Name: طريقة بسيطة للتصوير Arabidopsis يغادر طريق Perfluorodecalin كوسيط التصوير إختراقي (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-01-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 19 s
Description: تعلم تقنية التصوير العميق لأوراق Arabidopsis thaliana باستخدام بيرفلوروديكالين كوسط تصوير اختراقي. تعزز هذه الطريقة وضوح الصور الخلوية الحية وتضاعف عمق التصوير مقارنة بالأوساط المائية التقليدية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

فإن الكتاب أود أن أشكر البروفيسور نيكولاس سميرنوف من جامعة اكستر لنصيحته ، وجامعة اكستر مرفق Bioimaging. وقدم التمويل من جانب المملكة المتحدة الحيوية والعلوم الحيوية مجلس البحوث (منحة مرجع BB/E002682/1).

بروتوكول الواردة أدناه توضح طريقة بسيطة لاستخدام PFD كوسيط الارتشاحي المتصاعدة في أوراق thaliana Arabidopsis ، لكننا نتوقع أن تكون قد استخدمت هذا الأسلوب في مجموعة متنوعة من التطبيقات حيث هو المطلوب التصوير الجوي الغنية الأنسجة. 1. عينات نبات المتصاعد في PFD <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد شريحة المجهر مع طوقا من الغاز نفاذية polydimethylsiloxane (PDMS ، كارولينا مراقبة جل). PDMS هو بوليمر اللزجة ويمكن مصبوب لتوفير غرفة مصممة خصيصا لمتطلبات التجريبية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> PFD تتوازن مع الهواء. ويمكن تحقيق هذا عن طريق محتدما مع الهواء أو عن طريق هز وحدة تخزين صغيرة من PFD في زجاجة مليئة بالهواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> PFD صب في طبق بيتري المفتوحة وتعويم الشتلة كليا أو رفعه على أوراق PFD لمدة 5 دقائق. يجب أن تصبح الأنسجة شفافة ، تشبه أنسجة المزجج (الشكل 2 (أ)). قد يبدو أكثر قتامة أو أوراق أخف من ذي قبل التعرض لPFD ، depenقرع على استخدام ظروف الإضاءة وعمر الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تملأ الغرفة PDMS مع الهواء ومعايرتها PFD نقل بعناية عينات الأنسجة من الحضانة طبق بتري إلى غرفة PDMS. ختم الشريحة مع ساترة والصورة وفقا لمتطلبات التجريبية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملاحظة : PFD ينفذ بشكل جيد أيضا في غرفة مفتوحة بنيت على ساترة أو في غرفة نضح ومتوافق مع الشحوم السيليكون. PFD غير متوافق مع مكونات تفلون كما يذوب فيها. </li></ol> 2. ممثل النتائج : التفتيش المجهري لعينات أوراق PFD - المحتضنة يظهر أن غمرت المياه معظم أجوائها. الشكل 2 (ب) يبين أجوائها غمرت مع وقف التنفيذ في المؤتلف GFP PFD. فمن الواضح أن غمرت المياه على ورقة مع PFD الحضانة ، ولكن من حين لآخر جيوب الهواء قد تبقى. مياه الفيضان لا ورقة في ظل هذه الظروف. LSCM عينات المحتضنة والتي شنت في الأشعة تحت الحمراء ، يظهر الماء أو PFD PFD أن يعطي ميزة على الماء والهواء في عمق التصوير المحتملة (الشكل 3). المثال الوارد في الشكل 3 يبين الهواء والماء وشنت PFD Arabidopsis يترك التعبير عن فينوس المترجمة cytosolically ، وهو البديل من YFP ال 11 التي يتم التعبير constitutively تحت المروج 35S. يمكننا أن نرى تقريبي 2 أضعاف