Name: العلاج الإشعاعي مجموعة في نموذج الفأر Orthotopic استئصال ورم من الدماغ (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-06T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: تعلم زراعة خلايا الورم الأرومي الدبقي في أدمغة الفئران لاختبار العلاج الإشعاعي والكيميائي. يوفر هذا النموذج الأورثوتوبي أداة قيمة لتقييم استراتيجيات علاجية جديدة وتحسين فعالية الأدوية ضد الأورام الدماغية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ويدعم هذا البحث من خلال تمويل من البرنامج ضمن الجدران من المعاهد الوطنية للصحة.

أولا خلية التحضير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وتزرع الخلايا لالتقاء في DMEM مع FBS 10٪ حوالي 80٪ متكدسة 225 قارورة 3 سم في كل الفئران من 5 إلى أن مزروع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح وسائل الاعلام الخروج من الخلايا؛ غسل مع 10 مل من برنامج تلفزيوني بدون الكالسيوم أو المغنيسيوم. نضح PBS الخلايا قبالة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعرض للتريبسين الخلايا مع 3 مل من التربسين، انتظر 10-15 دقيقة، وتحييد التربسين مع 15 مل من وسائل الإعلام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الماصة جميع الخلايا وسائل الاعلام الى مخروطي 50 مل. اثنين من قوارير كبيرة تنسجم مع واحدة مخروطية 50 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدور الخلايا في 1600 دورة في الدقيقة لمدة 7 دقائق في 4 درجات مئوية. نضح تماما طاف. Resuspend الخلايا في 10 مل من برنامج تلفزيوني الباردة، وشطف الخلايا pipetting بلطف صعودا ونزولا. تأكد من أن الخلية يتم خلط بيليه بشكل موحد مع برنامج تلفزيوني. يجب أن يكون التعليق غائم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في هذا الوقت ويتم تعداد الخلايا باستخدام عداد كولتر. وطرد الخلايا مرة أخرى في 1600 دورة في الدقيقة لمدة 7 دقائق في 4 درجات مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الطرد المركزي الثانية 2 من الخلايا، كماقرصان كل برنامج تلفزيوني وresuspend في 1 مل من برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ونسج الخلايا في 1ml من برنامج تلفزيوني في 3000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقيقة في 4 درجة مئوية. ويستنشق في برنامج تلفزيوني، ويضاف برنامج تلفزيوني لضبط تركيز النهائي ل1x10 6 في 5 ميكرولتر لU87 الخلايا، قد خطوط الخلايا الأخرى تتطلب عددا المختلفة، وتركيز الخلايا السرطانية للنمو الأمثل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الحصول على الحجم النهائي والتركيز وتحفظ الخلايا على الجليد في أنبوب إيبندورف. </li></ol> II. طعم أجنبي <ol class="ualpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الماوس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الفئران هي تخدير باستخدام مزيج من الحقن الكيتامين / زيلازين / المؤسسة العامة لتحلية. هذا الخليط هو 120 ملغم / كغم من الكيتامين، و 16 ملغم / كغم من Rompun والمالحة. يتم وزن الفئران بشكل فردي وإعطاء 0.1 مل لكل 10 جرام بناء على وزنهم. يعطى مخدر مع إبرة 26G المرفقة 1 مل حقنة IP. سوف يستغرق حوالي 15 دقيقة للفئران من أجل التوصل إلى مرحلة النوم لأية استجابة الألم. يمكنك التحقق من استجابة الألم للالفئران عن طريق معسر قاطع الطريق الخاصة بهم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الفأر هو تخدير كامل، ويدير مرهم العين لعيونهم لمنعهم من الجفاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم وضع الماوس على السرير من التجسيمي مع الأسنان العلوية الأمامية في الدرجة الأولى على شريط الفم. ثم يتم وضع السرير في التجسيمي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم وضع حارس أنف فوق الأنف الماوس، لمنع الحركة من الرأس، وأشرطة الأذن يتم وضع برفق في قنوات الأذن لدى الفئران. يجب الحرص على عدم القيام بأي وضع شريط الأنف أو الأذن أشرطة ضيقة جدا، كما قد كسر في الجمجمة و / أو منع الفأر من التنفس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكد من أن رأس الفأر هو مستوى استخدام علامات التجزئة على التجسيمي مفيد خلال هذه العملية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إلى الإعدادية يتم تطبيق اليود الماوس والكحول وprovidine بتحرر على رأس الماوس بالتناوب على ما مجموعه 3 تطبيق من التطبيقات الكحول و 3 من اليود. يتم تطبيق طلب واحد نهائي لوحة الكحول بنسبة 70٪ لتصل إلىالرأس. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء العمليات الجراحية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويجب تعقيم جميع الأدوات في الإجراء إما عن طريق جهاز الأوتوكليف أو تمرغ الصكوك في الايثانول 70٪ قبل البدء في هذا الإجراء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم إجراء شق على الجزء العلوي من الجمجمة وراء العين حق العودة بشكل مائل إلى اليسار الخلفي من الجمجمة. يجب أن يكون شق حوالي 10 ملم الى 15 ملم طويلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام Q-طرف، فصل ببطء شق لفضح الجمجمة ويمحو الغشاء الذي هو بين الجمجمة والجلد. استخدام Q-تلميح لطخة دم أي ومشاهدة لنزيف حاد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كشف الجزء العلوي من الجمجمة لتصور bregma. باستخدام محقنة نقطة هاملتون، وضعه على مدى bregma. الموضع الصحيح من الحفرة التي حفرها في الجمجمة هو 2 ملم وحق 1 ملم الأمامي من bregma (الشكل 2). ويستخدم الجراح شعر ذات الرؤوس علامة، التي يتم شراؤها عقيمة، للاحتفال موقع الحفرة التي حفرها. يرجى ملاحظة أن يقع حفرة على مقربة من 1terior خياطة خط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المقبل، حفر ثقب صغير في الجمجمة في موقف واضح باستخدام نقطة من إبرة 22G في إناء دبوس أو بنك الاحتياطي الفيدرالي من خلال إبرة 18G. