Name: كامل التثبيت الإرواء الحيوان للقوارض (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-30T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: تعلم تقنية التثبيت بالإرواء للحفاظ على نسيج دماغ الجرذ باستخدام ضغوط فيزيولوجية مثلى. تضمن هذه الطريقة توزيعًا موحدًا للمثبت لإجراءات التليين المناعي النسيجي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وقد تم تمويل هذا العمل من قبل مركز تكنولوجيا الاتصالات العصبية (CNCT)، ومركز الموارد P41 بتمويل من المعهد الوطني للتصوير الطبية الحيوية والهندسة الحيوية (NIBIB، P41 EB002030) وبدعم من المعاهد الوطنية للصحة (NIH).

<ol><li>Cinar, O., Semiz, O., Can, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microscopic+survey+on+the+efficiency+of+well-known+routine+chemical+fixatives+on+cryosections%5BTitle%5D)+AND+%22Acta.+Histochem%22%5BJournal%5D)">A microscopic survey on the efficiency of well-known routine chemical fixatives on cryosections.</a> Acta. Histochem. 108, 487-496 (2006).</li>
<li>Fritz, M., Rinaldi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+pressure+measurement+with+the+tail-cuff+method+in+Wistar+and+spontaneously+hypertensive+rats%3A+Influence+of+adrenergic-+and+nitric+oxide-mediated+vasomotion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Toxicol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Blood pressure measurement with the tail-cuff method in Wistar and spontaneously hypertensive rats: Influence of adrenergic- and nitric oxide-mediated vasomotion.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 58, 215-221 (2008).</li>
<li>Ikeda, K., Nara, Y., Yamorii, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Indirect+systolic+and+mean+blood+pressure+determination+by+anew+tail+cuff+method+in+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Indirect systolic and mean blood pressure determination by anew tail cuff method in spontaneously hypertensive rats.</a> Laboratory Animals. 25, 26-29 (1991).</li>
<li>Jacobowitz, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Removal+of+discrete+fresh+regions+of+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Removal of discrete fresh regions of rat brain.</a> Brain Res. 80, 111-115 (1974).</li>
<li>Jonkers, B. W., Sterk, J. C., Wouterlood, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcardial+perfusion+fixation+of+the+CNS+by+means+of+a+compressed-air-driven+device%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosci.+Meth%22%5BJournal%5D)">Transcardial perfusion fixation of the CNS by means of a compressed-air-driven device.</a> Journal of Neurosci. Meth. 12, 141-149 (1984).</li>
<li>Jung-Hwa, T. ao-C. heng, Gallant, J., Brightman, P. E., Dosemeci, M. W., A,, Reese, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+changes+at+the+synapse+after+delayed+perfusion+fixation+in+different+regions+of+the+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Structural changes at the synapse after delayed perfusion fixation in different regions of the mouse brain.</a> J. Comp. Neurol. 501, 731-740 (2007).</li>
<li>Kasukurthi, R., Brenner, M. J., Morre, A. M., Moradzadeh, A., Wilson, Z. R., Santosa, K. B., Mackinnon, S. E., Hunter, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcardial+perfusion+versus+immersion+fixation+for+assessment+of+peripheral+nerve+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Meth%22%5BJournal%5D)">Transcardial perfusion versus immersion fixation for assessment of peripheral nerve regeneration.</a> J. Neurosci. Meth. 184, 303-309 (2009).</li>
<li>Lamberts, R., Goldsmith, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fixation%2C+fine+structure%2C+and+immunostaining+for+neuropeptides%3A+perfusion+versus+immersion+of+the+neuroendocrine+hypothalamus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Histochem.+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Fixation, fine structure, and immunostaining for neuropeptides: perfusion versus immersion of the neuroendocrine hypothalamus.</a> J. Histochem. Cytochem. 34, 389-398 (1986).</li>
<li>Ramos-Vara, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technical+Aspects+of+Immunohistochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Vet.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Technical Aspects of Immunohistochemistry.</a> Vet. Pathol. 42, 405-426 (2005).</li>
<li>Shi, Z. R., Itzkowitz, S. H., Kim, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+three+immunoperoxidase+techniques+for+antigen+detection+in+colorectal+carcinoma+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Histochem.+Cytochem%22%5BJournal%5D)">A comparison of three immunoperoxidase techniques for antigen detection in colorectal carcinoma tissues.</a> J. Histochem. Cytochem. 36, 317-322 (1988).</li>
<li>Walker, W. F. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWalker%2C+WF+%22Vertebrate+dissection%22">Vertebrate dissection</a>. , Sixth Ed, W.B. Saunders Comp. Philadelphia. (1980).</li>
<li>Zwienenberg, M., Gong, Q., Lee, L. L., Berman, R. F., Lyeth, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((J.+Neurotrauma%5BTitle%5D)+AND+%22Monitoring+in+the+Rat%3A+Comparison+of+Monitoring+in+the+Ventricle%2C+Brain+Parenchyma%2C+and+Cisterna+Magna%22%5BJournal%5D)">J. Neurotrauma.</a> Monitoring in the Rat: Comparison of Monitoring in the Ventricle, Brain Parenchyma, and Cisterna Magna. 16, 1095-1102 (1999).</li>
</ol>

