نموذج الفأر من بطانة الرحم جراحيا ، الناجمة عن زرع الذاتية لأنسجة الرحم

الهدف العام من هذا الإجراء هو تحفيز داء بطانة الرحم جراحيًا في الفئران عن طريق النقل الذاتي لأنسجة الرحم إلى الشلال الشرياني للمساريق المعوية. يتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق ربط بطانة الرحم وإزالتها وكشفها. وتتمثل الخطوة الثانية من الإجراء في إنشاء ثلاث غرسات بطانية من بطانة الرحم المكشوفة باستخدام ملقط خزعة بحجم 2 مليمتر.

تتمثل الخطوة الثالثة من الإجراء في خياطة الغرسات البطانية الرحمية الثلاث في الشرايين الموجودة ضمن الشلال الشرياني للمساريق المعوية. والخطوة النهائية من الإجراء هي إغلاق جدار البطن والجلد والسماح للحيوان باستعادة الآفات البطانية الرحمية. تشبه العينات المستأصلة من الفئران تلك الموجودة لدى النساء المصابات ببطانة الرحم المهاجرة، وفقاً لما تم تحديده من خلال التحليل النسيجي وأنماط تعبير الجينات والبروتينات.

بشكل عام، سيواجه الأشخاص الجدد في هذه الطريقة صعوبات لثلاثة أسباب رئيسية. أولاً، أنسجة الفأر صغيرة جداً. ثانياً، المساريق المعوية سريعة التضرر، وثالثاً، إذا وُضعت الغرز بإحكام شديد، فسيؤدي ذلك إلى نخر الأمعاء.

ابدأ بتجميع جميع المعدات الجراحية اللازمة لإجراء جراحة معقمة ناجحة، بما في ذلك المحاليل المستخدمة للتسكين والتخدير. بعد تخدير الحيوان باستخدام أيزوفلورين المستنشق، تأكد من التخدير الكامل من خلال الاستجابة السلبية لمحفز قرصة إصبع القدم، ولمنع الجفاف أثناء الجراحة، ضع مرهمًا عينيًا على العينين ثم احلق موقع الجراحة باستخدام مقصات صغيرة. قم بتطهير موقع الجراحة بثلاث مسحات متبادلة من غسول الكلورهكسيدين والإيثانول 70%، ثم غطِّ الحيوان بمجال معقم.

أجرِ شقاً صغيراً في الخط المتوسط باستخدام مقص صغير أو شفرة مشرط، بحيث ينتهي الشق على مسافة 0.5 إلى 1.0 سنتيمترات أمام فتحة المهبل. قم بتشريح جدار الجسم عن الجدار البطني بلطف عن طريق التسليك لإسهيل إغلاق موقع الجراحة. بعد التسليك، أجرِ شقاً صغيراً في الخط المتوسط للجدار البطني.

بعد ذلك، وباستخدام ملاقط صغيرة، حدد موقع القرن الرحمي الأيسر برفق. يقع الرحم ظهرياً بالنسبة للأمعاء، والتي عادة ما تكون مرئية عند الدخول لأول مرة إلى موقع الشق؛ اسحب القرن الرحمي للأعلى برفق ومرر ملقطاً مفتوحاً تحته ليعمل كمباعد. من المفيد أيضاً ملاحظة مظهر المبيضين والرحم في هذه المرحلة.

للمساعدة في تحديد تاريخ دورة الشبق. في الشريحة الثانية، يتم تمرير قطع بطول 6-8 cm من خيوط الحرير المجدولة السوداء بمقاس 5-0 أسفل قرن الرحم الممدد. يتم ربط القرن بإحكام عند نقطة الاتصال بين الرحم وقناة فالوب.

قم بربط قناة فالوب وعند الموصل الرحمي العنقي. باستخدام عقدة مربعة في كل موقع، اترك نهايات الخيط دون قص. استأصل الجزء من القرن الرحمي الواقع بين الربطتين وضع النسيج في طبق بيتري زجاجي يحتوي على 100 µL تقريباً من PBS المحتوي على البنسلين والستريبتوميسين.

اقطع أطراف خيط الحرير الجراحي في النهاية. إذا ارتخى الخيط أو حدث نزيف، حدد مكان الطرف المتبقي واربط عقدة أخرى أو عقدة إضافية باستخدام مقص صغير. قم بإزالة الدهون من قرن الرحم.

افتح قرن الرحم عن طريق إدخال إحدى شفرتي مقص صغير في التجويف. قم بتمرير المقص برفق على طول قرن الرحم مع تثبيت القرن باستخدام الملقط. في طبق بتري الزجاجي، استخدم مخرزة خزعة بحجم 2 mm لقص ثلاث غرسات متساوية الحجم، مع الحرص على منع جفافها.