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل 10 ميكرولتر زجاج هاميلتون المحاقن مع 5 ميكرولتر من الخلايا. الحقنة هاملتون هو 10 ميكرولتر مع 30G حادة إلى إبرة ثابت 33G المرتبطة به. تأكد من خلط الخلايا قبل تحميلها، إما عن طريق pipetting لهم أو باستخدام محقنة 1ml بإبرة 25G المرفقة. بعد تحميل حقنة هاملتون، وضعه مرة أخرى في الذراع على خط هذا الامر مع ثقب في الجمجمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خفض نهاية نطحة من الإبرة على سطح الجمجمة، مرة واحدة في الإبرة مستوى مع الجمجمة والوجه والإبر فيه حتى على عمق 3 مم تحت سطح الجمجمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد أن يتم خفض إبرة ويظل هناك لمدة 2 دقيقة لتجنب أي صدمة كبرى من الإبرة التي تؤثر على الدماغ. زرع الخلايا بمعدل من 1 ميكروليتر في الدقيقة الواحدة أي ما مجموعه 6-8 دقائق، وتوخي الحذر من أي backfloدبليو. بعد أن تم زرعها وكان آخر من الخلايا، وترك الإبرة في مكانها لمدة 2 دقيقة، للسماح لجميع الخلايا ليستقر فيها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الإبرة من الدماغ، وتنظيف حفرة مع Q-تلميح. والمضي قدما لتنظيف الإبر والمحاقن مع Actone 50٪، EtOH 100٪، وبرنامج تلفزيوني، 3X في كل حل وفقا لهذا الترتيب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الجلد على جمجمة جاهزة للخياطة في هذه المرحلة. استخدام 5-0 PBS إغلاق شق مع غرز حوالي 3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح الماوس لتستيقظ على وسادة الحرارة، وتطبيق مرهم العين إذا لزم الأمر. يمكن إرجاع الماوس إلى القفص بعد أن تبين الحركة من تلقاء نفسها (أي يرفع الرأس أو تحريك الكتفين). </li></ol></li></ol> ثالثا. علاج للزرع IC عن الإشعاع والدواء <ol class="ualpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الإشعاع علاج <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اعتمادا على خط الخليوي، ويمكن علاج من الفئران تجرى 5 إلى 7 أيام بعد عملية الزرع. لدينا قسم وحدة العلاج الإشعاعي يستخدم لعلاج الإشعاع orthovoltageمنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن استخدام التصوير مثل BLI (التصوير ضوء بارد)، التصوير بالرنين المغناطيسي أو التصوير المقطعي لتصور الورم قبل التوزيع العشوائي (الشكل 3A). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الفئران هي تخدير مع كوكتيل الكيتامين / زيلازين / المالحة كما كانت من قبل، ويطبق مرهم العين لعيونهم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم وضع الفئران في رقصة مخصص الإشعاع التي تم تكوينه مثل عجلة فطيرة، والتي رؤساء الفئران تشير نحو الوسط. محمية الهيئات من الفئران من الإشعاع مع الرصاص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يمكن إعطاء العلاج من تعاطي المخدرات سواء قبل أو إشعاع من خلال طرق مختلفة للإنجاز، أي SQ، والملكية الفكرية والرابع. </li></ol></li></ol> رابعا. النتائج وينبغي أن الماوس استيقظ من هذا الإجراء في غضون 45-60 دقيقة بعد حقن التخدير. إذا الماوس والاستيقاظ صعوبة حتى بعد إجراء العملية والوقت قد تجاوز 1 ونصف ساعة بعد العملية، قد لا يتعافى الماوس والقتل الرحيم قد يكون بديلا فعالا. إذا اليحرث هو النزيف أو ينصح الجمجمة يصبح تصدع في أي لحظة خلال القتل الرحيم الداخلي. إذا سارت الامور بشكل جيد، واعتمادا على خط الخليوي، وينبغي أن يبدأ تشكيل ورم في غضون 2-4 أسابيع بعد إجراء العملية لها أن تحدث. عند استخدام النماذج طعم أجنبي داخل الجمجمة، وعادة ما تقاس الكفاءة العلاجية والبقاء على قيد الحياة بعد زرع 5. ومع ذلك، وهذا هو و1 علامات نموذج IC والأعراض تحدث قبل وفاته. بعض من علامات جسدية الماوس قد يحمل هي التقوس في الجلوس، وفقدان وزن الجسم، وقلة النشاط. قد يكون بعض من علامات العصبية تكون المضبوطات، وإمالة الرأس، وفقدان التوازن. الشكل 3B يظهر معالي وصمة من وجود ورم في معدل الوفيات. ويتم استخدام مؤامرة كابلان ماير لتقييم البيانات (الشكل 4). يتم حساب عدد الأيام اللازمة للبقاء على قيد الحياة بنسبة 50٪ ومقارنة بالكنترول. إذا كان الجمع بين مجموعة عاش أطول من إضافة للإشعاع الفردية والأسلحة والمخدرات كانت مجموعة ناجحة. <img alt='"الشكل' src="/files/ftp_upload/3397/3397fig1.jpg" files> الشكل 1. ومعدات Stoelting التجسيمي. <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/3397/3397fig2.jpg"> الشكل 2. رسم تخطيطي للموقع من حفر حفرة في جمجمة الفأر. <img alt="الرقم 3A" src="/files/ftp_upload/3397/3397fig3A.jpg"> الرقم 3A. BLI التصوير بعد غرس الخليج للحاسبات الآلية. <img alt="الشكل 3B" src="/files/ftp_upload/3397/3397fig3B.jpg"> 3B شخصية. H و E من ورم الخليج للحاسبات الآلية في معدل الوفيات. <img alt="الشكل 4" src="/files/ftp_upload/3397/3397fig4.jpg"> الشكل 4. النتائج من يزرع IC U87 حقنوا المانع PARP 7 أيام بعد الجراحة.