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

ملاحظات إضافية لعملية جراحية ناجحة: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة تم اختراق الحجاب الحاجز، وتسبق في أسرع وقت، ونقص الأكسجة hypercapnia ستبدأ التغيرات الفسيولوجية التي قد لا رجعة فيه نخلط تحليل لاحق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما يتم إدخال الإبرة وفرضت في مكان، فإن الضغط المتبقية دفع الدم إلى قاعدة من الإبرة (فلاش باك). في الواقع، قد طرد بقوة أكبر الحيوانات في الدم. فمن الأهمية بمكان أن الدم على الأقل الوصول إلى قاعدة من الإبرة إلى تجنب إدخال فقاعات الهواء التي من شأنها أن يشكل عقبة لإتمام نضح. إذا لاحظت أي دم في قاعدة إبرة، وإزالة الإبرة وإعادة ملء مع المخزن عن طريق ربط منه إلى ميناء منفذ للتلاعب نضح. بمجرد أن يتم تشغيل العازلة من خلال التلميح، يمكن إعادة إدخال الإبرة في القلب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التنسيب المناسب للإبرة في الشريان الأورطي أمر بالغ الأهمية، فإنه لا ينبغي أن تصل إلى حد قوس الأبهر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا perfusions متعددة تجري أنه ليس من الضروري تيس الإعداد من البداية في كل مرة. يحتاج المستخدم أن يكون الحجم المناسب لعازلة على حد سواء ومثبت في كل زجاجة (200mls الحيوان / حل). ويمكن أيضا تعبئتها في زجاجات إذا لزم الأمر. الجانب الأكثر أهمية للنظر هو طرد خط نضح الذي يمتد من الإعداد لهذا الحيوان (صمام الإخراج). بعد الانتهاء من نضح، وسوف يكون هذا الخط لامتصاص العرق 4٪ في ذلك. إزالة أنابيب من الزجاجة العازلة واستخدام الحقنة 50 مل مملوءة بالماء لطرد مثبت. تأكد يتم وضع صمام منفذ في دورق جمع النفايات للتخلص السليم لامتصاص العرق. كرر ذلك ثلاث مرات. عبوة مع العازلة باستخدام نفس الأسلوب هو موضح في 2.3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هذا الأسلوب من أجل تثبيت قابل للتكيف مع درجة عالية من القدرة على تغيير كل العازلة وغيرها من المثبتات مثبت (مثل تلك التي تستخدم لم) وفقا لمتطلبات هذه التجربة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كما هو النظام كثيرا ما تستخدم لاستخلاص الأنسجة الحية. لهذاعملية واحدة يستخدم ببساطة تسليم العازلة فقط (وضعت زجاجة عازلة في حين لا تزال تعلق على النظام بأكمله في دلو الثلج وزجاجة مثبت هو الإعداد ولكن فارغة مختومة). هذا يؤكد على نضح العازلة البرد في الضغط الأمثل. من هنا يمكن أن تكيف النظام إلى ضخ الأصباغ يمكن حلها عن طريق إضافة إما صبغ مباشرة إلى المخزن المؤقت (في حال كانت الكمية ليست قضية) أو استخدام المحاقن مع الحد الأدنى من المخزن / حل في صبغ بين عازلة - مثبت الخطوة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في حالة الصب الأوعية الدموية، وعازلة للرصد الضغط خطوة حاسمة لكن بسبب اللزوجة وترسيخ طبيعة الحل الصب يجب أن تستخدم إما حقنة 50ml للتسليم المباشر أو مرفق التخلص منها ثانوية بالنسبة لجهاز (الأنابيب، صمام، وعقد يمكن استخدام حاوية) التي أدخلت على التفاعل مع النظام الحالي. سبق الصب مختبراتنا &#39;الأوعية الدموية في تصميم وتصنيع جهاز نضح. ولذلك لا يمكننا شأكلت من ان قياسات الضغط سيكون القياس الدقيق في موقع التسليم. قد الأرقام لا بد من تعديلها لتحقيق النجاح في تنفيذ السوائل اللزجة. </li></ol>