زيادة في عمق التصوير عند مقارنة PFD والمياه. وتجدر الإشارة إلى أنه ، مع ذلك ، أن تحسين دقة المشاهدة عند استخدام PFD يختلف مع الفتحة العددية للعدسة ، ونوع من النسيج المستخدمة. لقد شهدنا تدفق حشوية والجذرية استطالة الشعر في PFD الشتلات المعالجة ، كل الإرشادية من النباتات الصحية. بالإضافة أظهرنا (2) أن FV / FM ، وهو مقياس لأداء التمثيل الضوئي للنباتات لا يزال في حدود 12 تحمله خلال فترات زمنية المستخدمة في التصوير. 3394fig1.jpg "/&gt; الشكل 1. أوراق النبات التعقيد والآثار البصرية Diagrammatical التمثيل تبين الخصائص التشريحية للألف أوراق thaliana فيما يتعلق البصرية انشاء. المختصرات المستخدمة هي الكائنات. = الهدف العدسة ، IMM. = السائل الغمر ، COV. = ساترة ، MNT. = mountant ، قطع. = بشرة ، الإعلانية. الجيش الشعبي. = متجه نحو المحور البشرة ، ش. = المسام فوهي ، س. = mesophyll الاسفنجية ، كما = الفضاء الجوي ، PAL. = الحسيكة mesophyll ، VB = حزمة الأوعية الدموية ، والإعلان. الجيش الشعبي. = متجه نحو المحور البشرة. يشار إلى جدران الخلايا بواسطة خطوط سوداء. <img alt="الشكل 2." src="/files/ftp_upload/3394/3394fig2.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="الشكل 2."> الشكل 2. PFD تخترق بسهولة يترك Arabidopsis (أ) أوراق المحتضنة في الهواء أو الماء أو PFD لمدة 5 دقائق والمصورة باستخدام كاميرا رقمية لايكا DCF3000FX مع المجهر MZ16F ايكا (لايكا مايكروسيستمز (المملكة المتحدة) المحدودة ، وميلتون كينز ، المملكة المتحدة). وقد طبع الشعار على الفيلم إن الرب خلات ومضيئة جيئة وذهابامتر تحت الضوء مع مربع. كان زمن التعرض 89 مللي ، وجمعت كل الصور ومعالجتها بشكل مماثل. أشرطة النطاق تمثل 2 ملم. (ب) تحمل PFD المنقى المؤتلف البروتين الفلوري الأخضر (GFP) يحد أجوائها في الجسم الحي. GFP خضراء اللون كاذبة ، ويستخدم لإظهار الحمراء لصناعة السيارات في مضان الكلوروفيل الذي يفصل الخلايا mesophyll. (الشكل 2 (ب) مستنسخة بإذن والتفاصيل التقنية الكاملة المتاحة في ليتل وآخرون 2010 2). أشرطة النطاق تمثل 25 م <img alt="الشكل 3." src="/files/ftp_upload/3394/3394fig3.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="الشكل 3."> الشكل 3. PFD يحسن التصوير مبائر في الأوراق التقط الصور يترك LSCM تظهر المترجمة cytoplasmically فينوس مضان (الأخضر) ، وتألق ذاتي الكلوروفيل (الحمراء) في thaliana ألف سليمة في الهواء أو الماء أو PFD. وكان طول الموجة 514 نانومتر ، والإثارة وسجلت الانبعاثات مضان في 518 نانومتر 604 نانومتر لفينوس وعلى 657 نانومتر679 نانومتر لالبلاستيدات الخضراء. كل لوحة هو مقطع واحد متحد البؤر مأخوذة من Z - 11 كومة من الصور مبائر المكتسبة في فترات 5 ميكرون. تم استخراج هذه من كومة - Z كامل من 59 صور حصلت على 1 ميكرومتر فترات ، والتي تم استخدامها لإنتاج الأفلام التكميلية. وترد قياسات العمق النسبي لسطح البشرة. وتظهر الصور التمثيلية ، والتي تم تجهيزها بشكل مماثل. تفاصيل التجريبية مثل إعدادات المجهر مماثلة لتلك الموجودة في ليتل وآخرون ، 2010 2. Scalebars تمثل نحو 20 ميكرومتر.

