تشخيص السل الرئوي مع اختبار MTB / RIF كسبيرت

الهدف العام من هذا الإجراء هو الكشف المتزامن، في غضون ساعتين، عن mycobacterium tuberculosis ومقاومة rifampicin في البلغم المطرود أو رواسب البلغم المركزة. ابدأ ببروتوكول بسيط وعالي الفعالية لتطهير العينات. بعد ذلك، انقل كل عينة معالجة إلى خرطوشة M-T-B-R-I-F مخصصة للاستخدام مرة واحدة، والتي تحتوي على كواشف PCR وتستضيف عملية الـ PCR.

قم بتحميل الخراطيش على نظام gene expert DX وابدأ عملية ultra sensitive HEMI nested PCR للكشف المتزامن عن mycobacterium tuberculosis ومقاومة rifampicin. وفي النهاية، اقرأ نتائج الاختبار وقم بإبلاغ الطبيب بها. إن مقايسة expert MTPR مخصصة للاستخدام مع عينات من المرضى الذين يوجد لديهم اشتباه سريري في الإصابة بالسل الرئوي والذين يستوفون المعايير الموضحة في نص الشركة.

يرجى ملاحظة أنه لا ينبغي استخدامه لمراقبة آثار العلاج الدوائي. بلورة. سيقوم الآن فني من مختبري بشرح البروتوكول وفقاً للمعيار الثاني من المعايير الدولية لرعاية مرضى السل. يتم جمع عينتين للفحص البكتيريولوجي من كل مريض يُشتبه في إصابته بالسل الرئوي.

خصص وحدة واحدة من نظام gene expert DX لكل عينة اختبار، مع تمييز كل خرطوشة بمعرف العينة. والآن، بالنسبة لكل مقايسة عينة، انقل 1 milliliter من البلغم إلى أنبوب مخروطي بسدادة لولبية سعة 15 milliliter باستخدام ماصة نقل معقمة أخرى. أضف 2 milliliters من كاشف العينة M-T-B-R-I-F.

أغلق الغطاء بإحكام وبقوة. رُج الأنبوب من 10 إلى 20 مرة. ثم ضع الأنبوب في وضع عمودي لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة بعد رجه بقوة.

مرة أخرى، اترك العينات لتتوازن في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. تحقق من أن جميع عينات الفحص تم تخفيفها وتجانسها (ED) دون وجود تكتلات مرئية من البلغم. أولاً، ضع ملصقات على الخراطيش تتضمن معرف العينة (specimen ID) لكل عينة من رواسب البلغم؛ ثم أضف 1.5 milliliters من كاشف عينات M-T-B-R-I-F إلى كل عينة رواسب، وانقل 0.5 milliliters إلى أنبوب مخروطي سعة 15 milliliter ذو غطاء لولبي. أغلق الغطاء، ثم استخدم جهاز الرج (vortex) لمدة 30 ثانية، وضع الأنبوب في وضع عمودي لمدة خمس دقائق بعد ذلك.

امزج العينات باستخدام جهاز الخض (vortex)، ثم ضع الأنبوب في وضع عمودي لمدة 10 دقائق. افحص العينات المميّعة للتأكد من خلوها من تكتلات البلغم. طابق الملصق الموجود على الأنابيب مع الخراطيش المقابلة لها.

لا تفتح الخرطوشة حتى تكون مستعداً لإجراء الاختبار، واستخدم الخرطوشة في غضون 30 دقيقة من فتح غطائها. باستخدام ماصة النقل المعقمة، اسحب العينة المسالة حتى يرتفع السطح المقعر للسائل فوق علامة الحد الأدنى. ثم قم بتحميل العينة ببطء داخل الخرطوشة.

أغلق غطاء الخرطوشة. ابدأ الاختبار في غضون 30 دقيقة من إضافة العينة إلى الخرطوشة. قم بتشغيل الكمبيوتر أولاً ثم قم بتشغيل الجهاز الموجود على سطح المكتب.

انقر نقراً مزدوجاً على أيقونة gene expert DX. قم بتسجيل الدخول إلى برنامج النظام. اختر إنشاء اختبار (create test) لفتح مربع حوار مسح رمز الخرطوشة الشريطي.

بعد ذلك، اكتب معرف العينة وامسح الرمز الشريطي الموجود على الخرطوشة. وعندما تظهر نافذة إنشاء الاختبار، انقر فوق بدء الاختبار وأدخل كلمة المرور في مربع الحوار. الآن، افتح باب وحدة الجهاز وقم بتحميل الخرطوشة.

أغلق الباب لبدء الاختبار. عندما ينطفئ الضوء الأخضر، يكون الاختبار قد اكتمل. وبمجرد أن يحرر النظام قفل الباب، افتح باب الوحدة وأخرج الخرطوشة.

أخيراً، تخلص من الخراطيش المستخدمة في حاويات النفايات المناسبة. تشتمل كل خرطوشة اختبار على كواشف لإجراء QPCR للكشف عن مقاومة rifampicin في مجموعة Mycobacterium tuberculosis، بالإضافة إلى ضوابط تجريبية مناسبة. يتحقق ضابط فحص المسبار من إعادة ترطيب الكواشف، وتعبئة أنبوب PCR في الخرطوشة، وسلامة المسبار، واستقرار الصبغة.

يعمل منحنى معالجة العينة كضابط موجب للتأكد من المعالجة الكافية للبكتيريا المستهدفة، كما يشير أيضاً إلى وجود أي مثبطات لتفاعل PCR. وقد صُممت البادئات للتمييز بين تسلسل النوع البري المحفوظ والطفرات في المنطقة الأساسية من جين RPOB المرتبط بمقاومة RIF. وتتناسب قيم CT عكسياً مع تركيز قالب M-T-B-D-N-A المستهدف في عينة الاختبار.

يخلص مربع حوار نتيجة الاختبار إلى أن الحمض النووي المستهدف لـ MTB قد تم اكتشافه، بينما لم يتم اكتشاف مقاومة لـ RIF في عينة هذا المريض. تم اكتشاف الحمض النووي المستهدف لـ MTB بمستويات منخفضة مع وجود مؤشر على مقاومة rifampicin. وقد استوفى كل من ضابطي SPC وPCC معايير القبول المحددة.

تُعتبر نتيجة هذا المقايسة غير صالحة نظراً لأن ضابط SPC سلبي ونواتج الـ PCR غائبة. إما أن العينة لم تُعالج بشكل صحيح أو أن هناك تثبيطاً لعملية الـ PCR. يُرجى إعادة إجراء المقايسة.

كما رأيتم في الفيديو، فإن الاختبار معياري ولا يتطلب سوى بنية تحتية مخبرية وتدريب متوسطين. لذا، أعتقد أن مقايسة M-T-B-R-F المتخصصة تمتلك القدرة على توفير اختبارات تشخيصية معيارية وحساسة ومحددة للغاية لكل من مرض السل ومقاومة الريفامبيسين في نقاط الرعاية الصحية المتاحة عالمياً.