الفئران عقدة اللمفاوية السطحية جراحة
May 21st, 2012
لمتابعة تطور استجابة مناعية أكثر من مرة داخل الماوس نفسه، ويمكن إزالة الغدد الليمفاوية بشكل متتابع عن طريق الجراحة. هنا، نحن تصف كيف يمكن تنفيذ هذه التقنية.
الهدف العام من هذا الإجراء هو إزالة الغدد الليمفاوية جراحيا من فأر مخدر. يتم تحقيق ذلك عن طريق تحديد موقع الغدد الليمفاوية أولا. يتم حصاد الغدد الليمفاوية ، ثم يتم إغلاق الشق.
أخيرا ، يمكن الحصول على تعليق خلية واحدة للتحليل التجريبي. في النهاية ، يمكن تقييم مجموعات الخلايا الليمفاوية القابلة للحياة عن طريق قياس التدفق الخلوي. يعد العرض المرئي لهذه التقنية أمرا بالغ الأهمية حيث يجب عرض توطين العقدة الليمفاوية وإزالتها من أجل إتقانها.
بعد تخدير الماوس ، ضع مرهما للعين ، وحقن البوبرينورفين وتأكد من التخدير عن طريق قرصة إصبع القدم ، ثم أدر الماوس على جانبه. أولا ، حدد العقدة الليمفاوية العضدية ثم حلق المنطقة المراد تشريحها. بعد تنظيف أي شعر متساقط ، ضع مطهرا على المنطقة ثم قم بعمل شق صغير يبلغ حوالي خمسة ملليمترات على الجزء الخلفي من الأربعة ليج.
استخدم زوجين من الملقط لتمديد الشق حتى يمكن رؤية العقدة الليمفاوية العضدية ، والتي يمكن أن تبدو رمادية أو أغمق من الدهون المحيطة. ثم اضغط على اللفافة التي تغطي العقدة الليمفاوية بزوج واحد من الملقط. ضع الزوج الثاني من الملقط أسفل العقدة الليمفاوية قدر الإمكان واسحب الغشاء برفق دون كسر الأنسجة المحيطة.
ثم استخدم الزوج الأول من الملقط لكسر اللفافة وإزالة العقدة الليمفاوية. إذا تم حصاد العقدة الليمفاوية بنجاح ، فستظهر بقعة من الدم حيث كانت العقدة الليمفاوية موجودة مسبقا. ضع العقدة الليمفاوية المستأصلة في محلول متساوي التوتر إذا غرقت ، فهذا سيؤكد أن الأنسجة المحصودة عبارة عن عقدة ليمفاوية وليست دهونية.
بعد ذلك ، تحقق من عدم وجود شعر في الجرح وأغلق الشق عن طريق لصق الداخلين من الجلد معا وتدبيسهما بمشبك أو مقطعين ، اعتمادا على حجم الشق. الآن قم بتحديد موقع العقدة الليمفاوية الأربية وحلق المنطقة المراد تشريحها. بعد تنظيف أي شعر متساقط ، ضع مطهرا على المنطقة ثم قم بعمل شق صغير يبلغ حوالي خمسة ملليمترات فوق المخلب الخلفي بالقرب من البطن.
بعد فتح الشق بزوجين من الملقط كما هو موضح للتو للعقدة الليمفاوية العضدية ، حدد العقدة الليمفاوية الأربية الموجودة داخل الأنسجة الدهنية المحيطة. ثم قم بإزالة العقدة الليمفاوية بزوجين من الملقط كما هو موضح للتو. مرة أخرى ، تأكد من الحصاد الناجح للعقدة الليمفاوية من خلال ملاحظة بقعة الدم التي تظهر في مكان وجود العقدة الليمفاوية سابقا ، ثم قم بإسقاط العقدة الليمفاوية الأربية في وعاء منفصل من محلول متساوي التوتر.
بعد حصاد جميع الغدد الليمفاوية ، ضع الفأر في قفص وأضف الطعام الرطب حتى يتمكن الفأر من إطعامه بسهولة. بعد الجراحة بعد حوالي ست إلى ثماني ساعات ، افحص الفأر للتأكد من أنه لا يعاني من الألم. لاحظ بعناية أن الموقف وتفاعل المشي مع congen ومظهر الفراء يشبه الفأر السليم العادي.
أخيرا ، قم بفصل العقدة الليمفاوية عن طريق الضغط عليها على الشرائح المتجمدة في طبق بتري ثم انقلها إلى أنبوب للحصول على معلق خلية واحدة. بعد تلطيخ الخلايا لمستضدات سطح الخلية ذات الأهمية ، قم بتحليل الخلايا عن طريق قياس التدفق الخلوي. هنا ، يتم عرض عينة للأمام والجانب ، وتظهر مخططات مبعثرة للغدد الليمفاوية التي يتم حصادها من المخدرة أو المضحية.