<ol><li>Inoue, S. Foundations of Confocal Scanned Imaging in Light Microscopy. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aInoue%2C+S+%22Handbook+of+Biological+Confocal+Microscopy%2C+3rd%22">Handbook of Biological Confocal Microscopy, 3rd</a>. Pawley, J. P. , Springer Science & Business Media, LLC. New York. 1-16 (2006).</li>
<li>Littlejohn, G. R., Gouveia, J. D., Edner, C. S. mirnoff, N,, Love, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfluorodecalin+substantially+improves+confocal+depth+resolution+in+air-filled+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22New.+Phytologist%22%5BJournal%5D)">Perfluorodecalin substantially improves confocal depth resolution in air-filled tissues.</a> New. Phytologist. 186, 1018-1025 (2010).</li>
<li>Sargent, J. W., Seffl, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Properties+of+perfluorinated+liquids.+Fed%5BTitle%5D)+AND+%22Fed.+Proc%22%5BJournal%5D)">Properties of perfluorinated liquids. Fed.</a> Fed. Proc. 29, 1699-1703 (1970).</li>
<li>Schönherr, J., Bukovac, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Penetration+of+stomata+by+liquids%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Penetration of stomata by liquids.</a> Plant Physiol. 49, 813-819 (1972).</li>
<li>Davies, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liquid+ventilation%5BTitle%5D)+AND+%22Paediatr.+Child.+Health%22%5BJournal%5D)">Liquid ventilation.</a> Paediatr. Child. Health. 35, 434-437 (1999).</li>
<li>Shaffer, T. H., Wolfson, M. R., Greenspan, J. S., Hoffman, R. E., Davis, S. L., Clark, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liquid+ventilation+in+premature+lambs%3A+uptake%2C+biodistribution+and+elimination+of+perfluorodecalin+liquid%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Fertil.+Dev%22%5BJournal%5D)">Liquid ventilation in premature lambs: uptake, biodistribution and elimination of perfluorodecalin liquid.</a> Reprod. Fertil. Dev. 8, 409-416 (1996).</li>
<li>Crafoord, S., Larsson, J., Hansson, L. J., Carlsson, J. O., Stenkula, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+perfluorocarbon+liquids+in+vitreoretinal+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Acta.+Ophthalmol.+Scand%22%5BJournal%5D)">The use of perfluorocarbon liquids in vitreoretinal surgery.</a> Acta. Ophthalmol. Scand. 73, 442-445 (1995).</li>
<li>Lowe, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+blood%3A+synthetic+substitutes+from+fluorinated+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Engineering blood: synthetic substitutes from fluorinated compounds.</a> Tissue Eng. 9, 389-399 (2003).</li>
<li>Wardrop, J., Edwards, C. M., Lowe, K. C., Davey, M. R., Power, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+responses+of+plant+protoplasts+to+culture+with+oxygenated+perfluorocarbon%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Exp.+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">Cellular responses of plant protoplasts to culture with oxygenated perfluorocarbon.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 428, 501-505 (1997).</li>
<li>Sukumaran, N. P., Quamme, H., Weiser, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+fluorocarbons+to+study+freezing+in+plant+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Use of fluorocarbons to study freezing in plant tissues.</a> Plant Physiol. 50, 632-634 (1972).</li>
<li>Nagai, T., Ibata, K., Park, E. S., Kubota, M., Mikoshiba, K., Miyawaki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+variant+of+yellow+fluorescent+protein+with+fast+and+efficient+maturation+for+cell-biological+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A variant of yellow fluorescent protein with fast and efficient maturation for cell-biological applications.</a> Nat. Biotechnol. 20, 87-90 (2002).</li>
<li>Baker, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chlorophyll+fluorescence%3A+a+probe+of+photosynthesis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Plant.+Biol%22%5BJournal%5D)">Chlorophyll fluorescence: a probe of photosynthesis in vivo.</a> Annu. Rev. Plant. Biol. 59, 89-113 (2008).</li>
</ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