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> معدات </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> التخدير: </td></tr><tr><td> الكيتامين / زيلازين خليط (تخدير قد تختلف في مختبر / مؤسسة) </td><td> Ketaset </td><td> NDC 0856-2013-01 </td><td> 10 مل فيال </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> الجراحة: </td></tr><tr><td> إبرة معلومات سرية، 27 GA × 1.25 &quot; </td><td> عتاد الخدمات </td><td> 25251 </td><td></td></tr><tr><td> كبير كليل / كليل مقص منحني (~ 14.5 سم) </td><td> أدوات العلم غرامة </td><td> 14519-14 </td><td></td></tr><tr><td> مستقيم قزحية مقص </td><td> أدوات العلم غرامة </td><td> 14058-11 </td><td></td></tr><tr><td&gt; قياسي ملاقط </td><td> أدوات العلم غرامة </td><td> 11027-12 </td><td></td></tr><tr><td> زوج من ملاقط (غريف) غرامة </td><td> أدوات العلم غرامة </td><td> 11050-10 </td><td></td></tr><tr><td> 1 ملقط مرقئ كبير - منحنية أو مستقيمة (~ 19 سم) </td><td> surgicaltools.com </td><td> 17.21.51 </td><td></td></tr><tr><td> 2 ملقط مرقئ القياسية - مسنن مستقيم (14 سم) </td><td> أدوات العلم غرامة </td><td> 13013-14 </td><td></td></tr><tr><td> 1 مرقئ تعديل (15 عيار ثقب المودعة عن طريق طرف) </td><td> أدوات العلم غرامة </td><td> 13013-14 </td><td></td></tr><tr><td> 15-قياس إبرة حادة أو الزيتون يميل-(إبرة نضح) </td><td> Fisnar </td><td> 5601137 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> رذاذ: </td></tr><tr><td> نظام HyPerfusion أو ما يعادلها &lt;/ TD&gt; <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> الفوسفات مخزنة المالحة، ودرجة الحموضة 7.4 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 4٪ لامتصاص العرق في مخزن الفوسفات 0،1 متر، ودرجة الحموضة 7.4 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> الضحلة الزجاج أو علبة من البلاستيك، ما يقرب من 10 &quot;× 10&quot; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> سحق الجليد </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> حمام الماء (37 درجة مئوية) </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> مؤقت </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 50 مل حقنة </td><td> ميدلاين صناعات </td><td> NPMJD50LZ </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> تشريح: </td></tr><tr><td> السلطة الفلسطينيةالأشعة تحت الحمراء من مقص معيار مستقيم حاد / فظة (~ 12 سم) </td><td> أدوات العلم غرامة </td><td> 14054-13 </td><td></td></tr><tr><td> متوسط ​​rongeurs منحني أو مستقيم (14-16 سم) أو إزالة عظم الجمجمة كماشة </td><td> أدوات العلم غرامة </td><td> 16020-14 </td><td></td></tr><tr><td> مستقيم قزحية مقص (~ 9 سم) </td><td> أدوات العلم غرامة </td><td> 14058-11 </td><td></td></tr><tr><td> الدقيقة ملعقة (مزدوج 2 &quot;تاريخ شقة واحدة مدورة، واحد مدبب إلى 1/8&quot;) </td><td> أدوات العلم غرامة </td><td> 10091-12 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> بعد التثبيت والتخزين: </td></tr><tr><td> 50 قنينة زجاج مل </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 40 مل HEPES-التخزين المؤقت هانكس الحل (HBHS) مع أزيد الصوديوم (90mg / لتر) </td><td></td><td></td><td></td></tr></tbodذ&gt; </table>