الملامح والنسب المئوية للخلايا في بوابات الخلايا الليمفاوية الحية للقطعتين المبعثرتين هي نفسها. إثبات أن جراحة العقدة الليمفاوية هي تقنية مناسبة لحصاد الخلايا بمجرد إتقان جراحة العقدة الليمفاوية ، يمكن إجراؤها في غضون خمس إلى 10 دقائق لكل فأر إذا تم إجراؤها بشكل صحيح.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
النظرة العامة
تصف هذه المقالة تقنية جراحية لإزالة العقد الليمفاوية بشكل متسلسل من فأر مخدر لتتبع الاستجابة المناعية بمرور الوقت. يتضمن الإجراء تحديد مكان العقد الليمفاوية، وحصادها، وإغلاق الشق، متبوعًا بالحصول على تعليق خلية مفردة للتحليل.
مكونات الدراسة الرئيسية
مجال العلم
- علم المناعة
- التقنيات الجراحية
- التحليل التجريبي
الخلفية
- فهم الاستجابات المناعية أمر حاسم في البحث.
- تلعب العقد الليمفاوية دورًا رئيسيًا في الجهاز المناعي.
- الإزالة المتسلسلة تسمح للتحليل الزمني للاستجابات المناعية.
- تعزز التقنيات المرئية التعلم وإتقان الإجراء.
غرض الدراسة
- لإظهار الإزالة الجراحية للعقد الليمفاوية في الفئران.
- لتيسّر دراسة تقدم الاستجابة المناعية.
- لتوفير دليل مرئي للباحثين.
الطرق المستخدمة
- تحديد مكان العقد الليمفاوية في فأر مخدر.
- الإزالة الجراحية للعقد الليمفاوية.
- إغلاق الشق بعد الجراحة.
- تحضير تعليق خلية مفردة للتحليل.
النتائج الرئيسية
- تم تحقيق الإزالة الناجحة للعقد الليمفاوية.
- تم الحصول على مجموعات الخلايا الليمفاوية القابلة للحياة.
- استخدمت قياس السيتومترية للتدفق لتقييم الخلايا الليمفاوية.
- حسنت العروض المرئية فهم التقنية.
الخلاصات
- تسمح التقنية بالتتبع الفعّال للاستجابات المناعية.
- الوسائل المرئية ضرورية لإتقان الإجراءات الجراحية.
- يمكن للدراسات المستقبلية أن تبني على هذه الطريقة للحصول على رؤى أعمق.
الأسئلة المتداولة
Executive Industry Relevance
Sequential lymph node surgery enables longitudinal tracking of immune responses within the same animal, reducing experimental variability and supporting mechanistic de-risking in target validation. This approach provides sufficient viable lymphocytes for phenotypic and functional assays, enhancing predictive confidence in preclinical immunology studies. By facilitating time course experiments, the technique supports translational continuity from discovery through preclinical validation.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables interrogation of therapeutic hypotheses through temporal analysis of lymphocyte expansion in lymph nodes.
- Operational Value: Reduces animal usage and experimental variability by performing repeated sampling in the same mouse.
- Scientific Value: Supports biological de-risking by characterizing lymph node-residing lymphocyte phenotypes over time.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Yields 1-2x10⁶ cells per lymph node, sufficient for phenotypic characterization and functional assays.
- Operational Value: Provides standardized, reproducible cell suspensions for downstream flow cytometry analysis.
- Scientific Value: Enables preparation of validated biological systems for reliable compound evaluation in immunology screening.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Supports disease-relevant system modeling by tracking immune cell dynamics in lymph nodes over time.
- Operational Value: Facilitates translational biomarker alignment through longitudinal immune monitoring.
- Scientific Value: Enhances predictive confidence in preclinical models by enabling mechanistic de-risking of immune-mediated pathways.
Pipeline & Workflow Integration
The method integrates into the discovery continuum from hypothesis testing through preclinical validation, supporting immune response tracking and lymphocyte functional analysis.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing and pathway clarification via temporal immune response profiling.
- Screening: Enables assay readiness through reproducible single-cell suspensions from harvested lymph nodes.
- Analytics: Generates quantitative lymphocyte populations for flow cytometry-based comparison across time points.
- Translational Research: Connects discovery to preclinical validation through continuous immune monitoring in disease-relevant systems.
- Enterprise Reuse: Represents a reusable surgical capability for longitudinal immunology studies across multiple projects.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Predictive confidence in target validation through longitudinal immune response tracking.
- Operational Value: Standardization and reproducibility in lymphocyte harvesting and processing.
- Strategic Value: Improved go/no-go decisions via reduced mechanistic ambiguity in immunology programs.
- Portfolio Impact: Risk-adjusted prioritization based on temporal immune response data from sequential sampling.
Implementation Considerations
- Requires expertise in murine surgical techniques and anesthesia protocols.
- Necessitates sterile instrumentation and isotonic solutions for tissue preservation.
- Demands cross-team standardization for consistent lymph node localization and harvesting.
- Involves adaptation considerations for different lymph node sites (brachial, inguinal) and mouse strains.
- Limited by postoperative recovery intervals, allowing sampling every second day per node.