هذا هو أسلوب بسيط وسهل الاستخدام لتحسين الفحص المجهري للهواء أو معقدة مليئة بصريا الأنسجة. لقد أظهرنا أن لديه بعض مزايا تقنية قوية ، ونحن نأمل أن يتم استخدامها لتوضيح المسائل المتعلقة البيولوجية في الهواء الغنية الأنسجة. على سبيل المثال فإنه سيكون خيارا طبيعيا للدراسات من مهاجمة مسببات الأمراض النباتية في mesophyll أو في الرئتين. ونحن أيضا على بينة من القيود المفروضة على هذه التقنية. نحن نعمل على تحسين مطابقة معامل الانكسار ، مع استخدام وسائل أخرى للالمجهري ، وتجديد المشبعة mountant خلال التجارب الزمني الطويل. ونحن ندرك أيضا ، على الرغم من أن واحدة من المزايا الرئيسية لبالفلور ، ويجري وهي خاملة بيولوجيا والجانب الثاني. بالفلور لا تذوب بسهولة الجزيئات البيولوجية مما يعني أيضا أنه لا يمكن استخدامها بسهولة لتوفير مركبات ذات الأهمية مثل الهرمونات ، والمخدرات ، والجزيئات الصغيرة الأخرى أو الأيونات.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم الكاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> Perfluorodecalin </td><td> F2 كيماويات </td><td> N / A </td><td> الهاتف لأجل. </td></tr><tr><td> كارولينا مراقبة جل </td><td> شفرات البيولوجي </td><td> 13-2700 </td><td></td></tr></tbody></table>

طريقة بسيطة للتصوير arabidopsis يغادر طريق perfluorodecalin كوسيط التصوير إختراقي

A Simple Method for Imaging Arabidopsis Leaves Using Perfluorodecalin as an Infiltrative Imaging Medium

ومن المعترف به على نطاق واسع لمشكلة الحصول على صور عالية الدقة في عمق العينات البيولوجية 1. في الهواء مملوءة الأنسجة مثل mesophyll الاسفنجية من أوراق النبات أو الرئتين الفقاريات المزيد من الصعوبات الناجمة عن التحولات المتعددة في معامل الانكسار بين المكونات الخلوية ، وبين الخلايا وأجوائها ، وبين الأنسجة البيولوجية وبقية النظام البصري. علاوة على ذلك ، عدم التطابق معامل الانكسار يؤدي إلى توهين من الإثارة وانبعاث fluorophore في إشارة المجهري مضان. نحن هنا وصف تطبيق المشبعة ، perfluorodecalin (PFD) ، كوسيط التصوير الارتشاحي مما يحسن الليزر بصريا المسح المجهري متحد البؤر (LSCM) على عمق التصوير عينة ، من دون اللجوء الى الزيادات الضارة في قوة الليزر ، والحد الأدنى من التأثير الفيزيولوجي 2. نحن تصف البروتوكول لاستخدام PFD مع Arabidopsis thaliana الأنسجة ورقة ، وهو مجمع بصريا نتيجة لهاهيكل (الشكل 1). PFD لديها عدد من السمات التي تجعلها مناسبة لهذا الاستخدام 3. معامل انكسار PFD (1.313) هو مقارنة مع تلك المياه (1.333) ، وأقرب إلى العصارة الخلوية (حوالي 1.4) من الهواء (1،000). بالإضافة إلى ذلك ، PFD في متناول الجميع ، غير الفلورسنت وغير سامة. التوتر السطحي انخفاض PFD (19 سم dynes -1) هو أقل من المياه (72 سم dynes -1) ، وأيضا أقل من الحد (25 -- 30 سم داين -1) لاختراق فوهي 4 ، مما يسمح لها الفيضانات وأجوائها mesophyll إسفنجي دون تطبيق فراغ يمكن أن تكون مدمرة أو السطحي. أخيرا والأهم من ذلك PFD لديه قدرة كبيرة على تذويب CO 2 و O 2 ، والذي يسمح بالإبقاء تبادل الغاز في الأنسجة غمرت المياه ، مما يقلل من تأثير على العينة الفسيولوجية. وقد استخدمت هذه الخصائص في مختلف التطبيقات التي تشمل التنفس السائل جزئية وinfla الرئة5،6 نشوئها ، والجراحة 7 ، 8 الدم الاصطناعي ، الأوكسجين في نمو وسائل الاعلام 9 ، ودراسات لتكوين بلورات الجليد في النباتات 10. حاليا ، فمن الشائع أن يشن في الماء أو الأنسجة العازلة للتصوير المائي مبائر حية. نحن نعتبر أن استخدام PFD كوسيلة متزايدة يمثل تحسنا في الممارسة الحالية وتسمح للتحضير عينات بسيطة من العيش ورقة كاملة للتصوير.