<ol><li>Bleau, A. M., Holland, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trapping+the+mouse+genome+to+hunt+human+alternations%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Nat.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Trapping the mouse genome to hunt human alternations.</a> Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. 104, 7737-7738 (2007).</li>
<li>McGrady, B. J., McCormick, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+intracranial+invasion%3A+morphological+observations+on+central+nervous+system+invasion+by+melanoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">A murine model of intracranial invasion: morphological observations on central nervous system invasion by melanoma cells.</a> Clin. Exp. Metastasis. 10, 387-393 (1992).</li>
<li>Fei, X., Zhang, Q., Dong, J., Diao, y, Wang, Z., Li, R., Wu, Z., Wang, A., Lan, Q., Zhang, S., Huang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+clinically+relevant+orthotopic+xenograft+mouse+model+of+metastatic+lung+cancer+and+glioblastoma+through+surgical+tumor+tissues+injection+with+trocar%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+%26+Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Development of clinically relevant orthotopic xenograft mouse model of metastatic lung cancer and glioblastoma through surgical tumor tissues injection with trocar.</a> Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. 29, 84-84 (2010).</li>
<li>Fujita, M., Zhu, X., Sasaki, K., Ueda, R., Low, K., Pollack, I., Okada, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+STAT3+Promotes+the+Efficacy+of+Adoptive+Transfer+Therapy+Using+Type-1+CTLs+by+Modulation+of+the+Immunological+Microenvironment+in+a+Murine+Intracranial+Glioma%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Inhibition of STAT3 Promotes the Efficacy of Adoptive Transfer Therapy Using Type-1 CTLs by Modulation of the Immunological Microenvironment in a Murine Intracranial Glioma.</a> J. Immunol. 180, 2089-2098 (2008).</li>
<li>Candolfi, M., Curtin, J. F., Nichols, W. S., Muhammad, A. K. M. . G., King, G., Pluhar, G. D., McNiel, G. E., Ohlfest, E. A., Freese, J. R., Moore, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+glioblastoma+models+in+preclinical+neuro-oncology%3A+neuropathlogical+characterization+and+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurooncol%22%5BJournal%5D)">Intracranial glioblastoma models in preclinical neuro-oncology: neuropathlogical characterization and tumor progression.</a> J. Neurooncol. 85, 133-148 (2007).</li>
<li>Kaye, A., Morstyn, G., Gardner, I., Pyke, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+xenograft+glioma+model+in+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Development of a xenograft glioma model in mouse brain.</a> Cancer Research. 46, 1367-1373 (1986).</li>
<li>Zhao, Y., Xiao, A., diPierro, C., Carpenter, J., Abdel-Fattah, R., Redpath, G., Lopez, M., Hussaini, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Extensive+Invasive+Intracranial+Human+Glioblastoma+Xenograft+Model%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">An Extensive Invasive Intracranial Human Glioblastoma Xenograft Model.</a> American Journal of Pathology. 176, 3032-3049 (2010).</li>
<li>Learn, C., Grossi, P., Schmittling, R., Xie, W., Mitchell, D., Karikari, I., Wei, Z., Dressman, H., Sampson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+Analysis+of+Intracranial+Tumors+in+a+Murine+Model+of+Glioma+Demonstrate+a+Shift+in+Gene+Expression+in+Response+to+Host+Immunity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Genetic Analysis of Intracranial Tumors in a Murine Model of Glioma Demonstrate a Shift in Gene Expression in Response to Host Immunity.</a> J. Neuroimmunol. 182, 63-72 (2007).</li>
<li>Martens, T., Laabs, Y., Günther, H., Kemming, D., Zhu, Z., Witte, L., Hagel, C., Westphal, M., Lamszus, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+Glioblastoma+Growth+in+a+Highly+Invasive+Nude+Mouse+Model+Can+Be+Achieved+by+Targeting+Epidermal+Growth+Factor+Receptor+but+not+Vascular+Endothelial+Growth+Factor+Receptor-2%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Inhibition of Glioblastoma Growth in a Highly Invasive Nude Mouse Model Can Be Achieved by Targeting Epidermal Growth Factor Receptor but not Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2.</a> Clin. Cancer Res. 14, 5447-5458 (2008).</li>
<li>Purow, B., Schiff, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+the+genetics+of+glioblastoma%3A+are+we+reaching+critical+mass%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Advances in the genetics of glioblastoma: are we reaching critical mass.</a> Nat. Rev. Neurol. 5, 419-426 (2009).</li>
</ol>

