطة زمنية، أو بشكل طولي في نفس الفئران تحت التخدير. وعند محاولة تنفيذ هذا الإجراء، من المهم تذكر تثبيت الحيوانات بإحكام لتجنب إحداث صدمة للمهبل، ويرجى تخصيص الوقت اللازم للغسل بدقة للحصول على تقدير دقيق للعبء الفطري المهبلي عند استخراج الأنسجة المهبلية.استخدم محلول PBS الساكن لمنع جفاف العينات، ويرجى توخي الحذر لعدم إتلاف الأوردة والشرايين الرئيسية عند استئصال العقد اللمفاوية، وأثناء معالجة خلايا العقد اللمفاوية، احتفظ بها على الثلج أو عند درجة حرارة 4 °C للحفاظ على حيوية الخلايا. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية توظيف نموذج الفأر التجريبي لالتهاب المهبل بفطر الكانديدا (candida vaginitis) لقياس الحمل الفطري المهبلي كمياً بشكل قابل للتكرار، واستئصال الأنسجة المهبلية أو اللمفاوية لإجراء فحوصات مناعية أو نسيجية محددة.

protocols-for-vaginal-inoculation-sample-collection-experimental

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

علم المناعة والعدوى

المصدر: Morrill, S. R., et al. نماذج من الاستعمار المهبلي الفئران بواسطة البكتيريا المزروعة اللاهوائية. J. Vis. خبرة. (2022)يوضح هذا الفيديو بروتوكولا لنمذجة الاستعمار المهبلي في الفئران باستخدام البكتيريا اللاهوائية المقاومة للمضادات الحيوية. يبدأ بالعلاج الهرموني لزيادة القابلية للإصابة الظهارية ، يليه التلقيح المهبلي والتلقيح المشترك في ظل ظروف لاهوائية. يختتم الإجراء بأخذ عينات ما بعد التلقيح والثقافة لتقييم الاستعمار البكتيري وتكوين الأغشية الحيوية.

نمذجة استعمار الفئران المهبلي بواسطة البكتيريا اللاهوائية

المصدر: أوبراين، نائب الرئيس وآخرون. التهاب المسالك البولية المتكرر في الإشريكية القولونية ناجم عن تعرض المثانة المهبلية في الفئران. J. Vis. Exp. (2020)يوضح هذا الفيديو تحضير لقاح غاردنيلا المهبلي لإنشاء نموذج فأر لعدوى المسالك البولية المتكررة.

تحضير جرعة غاردنيلا المهبلية لنمذجة التهابات المسالك البولية المتكررة في الفئران

المصدر: باتراس، ك. أ.، دوران، ك. س. نموذج فأر لاستعمار المكورات العقدية من المجموعة ب. J. Vis. Exp. (2016)يوضح هذا الفيديو تحضير وتلقيح فأر أنثى عولجت بالهرمونات مصابة بالمكورات العقدية من المجموعة B لنمذجة العدوى. يشرح كيفية زراعة وتحضير البكتيريا، وإعطاء اللقاح في التجويف المهبلي، وضمان نجاح العدوى.

تأسيس نموذج فأر لعدوى المكورات العقدية في المجموعة ب المهبلية

يوضح هذا الفيديو تأسيس عدوى الإشريكية القولونية المسببة للبول في مثانة الفئران الأنثوية من خلال تقطير القسطرة عبر الإحليل. نجحت البكتيريا المحقونة في إنشاء عدوى في المسالك البولية داخل المثانة ، مما يوفر منصة قيمة لدراسة الأمراض المرتبطة بالرعاية الصحية المتعلقة بالمسالك البولية.

إنشاء نموذج لعدوى المسالك البولية في إناث الفئران

يوضح هذا الفيديو تطوير نموذج فأر في الجسم الحي لدراسة تكوين الأغشية الحيوية للمبيضات البيضاء في الأنسجة تحت الجلد. تتضمن التجربة زرع أجهزة مصابة بالشميضات في المنطقة الخلفية للحيوان لتطوير الأغشية الحيوية.