ضع شاشاً معقماً فوق موقع الشق مباشرةً وبلله جيداً بمحلول PBS معقم يحتوي على البنسلين والستريبتومايسين. من المهم الحفاظ على الترطيب طوال الخطوات التالية باستخدام ملاقط صغيرة وناعمة. حدد موقع الأعور برفق وحركه ببطء على طول الأمعاء الدقيقة.

اسحب مقطعاً صغيراً من الأمعاء بطول يتراوح بين أربعة إلى خمسة سنتيمترات ورتبه على شكل مروحة فوق شاش مبلل مسبقاً بحيث تكون الشلالات الشريانية للمساريق المعوية مرئية بوضوح. تأكد من الحفاظ على رطوبة الأمعاء في جميع الأوقات باستخدام محلول ملحي معقم. ضع غرسة واحدة على إبرة، ثم استخدم خيط جراحي من نوع 6-0 aut black alon لتثبيت الغرسة برفق في شريان على مسافة 0.5 سنتيمتر تقريباً من الأمعاء.

استخدم واحدة فقط. مرر الخيط فوق الملقط ولا تشد الغرزة بقوة كبيرة، حيث قد يؤدي ذلك إلى فقدان تدفق الدم وحدوث نخر لاحق في الأمعاء.

قم بإتمام عقدتين بعقدة واحدة، ثم قم برمي كل منهما وقص خيط الجراحة على مسافة 2 mm من الغرسة، وقم بترطيب الأمعاء. ثم تحرك في اتجاه منقاري. اسحب الثلاثة إلى أربعة cm التالية من الأمعاء وأعد بدقة وضع المقطع الذي يحتوي بالفعل على غرسة.

تجاوز شريانًا واحدًا أو اثنين من موقع الزرع السابق، ثم قم بخياطة الغرسة التالية، وكرر العملية للغرسة الثالثة. وأخيرًا، قم بخياطة جدار البطن وإغلاق الجلد باستخدام مشابك الجروح. بعد إغلاق موقع الجراحة وإعطاء المسكنات، ضع الحيوان في القفص بحيث يكون الجانب البطني لأسفل، فوق وسادة مياه ساخنة ذات تدوير جزئي حتى يتعافى الحيوان.

لاستعادة الآفات البطانية الرحمية، حدد مكان الغرز السوداء في مساريق الأمعاء. قم بقياس طول وعرض كل آفة بطانية رحمية باستخدام الفرجار. قم بتشريح الآفات البطانية الرحمية، مع الحرص على عدم ثقبها.

أزل أي أنسجة غير بطانية الرحم من الآفة. هز الآفات البطانية الرحمية الثلاث المليئة بالسوائل قبل إزالة الغرزة. أزل الغرزة برفق واثقب اثنتين من الآفات البطانية الرحمية.

قم بوزن هذه العينات مرة أخرى قبل الانتقال إلى معالجة الأنسجة. بعد ذلك، قم باستئصال ووزن ما تبقى من قرن الرحم؛ حيث يشير التحليل النسيجي لبطانة الرحم المهاجرة في كل من النساء وفي نموذج الفئران الموضح هنا إلى أن الآفة الشبيهة ببطانة الرحم تحتوي على غدد وسدى بطانة الرحم. كما تحتوي الآفات المهاجرة في الفئران على بلعميات محملة بالهيموسيديرين، والتي تعد سمة مميزة شائعة لبطانة الرحم المهاجرة لدى النساء. تظهر الآفات الشبيهة ببطانة الرحم التي تمت إزالتها من الفئران بعد ثلاثة أيام من الحث ملتهبة ونزفية كما هو موضح على اليسار، وذلك بعد أسبوعين إلى أربعة أسابيع من النمو.

تظهر الآفات البطانية المهاجرة في نموذج الفأر على شكل أكياس مملوءة بالسوائل ومحاطة بالتصاقات بريتونية مقارنة بوزن الآفة عند الحث. كانت الآفات المملوءة بالسوائل أكبر بنسبة 306% و862%، بينما كانت الآفات الرمحية أكبر بنسبة 51% و172% بعد شهر وشهرين من الحث على التوالي. آفات بطانية مهاجرة مملوءة بالسوائل ورمحية.

تظل الأوزان ثابتة بعد شهر واحد من الحث في خمس تجارب مختلفة اتبعت هذا الإجراء. ويمكن استخدام هذا النموذج للإجابة على تساؤلات حول الفسيولوجيا المرضية لبطانة الرحم المهاجرة واستكشاف علاجات جديدة لعلاج الألم والعقم المرتبطين بهذا المرض.