ليس لدينا ما يكشف.

الاورام الدبقية الخبيثة، مثل ورم أرومي دبقي الأشكال، تمثل الأكثر شيوعا أورام الدماغ الأولية والحصول على التشخيص الكئيب 4. وقد ظل بقاء المرضى المتضررين من الخليج للحاسبات الآلية دون تغيير تقريبا خلال العقد الماضي (أي 9-12 شهرا في مرحلة ما بعد التشخيص) على الرغم من التقدم في مجال جراحة، والاشعاع، والعلاج الكيميائي 5. وينبغي أن ملامح نموذج مناسب لدراسة علاج دبقي تشمل موقع الورم استنساخه ونمو الخلايا السرطانية باعتبارها منفصلة نسبيا، ويجب أن يشبه خلايا بأكبر قدر ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> مختبر قياسي التجسيمي Instrutment </td><td> Stoelting الفأر والجرذ محول </td></tr><tr><td> Betadine </td><td> 100٪ EtOH </td></tr><tr><td> 70٪ EtOH </td><td> 50٪ الأسيتون </td></tr><tr><td> 6 &quot;Q-نصائح </td><td> مسحات الكحول </td></tr><tr><td> هاميلتون حقنة 80008 </td><td> Ethicon 5-0 PD </td></tr><tr><td> 1701 SN 31-33G / 1 &quot;/ إبرة PT3 </td><td> 1 مل الحقن </td></tr><tr><td> 25G الإبر </td><td> التدفئة وسادة </td></tr><tr><td> دموع اصطناعية مرهم </td><td> ناعم جدا علامة دائمة الرؤوس </td></tr></tbody></table>