كامل التثبيت الإرواء الحيوان للقوارض

Whole Animal Perfusion Fixation for Rodents

هدف التثبيت هو بسرعة وبشكل موحد المحافظة على الأنسجة في حالة الحياة مثل. في حين وضع الأنسجة مباشرة في أعمال مثبت جيدا لقطع صغيرة من الأنسجة، وعينات أكبر مثل الدماغ سليمة تشكل مشكلة لتثبيت غمر لأن مثبت لا تصل الى جميع مناطق الأنسجة في نفس المعدل 5،7. في كثير من الأحيان، والتغيرات في الاستجابة لنقص الأكسجة تبدأ قبل أن تتمكن من الحفاظ على النسيج 12. ميزة perfusing مباشرة مثبت من خلال الدورة الدموية هو أن هذه المادة الكيميائية يمكن أن تصل بسرعة كل ركن من أركان الحي باستخدام شبكة الطبيعية الأوعية الدموية. من أجل الاستفادة من الدورة الدموية أكثر فاعلية، لا بد من الحرص على تطابق الضغوط الفسيولوجية 3. من المهم أن نلاحظ أن الضغوط النفسية هي التي تعتمد على الأنواع المستخدمة. تقنيات لتثبيت نضح تختلف تبعا للنسيج إلى أن تكون ثابتة، وكيف ستتم معالجة الأنسجة تثبيت التالية. في هذا الفيديو، ونحن تصف منخفضة التكلفة، والسريع، وإجراء تثبيت للرقابة وموحدة تستخدم لامتصاص العرق 4٪ perfused عبر الأوعية الدموية: من خلال قلب فأر للحصول على الحفاظ على أفضل وجه ممكن من الدماغ لالمناعية. والميزة الرئيسية لهذه التقنية (مقابل بالجاذبية النظم) هو أن يتم استغلال الدورة الدموية بأكبر قدر من الفعالية.

نحن هنا وصف منخفضة التكلفة، والسريع، وإجراء تثبيت للرقابة وموحدة تستخدم لامتصاص العرق 4٪ perfused عبر الأوعية الدموية: من خلال قلب فأر للحصول على الحفاظ على أفضل وجه ممكن من الدماغ.

يتمثل الهدف من عملية التثبيت في الحفاظ على النسيج بسرعة وبشكل متجانس ليبقى في حالة مشابهة لحالته الحيوية. وبينما ينجح وضع النسيج مباشرة في المثبت بالنسبة للأجزاء الصغيرة...