نحن تصف استخدام perfluorodecalin كوسيط الارتشاحي المتزايدة. هذه هي طريقة بسيطة لتحسين عمق في التصوير<em&gt; thaliana Arabidopsis</em&gt; أنسجة نبات مع الحد الأدنى من التأثير الفيزيولوجي.

طريقة بسيطة للتصوير Arabidopsis يغادر طريق Perfluorodecalin كوسيط التصوير إختراقي

يُعدُّ تحدي الحصول على صور عالية الدقة في عمق العينات البيولوجية مشكلة معترفاً بها على نطاق واسع1. ففي الأنسجة المملوءة بالهواء، مثل النسيج المتوسط الإسفنجي لـ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو تقليل تدهور الصور البيولوجية الناتج عن المسافات الهوائية في أوراق النباتات للحصول على صور أكثر وضوحاً للخلايا الحية داخل الورقة. إذا تم تثبيت الورقة في وسط تثبيت مائي وتم تحفيز الفلوروفور بواسطة الليزر، فإن العديد من المساحات الهوائية غير المملوءة والتغيرات في معامل الانكسار داخل النسيج الموضح باللون البرتقالي تحد من قوة الإشارة القادمة من عمق النسيج في الصورة الناتجة. أما إذا تم تثبيت الورقة بدلاً من ذلك في مادة per fluoro deline أو PFD، فإن تحفيز الليزر الناتج للفلوروفور يكون أقل تخامداً ويسمح بنقل أفضل للإشارات المنبعثة.وفي الختام، فإن استخدام المجهر البؤري الماسح بالليزر مع وسط التركيب PFD يعطي صوراً واضحة للخلايا الحية داخل ورقة النبات على عمق يزيد عن ضعف العمق الممكن تحقيقه عند استخدام وسط تركيب مائي. تكمن الميزة الرئيسية لهذه التقنية مقارنة بالطرق الحالية، مثل تثبيت الأوراق أو تركيبها في أوساط مائية، في أنها تقلل الانكسار داخل النسيج المتوسط (mesophyll)، مما يسمح بتصوير أكثر دقة للخلايا الحية في أعماق أكبر داخل الورقة، وهو ما كان يشكل تحدياً سابقاً. يمكن لهذه الطريقة أن تساعد في الإجابة على أسئلة محورية في علم النبات، مثل دراسة بيولوجيا خلايا النسيج المتوسط والإشارات الحيوية داخل الكائن الحي (in vivo)، واستعمار المسببات المرضية للأوراق والتفاعلات بين المسببات المرضية والنسيج المتوسط، كما يمكن لهذه الطريقة أن توفر رؤى معمقة حول بيولوجيا النبات الأساسية.ويمكن أيضاً تطبيق هذه الطريقة على الأنسجة الأخرى ذات معامل الانكسار العالي والغنية بالمساحات الهوائية، مثل اللوالب الداخلية أو رئات الفقاريات. وسيقوم الدكتور George Littlejohn من مختبري في Mount Leaf باستعراض هذا الإجراء. تبدأ العينات في PFD بتحضير شريحة مجهرية باستخدام حاشية نفاذة للغاز من مادة poly dimethyl siloxane أو P-D-M-S، وهي عبارة عن بوليمر لزج مرن يمكن تشكيله لتوفير غرفة مصممة خصيصاً وفقاً للمتطلبات التجريبية.قم بموازنة الـ PFD مع الهواء عن طريق رج حجم صغير من الـ PFD في زجاجة مملوءة بالهواء. ويمكن تحقيق ذلك أيضًا عن طريق تمرير فقاعات من الهواء عبر الـ PFD؛ بعد ذلك، صب الـ PFD في أطباق بتري مفتوحة وقم بتعويم شتلة كاملة أو ورقة مقطوعة على السائل لمدة خمس دقائق. يجب أن تصبح الأنسجة شفافة بشكل يشبه الأنسجة المزجججة.قد تبدو الأوراق بلون أغمق أو أفتح مما كانت عليه قبل التعرض لـ PFD، وذلك بناءً على ظروف الإضاءة وعمر النسيج المستخدم. وأخيرًا، املأ حجرة PDMS بـ PFD المهوى، وانقل عينات النسيج بعناية من طبق بتري الخاص بالتحضين إلى حجرة PDMS. أحكم غلق الشريحة باستخدام غطاء الشريحة ثم قم بالتصوير.وفقاً للمتطلبات التجريبية، تم تحضين أوراق الأشهر لمدة خمس دقائق في معلق من البروتين الفلوري الأخضر المؤتلف أو GFP. وفي الفحص المجهري بـ PFD، تظهر عينات الأوراق المحضنة بـ PFD أن غالبية الفراغات الهوائية غمرت بالـ GFP المؤتلف المعلق في PFD. يظهر GFP باللون الأخضر، بينما يمثل اللون الأحمر الكلوروفيل، والفلورة التلقائية، وخلايا الميزوفيل.من الواضح أن الورقة تُغمر عند الحضانة باستخدام PFD، ولكن قد تظل هناك جيوب هوائية متفرقة. ولا يغمر الماء الورقة في ظل هذه الظروف. هنا، تم تحضين وتركيب أوراق opsys تعبر عن Venus، وهو بديل لـ YFP يتمركز في العصارة الخلوية، في الهواء أو الماء أو PFD باستخدام المسح الليزري. ويظهر المجهر البؤري للعينات تفوق PFD على الهواء والماء، مع زيادة تقريبية بمقدار ضعفين في عمق التصوير.عند مقارنة PFD بالماء، يمكن تنفيذ هذه التقنية في غضون خمس إلى 10 دقائق بمجرد إتقانها إذا تم تنفيذها بشكل صحيح. وأثناء إجراء هذه العملية، من المهم تذكر أن perflurodecalin يذيب طلاء الأظافر والتفلون، ولكنه متوافق مع شحم السيليكون. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية استخدام perflurodecalin كوسيط تثبيت لتحسين التصوير في خلايا أوراق النباتات.لا تنسَ أنه على الرغم من أن مادة per fluoro delin غير سامة، إلا أننا نوصي باتباع ممارسات السلامة القياسية عند تنفيذ هذا الإجراء.