العلاج الإشعاعي مجموعة في نموذج الفأر orthotopic استئصال ورم من الدماغ

Combination Radiotherapy in an Orthotopic Mouse Brain Tumor Model

ورم أرومي دبقي الأشكال (GBM) هي الأكثر شيوعا وعدوانية الكبار أورام الدماغ الأولية 1. في السنوات الأخيرة قد شهدت تقدما كبيرا في فهم آليات غزو الورم، والتلقيح داخل المخ مباشرة من ورم يتيح الفرصة لمراقبة عملية الغازية في بيئة ملائمة من الناحية الفسيولوجية 2. بقدر ما نشعر بالقلق أورام الدماغ البشري، وضعت نماذج orthotopic المتاحة حاليا إما عن طريق الحقن التجسيمي من الايقاف الخلية أو زرع قطعة صلبة من الورم من خلال إجراء حج القحف معقدة 3. في تقنية حصاد الخلايا لدينا نحن من زراعة الأنسجة لإنشاء تعليق خلية تستخدم لزرع مباشرة في الدماغ. مدة الجراحة ما يقرب من 30 دقيقة، وكذلك فأرة يجب أن يكون في الطائرة جراحية ثابت، يتم استخدام مخدر عن طريق الحقن. يتم وضع الماوس في رقصة التجسيمي الذي أدلى به Stoetling (الشكل 1). الخلفإيه يتم تنظيف منطقة الجراحية وأعدت، يتم إجراء شق، ويقع bregma لتحديد موقع حج القحف. مكان حج القحف هو 2 ملم إلى اليمين و1 ملم منقاري إلى bregma. وعمق 3 مم من سطح الجمجمة، ويتم حقن الخلايا بمعدل 2 ميكرولتر كل دقيقة 2. يتم خياطة الجلد مع PDS 5-0، ويسمح الماوس لتستيقظ على وسادة التدفئة. من تجربتنا، اعتمادا على خط الخليوي، ويمكن علاج في الفترة من 7-10 أيام بعد الجراحة. تسليم المخدرات يعتمد على تركيبة الدواء. لتلقي العلاج الإشعاعي للفئران هي تخدير، ووضع في العرف تهزهز. الرصاص يغطي الجسم الماوس، ويعرض فقط في الدماغ من الفأرة. دراسة تكون الأورام وتقييم علاجات جديدة للالخليج للحاسبات الآلية تتطلب دقة وقابلة للتكرار النماذج الحيوانية ورم دماغي. وبالتالي نحن نستخدم هذا النموذج الدماغ orthotopic لدراسة التفاعل بين المكروية في الدماغ وورم في، لاختبار effectivenوفاق سطيف من العوامل العلاجية مختلفة مع وبدون إشعاع.

والغرض من هذه المقالة لوصف استخدام نموذج ورم أرومي دبقي orthotopic للدراسات chemoradiation. هذه المادة سوف تذهب على الرغم من تجهيز الخلية، وزرع، والعلاج الإشعاعي من الفأرة باستخدام نموذج داخل الجمجمة.

العلاج الإشعاعي مجموعة في نموذج الفأر Orthotopic استئصال ورم من الدماغ

تعد الأورام الأرومية الدبقية متعددة الأشكال (GBM) أكثر أورام الدماغ الأولية شيوعاً وعدوانية لدى البالغين. وقد حدث في السنوات الأخيرة تقدم ملموس في...