الهدف العام من هذا الإجراء هو استعراض تقنية التثبيت بالتروية التي نتبعها، والتي تركز على استخدام الضغوط الفسيولوجية للحفاظ بشكل صحيح على أنسجة دماغ الجرذ من أجل إجراءات الكيمياء النسيجية المناعية. أولاً، يتم توضيح كيفية استخدام وإعداد جهاز التروية. بعد ذلك، يتم تجميع الأدوات اللازمة لإجراء كل من جراحة التروية واستخراج الدماغ، ثم يوضع الحيوان المخدر تخديراً عميقاً في صينية ضحلة مملوءة بالثلج المجروش.يتم إجراء شق جانبي بطول خمسة إلى ستة سنتيمترات عبر الجلد وجدار البطن أسفل القفص الصدري مباشرةً. يتم الكشف عن القلب ومن ثم إجراء عملية تروية للحيوان. وتتمثل الخطوة النهائية في إزالة الدماغ ووضعه في قارورة تحتوي على سائل تثبيت يعادل حجمه عشرة أضعاف حجم الدماغ على الأقل.الهدف العام من هذا الإجراء هو توضيح تقنية التثبيت بالتروية الخاصة بنا، والتي تركز على استخدام الضغوط الفسيولوجية للحفاظ على أنسجة دماغ الجرذ بشكل صحيح من أجل الكيمياء النسيجية المناعية. سنبدأ بتجهيز جهاز التروية، وسيستغرق ذلك حوالي 10 دقائق. باستخدام حقنة سعة 50 ملليلتر، قم بغسل وتطهير خط المثبت بشكل متكرر باستخدام المنظم حتى يتم إزالة جميع فقاعات الهواء.من الضروري لضمان نجاح عملية التروية عدم وجود فقاعات هوائية في أي من الخطوط. ويتم تحقيق ذلك عن طريق وضع صمام المخرج في دورق يحتوي على المحلول المنظم. الآن، أغلق صمام المخرج.بعد ذلك، قم بإزالة الأنبوب من السرنجة مع الضغط عليها بحيث تتدلى قطرة من المحلول المنظم من الطرف. ضع الأنبوب المملوء، عند مدخل المادة المثبتة، في زجاجة تحتوي على 200 milliliters من مثبت البارالدهيد لكل حيوان، مع الحرص على عدم إدخال أي فقاعات هواء.أحكم إغلاق الغطاء، مع التأكد من استقرار السدادة في موضعها بشكل صحيح. فإذا لم تكن السدادة مستقرة تماماً، لن يتم الحفاظ على الضغط داخل النظام المغلق. ضع الزجاجة في جهاز التروية.قم بضبط التدفق من خط المنظم (buffer) فقط عن طريق إغلاق منفذ المخرج وتدوير صمام المنظم إلى نفس وضع صمام المثبت. افتح منفذ المخرج وقم بتفريغ خط المنظم كما تم القيام به سابقاً مع خط المثبت. وبمجرد تفريغ الخط، ضع الأنبوب في زجاجة المنظم.بعد ذلك، اختبر قدرة النظام على تحمل الضغط. عند ضخ كرة المانومتر المطاطية، ستشعر بوجود مقاومة. وكتجهيز نهائي.املأ إبرة التروية بالمحلول المنظم لمنع دخول الهواء. النظام الآن جاهز لعملية التروية. بعد إعطاء خليط الكيتامين والزيلازين مع التحقق من الوصول إلى مستوى التخدير الجراحي عبر طريقة قرص إصبع القدم، ضع الجرذ المخدر تماماً في صينية ضحلة مملوءة بالثلج المجروش.لا تستمر في الإجراء ما لم يكن الحيوان تحت التخدير الكامل. ابدأ الجراحة بعمل شق جانبي بطول خمسة إلى ستة سنتيمترات عبر الجلد وجدار البطن أسفل القفص الصدري مباشرةً. افصل الكبد عن الحجاب الحاجز بعناية.أحدث شقاً صغيراً في الحجاب الحاجز باستخدام المقصات غير الحادة المنحنية. يمكن لوضع إصبعك والضغط الممارس أن يساعدا في القدرة على قص الحجاب الحاجز. استمر في شق الحجاب الحاجز على طول القفص الصدري بالكامل للكشف عن التجويف الجنبي.ضع مقصات كليلة منحنية على أحد جانبي الأضلاع، مع إزاحة الرئتين بحذر، ثم قم بإجراء قطع عبر القفص الصدري وصولاً إلى عظمة الترقوة. بعد ذلك، قم بإجراء قطع مماثل على الجانب المقابل. الآن، ارفع عظمة القص بعيداً وقم بتقليم أي أنسجة متصلة بالقلب بعناية.