a-simple-method-for-imaging-arabidopsis-leaves-using-perfluorodecalin

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

قمنا بتطوير بروتوكول بسيطة وقابلة للتكرار للوصول إلى استجابة فوهي للبكتيريا حية. هذا الأسلوب يقلل من اصابة والتلاعب في أوراق بالمقارنة مع استخدام قشور البشرة ذكرت سابقا.

تقييم الاستجابة للعيش فوهي الخلايا البكتيرية باستخدام التصوير الجامعة ليف

تنص هذه المادة على بروتوكول للزراعة شتلات Arabidopsis في RootChip، منصة التصوير ميكروفلويديك الذي يجمع بين التحكم الآلي من شروط النمو مع مراقبة جذر المجهرية والحنق القائم على قياس مستويات الأيض داخل الخلايا.

الوقت الفاصل بين التصوير الإسفار من نمو الجذور Arabidopsis مع التلاعب السريع للبيئة الجذر باستخدام RootChip

وصفنا باستخدام بروتوكول الشرائح غرفة وسائل الاعلام الى شل النبتات مصنع للتصوير مبائر للبشرة على مدى عدة أيام للتنمية وتوثيق التمايز الثغور. يمكن تتبع البروتينات Fluorophore الموسومة بشكل حيوي بواسطة التعبير وتوطين التحت خلوية، وزيادة فهم أدوارهم ممكن خلال انقسام الخلايا وتمايز الخلايا من نوع.

على المدى الطويل، عالية الدقة الفاصل الزمني متحد البؤر التصوير من<em&gt; الطفلق ل arabidopsis</em&gt; البشرة خلال إنبات

كاليفورنيا 2+ إشارات تنظم العمليات البيولوجية المختلفة في النباتات. هنا نقدم النهج لرصد يسببها الإجهاد اللاحيوي الكالسيوم المكاني والزماني 2+ الإشارات في الخلايا والأنسجة باستخدام المشفرة وراثيا الكالسيوم 2+ مؤشرات Aequorin أو Case12 نبات الأرابيدوبسيس.