الهدف العام من هذا الإجراء هو وصف وإظهار ومعالجة خلايا الورم الأرومي الدبقي المزروعة داخل القحف في دماغ الفأر. ويتم تحقيق ذلك من خلال تحضير الخلايا أولاً، ثم زرعها في دماغ الفأر. وبعد العملية الجراحية، ينمو ورم في الدماغ يمكن إجراء تجارب عليه باستخدام علاجات مختلفة.في نهاية المطاف، يمكن لمنحنى البقاء أن يوضح ما إذا كانت المعالجة فعالة أم لا. وتمتد تداعيات هذه التقنية نحو علاج الورم الأرومي الدبقي لأنها قد تكون وسيلة أكثر فعالية لاختبار العلاجات الجديدة مثل الأدوية والإشعاع مقارنة بالمزارع النسيجية. ابدأ بزراعة الخلايا المستهدفة مثل خلايا U 87 حتى تصل إلى 80% من درجة الالتحام. في وسط DMEM مع 10% FBS، ستوفر قارورة واحدة سعة 125 cubic centimeter خلايا كافية لزرعها في خمسة فئران؛ قم بشفط الوسط من على الخلايا، واغسل الخلايا لفترة وجيزة باستخدام 10 milliliters من PBS الخالي من الكالسيوم أو المغنيسيوم مع التحريك اليدوي.بعد سحب محلول الغسيل، تُعالج الخلايا بإنزيم trypsin لمدة تتراوح من 10 إلى 15 دقيقة، ثم يتم تحييد trypsin باستخدام 15 milliliters من الوسط الغذائي. الآن، تُنقل جميع الخلايا والوسط الغذائي إلى أنبوب مخروطي سعة 50 milliliter. يمكن استيعاب محتويات قارورتين من الخلايا في أنبوب واحد.قم بطرد الخلايا مركزياً بسرعة 1600 RPM لمدة سبع دقائق وأزل الطافي تماماً عن طريق الشفط. أعد تعليق الراسب في 10 milliliters من محلول PBS البارد، واغسل الخلايا عن طريق سحبها ودفعها بلطف باستخدام الماصة في المحلول حتى يتكون معلق غيمي متجانس. بعد قياس تركيز الخلايا باستخدام عداد المزارع الخلوية، كرر عملية الغسل بمحلول PBS لضمان النمو الأمثل للورم.اضبط التركيز النهائي لخلايا U 87 ليكون 200, 000 خلية لكل microliter. قد تتطلب خطوط خلوية أخرى تركيزاً مختلفاً لتحقيق النمو الأمثل للورم. بعد تجهيز الخلايا للحقن، احتفظ بها على الثلج وشرع في تحضير الحيوان.ابدأ بتجهيز الفئران عن طريق إعطاء المخدر للفئران المضيفة. وبعد حوالي 15 دقيقة، تحقق من عدم استجابة الفئران للألم عن طريق قرص إصبع القدم. وبمجرد تخديرها، ضع مرهماً على العينين لمنعهما من الجفاف.بعد ذلك، ضع الفأر على قاعدة الإطار التجسيمي. قم بتثبيت الأسنان في ثلمة قضيب الفم. ثم ضع القاعدة في الإطار.لتثبيت الرأس الآن، قم بتركيب واقي الأنف للفأر، ثم أدخل قضبان الأذن بلطف في القنوات السمعية. لا تضغط بقوة مفرطة على أي من هذين القضيبين لأن ذلك قد يؤدي إلى كسر الجمجمة أو اختناق الفأر. في هذه المرحلة، تحقق من أن الرأس في وضع مستوٍ.تتمثل الخطوة النهائية في التحضير في مسح الرأس بالتناوب باستخدام الكحول واليود ثلاث مرات لكل منهما، ثم الختام بتطبيق رابع من الكحول. ابدأ جراحة الزرع بعمل شق يبدأ من خلف العين اليمنى ويمتد قطرياً إلى الخلف باتجاه الجزء الخلفي الأيسر من الجمجمة. يجب أن يكون طول الشق حوالي 10 إلى 15 millimeters.استخدم مسحة قطنية لفصل الشق الجراحي ببطء لكشف الجمجمة، وامسح الغشاء الموجود بين الجمجمة والجلد، ثم جفف أي دم أو نزيف مفرط. الآن، حدد موقع الـ bgma وضع محقنة زجاجية من نوع Hamilton سعة 10 µL فوقها باستخدام قلم تحديد لبادي. ضع علامة على بعد 2 mm إلى اليمين و 1 mm أمام الـ bgma بالقرب من خط الدرز الأمامي.قم الآن بإزالة المحقنة وحفر ثقب صغير في الجمجمة عند الموضع المحدد. يكون رأس المثقاب بحجم إبرة قياس 22 gauge. اترك رأس المثقاب يقوم بعملية الثقب في الجمجمة.لا يلزم تسليط أي ضغط إضافي. باستخدام حقنة ذات إبرة بقياس 30 إلى 33، قم بتعبئة الحقنة بـ 5 µL من الخلايا المخلوطة جيداً، ثم أعد تركيبها في الإطار. قم بمحاذاة الإبرة مع الثقب الموجود في الجمجمة، ثم اخفضها لتصل إلى سطح الجمجمة من سطح الجمجمة.اخفض الإبرة بمقدار ثلاثة مليمترات وانتظر لمدة دقيقتين. هذا التوقف يقلل من احتمالية حدوث إصابة نسيجية. اضغط المكبس ببطء لزراعة الخلايا بمعدل حوالي 1 µL في الدقيقة.تجنب بعناية حدوث أي تدفق عكسي بعد زرع آخر الخلايا. اترك الإبرة في مكانها لمدة دقيقتين إضافيتين للسماح لجميع الخلايا بالاستقرار. بعد الانتظار، اسحب الإبرة برفق من الدماغ وامسح الفتحة بعناية لتنظيفها باستخدام مسحة قطنية.الآن، باستخدام خيط جراحي PBS بمقاس 5-0، أغلق الشق بحوالي ثلاث غرز. ضع الفأر على وسادة تدفئة، وأعد وضع مرهم العين إذا لزم الأمر.بمجرد أن يرفع الفأر رأسه أو يحرك كتفيه، أعده إلى قفصه الخاص. تستغرق هذه العملية ما بين 30 و60 دقيقة من وقت حقن التخدير. وإذا لم يتحرك الفأر بعد مرور 90 دقيقة، فقد لا يتعافى، وقد يكون القتل الرحيم بديلاً فعالاً.أيضاً، يُنصح بالقتل الرحيم إذا حدث نزيف مفرط أو تصدع في الجمجمة في أي مرحلة من مراحل الإجراء. وبناءً على السلالة الخلوية، يمكن إجراء العلاج الإشعاعي للفئران بعد خمسة إلى سبعة أيام من الزرع. على سبيل المثال، يمكن استخدام وحدة العلاج الإشعاعي ذات الجهد المرتفع (ortho voltage) لإجراء العلاج الإشعاعي.استخدم تقنيات التصوير مثل B-L-I-M-R-I أو CT لتصوير الورم قبل توزيع الفئران عشوائياً على المجموعات التجريبية. بعد زراعة الخلايا، تتكون الأورام عادةً خلال أسبوعين إلى أربعة أسابيع، اعتماداً على الخط الخلوي. وعند حدوث الوفاة، يتم إجراء الصبغ على أنسجة الدماغ لفحص الورم.يعد رسم منحنى كابلان-ماير للبقاء على قيد الحياة تقييماً هاماً لفعالية العلاج؛ حيث يقارن هذا المنحنى متوسط فترة البقاء على قيد الحياة بعد الحقن للحيوانات التي خضعت للعلاج الدوائي، أو العلاج الإشعاعي، أو العلاج المشترك. وقد مهدت هذه التقنية الطريق للأبحاث في مجال علم الأورام لاستكشاف علاجات أورام الدماغ في الفئران.