ثبّت طرف عظمة القص باستخدام الملقط الشرياني (hemostat) وضع الملقط فوق الرأس. يجب أن يرتفع الصدر إلى الأعلى مما يتيح رؤية واضحة للأوعية الدموية الرئيسية. وباستخدام مقصات القزحية (iris scissors)، قم بإجراء شق صغير في الطرف الخلفي للبطين الأيسر.مرّر إبرة تروية ذات طرف غير مدبب أو طرف زيتوني بقياس 15 gauge من خلال البطين المقطوع إلى الأبهر الصاعد. يجب أن يكون طرف الإبرة مرئياً من خلال جدار الأبهر، ويجب ألا يصل إلى قوس الأبهر حيث تتفرع الشرايين العضدية والسباتية. لتثبيت الإبرة ومنع التسرب، قم بضم القلب باستخدام ملقط 혈vاستئصال (hemostat).أخيرًا، استخدم مقص القزحية لعمل فتحة مخرج كبيرة في الأذين الأيمن. احرص على عدم إتلاف الأبهر النازل. عند هذه النقطة، يصبح الحيوان جاهزًا للتروية.قم بتوصيل إبرة التروية الموجودة في الأذين الأيمن بفتحة المراقبة دون إدخال أي فقاعات هوائية، ثم افتح فتححة المراقبة. بعد ذلك، قم بنفخ كرة المانومتر بسرعة وبشكل متساوٍ حتى يصل الضغط إلى 80 millimeters of mercury. حافظ على هذا الضغط طوال فترة حقن المحلول المنظم.ابدأ الآن بتشغيل المؤقت. اضبط زاوية الإبرة بحيث يكون التدفق في أقوى حالاته، وعندما يقترب المحلول المنظم من النفاد، قم بتحويل صمام المحلول المنظم. سيبدأ السائل في الجريان بشكل صافٍ عندما يتم تروية الكبد.يعد هذا مؤشراً على التروية الجيدة، ويجب تدوين وقت خلو الكبد من السائل بسرعة كبيرة. بعد هذا الحدث، ستُلاحظ رعشات التثبيت؛ حدد هذا الوقت كزمن التثبيت الحقيقي. وللحفاظ على معدل تدفق ثابت، يمكن زيادة الضغط تدريجياً ليصل إلى حد أقصى قدره 130 millimeters of mercury.بمجرد انتهاء عملية التثبيت تقريباً، أغلق صمام المخرج وسجل الوقت. يجب أن يكون جسم الجرذ الآن متصلباً. يمكن الآن استئصال أعضاء الجرذ. لإزالة الدماغ، ابدأ بتشريح الجرذ المثبت عن طريق فصل الرأس باستخدام المقصلة.بعد ذلك، قم بإجراء شق في الخط المتوسط على طول الغطاء الجلدي من الرقبة إلى الأنف، وكشف الجمجمة باستخدام مقصات الفم. قم بقص عضلات الرقبة المتبقية بحيث يتم الكشف عن قاعدة الجمجمة. ضع الطرف الحاد لمقصات القزحية في الثقبة العظمى من أحد الجانبين، مع تحريك المقصات بعناية على طول السطح الداخلي للجمجمة.بعد ذلك، قم بإجراء قطع يمتد إلى الحافة القاصية لسطح الجمجمة الخلفي. قم بإجراء قطع مماثل على الجانب المقابل. ثم استخدم الملاقط لإزالة عظام الجمجمة المحيطة بالمخيخ.قم بتمرير طرف المقص بعناية على طول السطح الداخلي للجمجمة من الزاوية الخلفية القاصية الظهرية إلى الحافة الجبهية القاصية. تجنب إتلاف الدماغ عن طريق رفع طرف الشفرة للأعلى. خلال هذه العملية، كرر هذه الخطوة بالقص على الجانب المقابل.بعد ذلك، وباستخدام الملاقط، قم بتقشير السطح الظهري للجمجمة بعيداً عن الدماغ. قم بقص جوانب الجمجمة باستخدام الملاقط أيضاً. الآن، وباستخدام ملعقة مختبرية (spatula)، اقطع البصلات الشمية والوصلات العصبية على طول السطح البطني للدماغ، ثم افصل الدماغ برفق عن الرأس.باستخدام مقص القزحية، قم بقص أي جزء من الأم الجافية التي تربط الدماغ بالجمجمة. وبمجرد إزالة الدماغ، ضعه في قارورة تحتوي على سائل تثبيت يكون حجمه 10 أضعاف حجم الدماغ على الأقل. تُحفظ القارورة في درجة حرارة 4 °C لمدة 24 ساعة.بعد مرور 24 ساعة، اغسل الدماغ باستخدام PBS ثلاث مرات مع التحريك اللطيف. يمكن بعد ذلك تخزين الدماغ في PBS أو محلول Hanks المتوازن. وعند إضافة أزيد الصوديوم، يمكن تخزين الأدمغة في درجة حرارة أربعة درجات Celsius لمدة تصل إلى ثلاثة أشهر.غير مقطعة. وبمجرد إتقان العملية، يمكن إتمام عملية التروية بأكملها في غضون خمس إلى ثماني دقائق.