المبيضات البيضاء تكوين الأغشية الحيوية في نموذج فأر In Vivo

على الرغم من توفر نماذج عدوى المبيضات لدراسة المقاومة المناعية للمضيف ، إلا أن نموذجا لدراسة علم الأمراض المناعي بوساطة الخلايا التائية في سياق عدوى المبيضات غائب. نصف هنا طريقة لتأسيس علم الأمراض المناعي Th17 المرتبط بعدوى المبيضات الفموية في الفئران التي تعاني من نقص المناعة.

Th17 التهاب نموذج من الفم والبلعوم المبيضات في الفئران العوز المناعي

والغرض من هذا البروتوكول هو تقليد مجموعة بشرية الثانية العقدية (GBS) الاستعمار المهبل في نموذج الفئران. ويمكن استخدام هذا الأسلوب لتحقيق الاستجابة المناعية والعوامل البكتيرية المساهمة في GBS استمرار المهبلي، وكذلك لاختبار الاستراتيجيات العلاجية.

نموذج الفئران من المجموعة الثانية<em&gt; العقدية</em&gt; المهبلية الاستعمار

هنا، نقدم طريقة فعالة وفعالة لحقن الوريد ذيل القوارض باستخدام جهاز الاحترار / تقييد مصممة بشكل فريد. من خلال تبسيط بدء عمليات توسع الأوعية وتقييدها ، يسمح هذا البروتوكول بحقن دقيقة وفي الوقت المناسب عن طريق الوريد لمجموعات كبيرة من الحيوانات بأقل قدر من الضيق.

جهاز الاحترار / تقييد المعاصرة لحقن الوريد الذيل كفاءة في نموذج الإنتان الفطرية مورين

يقدم البروتوكول نموذجا للفأر للاستعمار المهبلي مع البكتيريا المهبلية البشرية المزروعة لاهوائيا. نحن نركز على Gardnerella vaginalis ، مع تضمين اقتراحات ل Prevotella bivia و Fusobacterium nucleatum. يمكن أيضا استخدام هذا البروتوكول كدليل للتلقيح المهبلي والتعافي القابل للتطبيق للبكتيريا الأخرى المزروعة لاهوائيا.

نماذج من استعمار الفئران المهبلي بواسطة البكتيريا المزروعة لاهوائيا

أنشأنا نموذجا للفأر للعدوى المرتبطة بالقسطرة المرتبطة ب C.albicans (CRI) ، حيث يتشكل الغشاء الحيوي على القسطرة ، ويرتبط التفاعل بين C.albicans والمضيف جيدا مع CRI السريري. يساعد هذا النموذج في فحص العلاجات ل CRI المرتبط بالأغشية الحيوية C.albicans ، مما يضع أساسا للتحول السريري.

نموذج عدوى المبيضات البيض المرتبط بالقسطرة في الماوس

الولادة المبتسرة (الولادة &lt; 37 أسبوعا) هي قضية صحية عالمية ملحة مع خيارات الوقاية والعلاج دون المستوى الأمثل. نقدم نموذجا للفأر للولادة المبكرة الناجمة عن العدوى البكتيرية المهبلية الصاعدة ونوضح كيفية تحليل المراضة والوفيات الناتجة لحديثي الولادة.

نمذجة العدوى المهبلية الصاعدة والولادة المبكرة ومراضة حديثي الولادة لدى الفئران

تعلم تقنيات تلقيح المهبل وجمع العينات في نموذج الفئران التجريبي لدراسة التهاب المهبل بالمبيضات. يتيح هذا الأسلوب قياس العبء الفطري وتحليل الخلايا المناعية بدقة.

بروتوكولات لتلقيح المهبل وجمع العينات في النموذج التجريبي للماوس المبيضات المهبل

استكشف المزيد من الفيديوهات