combination-radiotherapy-in-an-orthotopic-mouse-brain-tumor-model

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

المرضى الخضوع لورم في المخ بشكل روتيني بالأشعة في الجمجمة ، وبينما مفيدة ، غالبا ما يؤدي هذا الخلل في العلاج المعرفي الموهنة هذه المشكلة الخطيرة التي لم تحل في الوقت الحاضر قد لا تلجأ السريرية ، ودفع جهودنا الرامية إلى وضع علاجات الخلايا الجذعية استنادا لاسترداد التناقصات المعرفية الناجمة عن الإشعاع.

زرع الخلايا الجذعية استراتيجيات من أجل استعادة الضعف المعرفي التي تحدثها العلاج الإشعاعي القحف

يوضح الفيديو تقنية التطعيم التقويمي لسرطان الثدي في نموذج الفأر. تنتج هذه التقنية معدل تكوين أورام مرتفعا مع تباين أقل في حجم الورم وشكله مقارنة بالحقن تحت الجلد أو غير الجراحي.

حقن تقويم العظام: زرع خلايا سرطانية خاصة بالأنسجة في فأر بالغ

يوضح هذا الفيديو زرع الخلايا السرطانية في دماغ الفأر عن طريق إجراء الحقن داخل الجمجمة.

نموذج تقويم العظام داخل الجمجمة: إجراء لزرع الخلايا السرطانية في دماغ الفأر

الخلايا الجذعية هي حاملات علاجية واعدة لعلاج أورام المخ بسبب استدارة الورم الجوهرية. غير الجذعية داخل الخلايا الجذعية تسليم تسليم يتجاوز حاجز الدم في الدماغ ويظهر إمكانات قوية للترجمة السريرية. هذه المقالة تلخص المبادئ الأساسية للتسليم الخلايا الجذعية داخل الأنف في نموذج الماوس من الورم الدبقي.

داخل الأنف تسليم الخلايا الجذعية العلاجية إلى الورم الدبقي في نموذج الفأر

في الماضي، أجرى تشعيع الحيوانات الصغيرة عادة دون القدرة على استهداف من حجم ورم تحديداً جيدا. وكان الهدف تقليد معاملة جليوبلاستوما البشرية في الفئران. باستخدام منصة تشعيع حيوانات صغيرة، نحن إجراء التصوير بالرنين المغناطيسي يسترشد تشعيع الامتثالي 3D مع زيادة حجم الفرعي المستندة إلى الحيوانات الأليفة في إعداد السريرية.