whole-animal-perfusion-fixation-for-rodents

Research

JoVE Journal

Neuroscience

علم الأعصاب

يصف هذا الفيديو إجراء لتروية كبد الفأر من خلال الوريد البابي باستخدام محلول الكولاجيناز قبل عزل خلايا الكبد.

في الجسم الحي Murine Liver Perfusion: طريقة لغرس كبد القوارض بمحلول عبر الوريد البابي

هنا نقدم طريقة لالتقاط النسيجية، ووضع العلامات، وتطهير بصريا، والتصوير في أنسجة المخ واجهة سليمة حول الأجهزة بالغة الصغر مزروع مزمن في أنسجة المخ القوارض. النتائج من التقنيات تشمل هذه الطريقة مفيدة لفهم تأثير مختلف اختراق يزرع في الدماغ على الأنسجة المحيطة بها.

توصيف نسيجية سليمة من الأجهزة بالغة الصغر زرع الدماغ والأنسجة المحيطة بها

نقدم هنا مقايسة نفاذية الأوعية الدموية الدماغ ماوس استخدام الحقن داخل لتتبع الفلورسنت تليها التروية التي تنطبق على نماذج حيوانية من اختلال وظيفي في حاجز الدم في الدماغ. يتم استخدام أحد نصفي الدماغ لتقييم نفاذية كمياً، وأخرى للتتبع التصور/إيمونوستينينج. يستغرق الإجراء 5-6 ح للفئران 10.

في فيفو حاجز الدم في الدماغ نفاذية مقايسة في الفئران باستخدام المسمى فلوريسسينتلي تتبع

نقدم هنا، منهجيات رواية اثنين وبسباكت و mPACT، لتحقيق أقصى حد من الشفافية الضوئية والتحليل المجهري اللاحقة للمفرج الأنسجة في القوارض سليمة كامل الجهاز العصبي المركزي.

رواية السلبي مسح أساليب للإنتاج السريع للشفافية الضوئية في كامل أنسجة الجهاز العصبي المركزي

توضح هذه المقالة طريقة واضحة لإعداد أدمغة الحيوانات الصغيرة لتصوير الأشعة المقطعية الصغرى، في الآفات التي يمكن قياسها كمياً واقطاب الموقع بدقة عالية في سياق الدماغ كله.

أسلوب المستندة إلى الأشعة المقطعية الصغرى لتميز الآفات وتحديد مواقع الأقطاب في أدمغة الحيوانات الصغيرة

يوصف بروتوكول للضخ الموضعي للجسم السفلي للماوس ، بما في ذلك المثانة والبروستاتا والأعضاء الجنسية والعظام والعضلات وبشرة القدم.

إنشاء الدائرة المغلقة في الموقع perfusion من أعضاء البطن السفلي وأطراف هند في الفئران

يصف هذا البروتوكول مقايسة مراسل محسن عابر جديد قائم على rAAV. يمكن استخدام هذا الفحص للحث على التعبير المدفوع بالمحسن في الجسم الحي في دماغ الفأر.

نشر AAV لبنيات التعبير القائمة على المحسن في الجسم الحي في دماغ الفأر

يصف هذا البروتوكول نهجا فعالا وقابلا للاستنساخ للدراسات النسيجية للدماغ الماوس ، بما في ذلك التشوه ، وتقسم الدماغ ، والتأنيم المناعي العائم الحر ، وتركيب الأنسجة ، والتصوير.

الطفو الحر مناعة أدمغة الفأر

يتم تقديم طريقة تروية مريحة تتغذى على الجاذبية للتحليل النسيجي للجهاز العصبي المركزي للفأر. يظهر الكشف عن الفلورسنت المناعي α-سينوكلين المفسفرة في نموذج فأر لمرض باركنسون. يصف هذا العمل أيضا بشكل شامل التروية عبر القلب ، والتشريح ، وتجميد / تضمين الأنسجة ، وخطوات التقسيم المجمدة.

طريقة تروية عبر القلب تتغذى على الجاذبية للتحليل النسيجي للجهاز العصبي المركزي للفأر

العمود الفقري التغصني عبارة عن مقصورات ما بعد المشبكي لمعظم المشابك المثيرة. تحدث تغيرات في مورفولوجيا العمود الفقري التغصني أثناء النمو العصبي والشيخوخة والتعلم والعديد من الاضطرابات العصبية والنفسية ، مما يؤكد أهمية تحليل العمود الفقري التغصني الموثوق. يصف هذا البروتوكول القياس الكمي لمورفولوجيا العمود الفقري التغصني بدقة وقابلية للتكرار باستخدام برنامج إعادة بناء الخلايا العصبية ثلاثي الأبعاد التلقائي.

القياس الكمي للعمود الفقري التغصني باستخدام برنامج إعادة بناء الخلايا العصبية ثلاثي الأبعاد التلقائي

تعلم تقنية التثبيت بالإرواء للحفاظ على نسيج دماغ الجرذ باستخدام ضغوط فيزيولوجية مثلى. تضمن هذه الطريقة توزيعًا موحدًا للمثبت لإجراءات التليين المناعي النسيجي.

كامل التثبيت الإرواء الحيوان للقوارض

استكشف المزيد من الفيديوهات