قياس المكانية والزمانية كاليفورنيا 2+ إشارات في النباتات نبات الأرابيدوبسيس

يوفر العيش التصوير متحد البؤر علماء الأحياء مع أداة قوية لدراسة التنمية. هنا، نقدم بروتوكول مفصل عن التصوير متحد البؤر المباشر لتطوير الزهور نبات الأرابيدوبسيس.

يعيش متحد البؤر التصوير من تطوير نبات الأرابيدوبسيس الزهور

المقدمة هنا هو تقنية بسيطة عالية الدقة متحد البؤر الفاصل الزمني التصوير من الجذر وتطوير هيبوكوتيل لمدة تصل إلى 3 أيام باستخدام عالية الأهداف العددي الفتحة و بيرفلوروديكالين كوسيلة الغمر.

غرفة بسيطة للتصوير متحد البؤر على المدى الطويل من تطوير الجذر والهيبوكوتيل

يوضح هذا المقالة كيفية الثقافة شتلات نبات التمويل في منصة طبقتين موائع جزيئية أن يحصر الجذر الرئيسي والشعر الجذر لطائرة بصري واحد. يمكن استخدام هذا البرنامج للتصوير الضوئي في الوقت الحقيقي مورفولوجيا الجذر غرامة كذلك أما بالنسبة للتصوير عالي الدقة بوسائل أخرى.

التصوير مورفولوجيا الجذر الشعر شتلات نبات في منصة موائع جزيئية طبقتين

نقدم هنا، على بروتوكول للتوليف وتوصيف جسيمات نانوية أكسيد السيريوم الرباعي (نانوسيريا) لروس (أنواع الأكسجين التفاعلية) المسح في فيفو، نانوسيريا التصوير في الأنسجة النباتية بالفحص المجهري [كنفوكل]، و في فيفو رصد نانوسيريا روس الكسح بالفحص المجهري [كنفوكل].

مسح الحفاز لمصنع الأكسجين التفاعلية الأنواع في فيفو بجسيمات نانوية أكسيد السيريوم أنيونى

نحن تقرير طريقة بسيطة ومرنة لإجراء تصوير لايف الفلورسنت من أوراق نبات التمويل على مدى فترة ممتدة من الوقت. ونحن نستخدم نبات نبات المعدلة وراثيا معربا عن جين مراسل فلورسنت تحت سيطرة المروجين المتعلقة بالحصانة كمثال لفهم الاستجابات المناعية مصنع الزمانية المكانية.

أسلوب متعدد الاستخدامات لتركيب نبات يترك لتصوير الوقت الفاصل بين إينترافيتال

الهدف من هذا البروتوكول هو إظهار كيفيه تحميل CFDA إلى مواقع مختلفه من الأجزاء السفلية من Arabidopsis. ثم نقدم نمط التوزيع الناتج من CF في البراعم.

حركه إطلاق النار من الراسم CFDA المحملة في الانسجه بالوعة القاع من Arabidopsis

يتم تقديم العديد من الطرق الشائعة الاستخدام هنا لدراسة أحداث الاتجار بالغشاء لمستقبلات غشاء البلازما كيناز. تصف هذه المخطوطة البروتوكولات التفصيلية بما في ذلك تحضير المواد النباتية والمعالجة الدوائية وإعداد التصوير متحد البؤر.

الطرق القائمة على الصور لدراسة أحداث الاتجار بالغشاء في خلايا سلالة الثغور

تعلم تقنية التصوير العميق لأوراق Arabidopsis thaliana باستخدام بيرفلوروديكالين كوسط تصوير اختراقي. تعزز هذه الطريقة وضوح الصور الخلوية الحية وتضاعف عمق التصوير مقارنة بالأوساط المائية التقليدية.

طريقة بسيطة للتصوير Arabidopsis يغادر طريق Perfluorodecalin كوسيط التصوير إختراقي

استكشف المزيد من الفيديوهات