الحيوانات الأليفة والتصوير بالرنين المغناطيسي يسترشد تشعيع نموذج الفئران جليوبلاستوما استخدام الصغرى--إيرادياتور

نقدم هنا، بروتوكول للإعداد وإدارة ستيريوتاكسيك للخلايا الليمفاوية البشرية متمكنة في الفئران العوز تحمل أورام الدماغ الأولية البشرية أورثوتوبيك. وتوفر هذه الدراسة من بين مفهوم إثبات للجدوى وفعالية تسليم إينترابرين إيمونوثيرابيس الخلوية انتيتومور.

نقل الخلايا المناعية السامة للخلايا في نماذج مورين لتكثيفها عديدة الأشكال جليوبلاستوما أورثوتوبيك الإنسان التبني المناظير باستخدام الأشعة

البحث عن استراتيجيات العلاج teratomas المستمدة من الخلايا الجذعية pluripotent مهم للترجمة السريرية للعلاج بالخلايا الجذعية. هنا، يمكننا وصف بروتوكول أولاً، تولد teratomas المستمدة من الخلايا الجذعية في الفئران، ومن ثم، إلى الهدف بشكل انتقائي وعلاج هذه الأورام المجراة الحيوانات الصغيرة إيرادياتور باستخدام.

العلاج المستهدفة وانتقائية من Teratomas المستمدة من الخلايا الجذعية Pluripotent استخدام الإشعاع الخارجي شعاع في نموذج الحيوانات الصغيرة

تعقيد نمذجة الانبثاث الدماغ داخل الجمجمة بسبب عدم القدرة على رصد حجم الورم والاستجابة للعلاج مع أساليب دقيقة وفي الوقت المناسب. المنهجية المقدمة الأزواج حقن الورم داخل الجمجمة مع تحليل التصوير بالرنين المغناطيسي, الذي عند الجمع, يزرع الحقن دقيقة ومتسقة, تعزيز رصد الحيوانات, وقياسات حجم الورم دقيقة.

نمذجة الانبثاث الدماغ من خلال الحقن داخل الجمجمة والتصوير بالرنين المغناطيسي

نقدم هنا بروتوكولا لإجراء العلاج الإشعاعي القائم على التصوير الإشعاعي القائم على التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني قبل السريري في نموذج الورم الأرومي الدبقي للفئران باستخدام خوارزميات تم تطويرها داخليا لتحسين الدقة والكفاءة.

العلاج الإشعاعي القائم على التصوير الإشعاعي بجرعة التصوير المقطعي القائم على البوزيترون في نموذج الفئران الورم الأرومي الدبقي باستخدام منصة أبحاث الإشعاع الحيواني الصغير

هنا ، نصف نموذج الفأر التقويمي قبل السريري ل GBM ، الذي تم إنشاؤه عن طريق الحقن داخل الجمجمة للخلايا المشتقة من أورام نموذج الفئران المعدلة وراثيا. يعرض هذا النموذج السمات المميزة لمرض GBM البشري. بالنسبة للدراسات الانتقالية ، يتم تتبع ورم دماغ الفأر عن طريق التصوير بالرنين المغناطيسي في الجسم الحي وعلم أمراض الأنسجة.

نماذج تقويم العظام متعدية للورم الأرومي الدبقي متعدد الأشكال

يتطلب تطوير نماذج أورام الدماغ لدى الأطفال دقة دقيقة ، باستخدام جهاز تجسيمي لزرع الخلايا السرطانية بدقة. توضح المنهجية المعروضة هنا الخطوات المتبعة في تحضير خلايا ورم المخ ، وإجراء الحقن داخل الجمجمة ، وتنفيذ نظام مراقبة ما بعد الجراحة لتقييم نقش ورم الدماغ.

إنشاء نماذج الطعم الغريب المشتق من تقويم العظام لأورام المخ باستخدام جهاز تجسيمي

تعلم زراعة خلايا الورم الأرومي الدبقي في أدمغة الفئران لاختبار العلاج الإشعاعي والكيميائي. يوفر هذا النموذج الأورثوتوبي أداة قيمة لتقييم استراتيجيات علاجية جديدة وتحسين فعالية الأدوية ضد الأورام الدماغية.

العلاج الإشعاعي مجموعة في نموذج الفأر Orthotopic استئصال ورم من الدماغ

استكشف المزيد من الفيديوهات