Name: و خارج الحي متفرقة التحضير Microvessel الهيكل العظمي للتحقيق في التفاعل الأوعية الدموية (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: استكشف تقنية عزل وقسطرة الأوعية الدموية المقاومة خارج الجسم لدراسة وظائفها الوعائية. تتيح هذه الطريقة تقييم الاستجابات الدوائية والفيزيولوجية بدقة عالية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وأيد هذا العمل من قبل جمعية القلب الأميركية (EIA 0740129N)، والمعاهد الوطنية للصحة T32 HL90610.

<ol><li>Goodwill, A. G., Frisbee, S. J., Stapleton, P. A., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+Chronic+Anticholesterol+Therapy+on+Development+of+Microvascular+Rarefaction+in+the+Metabolic+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Impact of Chronic Anticholesterol Therapy on Development of Microvascular Rarefaction in the Metabolic Syndrome.</a> Microcirculation. , 1-18 (2009).</li>
<li>Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+vascular+thromboxane+generation+impairs+dilation+of+skeletal+muscle+arterioles+of+obese+Zucker+rats+with+reduced+oxygen+tension%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Increased vascular thromboxane generation impairs dilation of skeletal muscle arterioles of obese Zucker rats with reduced oxygen tension.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 295, H1522-H1528 (2008).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth-dependent+changes+in+endothelial+factors+regulating+arteriolar+tone%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Growth-dependent changes in endothelial factors regulating arteriolar tone.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292, H207-H214 (2007).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogen+peroxide+emerges+as+a+regulator+of+tone+in+skeletal+muscle+arterioles+during+juvenile+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Hydrogen peroxide emerges as a regulator of tone in skeletal muscle arterioles during juvenile growth.</a> Microcirculation. 15, 151-161 (2008).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+myogenic+responsiveness+of+skeletal+muscle+arterioles+with+juvenile+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Increased myogenic responsiveness of skeletal muscle arterioles with juvenile growth.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, 2344-2351 (2008).</li>
<li>Dacey, R. G., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+study+of+rat+intracerebral+arterioles%3A+methods%2C+morphology%2C+and+reactivity%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">A study of rat intracerebral arterioles: methods, morphology, and reactivity.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 243, H598-H606 (1982).</li>
<li>Fredricks, K. T., Liu, Y., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Response+of+extraparenchymal+resistance+arteries+of+rat+skeletal+muscle+to+reduce+PO2%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Response of extraparenchymal resistance arteries of rat skeletal muscle to reduce PO2.</a> Am. J. Physiol. 267, H706-H715 (1994).</li>
<li>Durand, M. J., Raffai, G., Weinberg, B. D., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin-%281-7%29+and+low-dose+angiotensin+II+infusion+reverse+salt-induced+endothelial+dysfunction+via+different+mechanisms+in+rat+middle+cerebral+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Angiotensin-(1-7) and low-dose angiotensin II infusion reverse salt-induced endothelial dysfunction via different mechanisms in rat middle cerebral arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 299, H1024-H1033 (2010).</li>
<li>LeBlanc, A. J., Cumpston, J. L., Chen, B. T., Frazer, D., Castranova, V., Nurkiewicz, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle+inhalation+impairs+endothelium-dependent+vasodilation+in+subepicardial+arterioles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Toxicol.+Environ.+Health+A%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle inhalation impairs endothelium-dependent vasodilation in subepicardial arterioles.</a> J. Toxicol. Environ. Health A. 72, 1576-1584 (2009).</li>
<li>Jernigan, N. L., LaMarca, B., Speed, J., Galmiche, L., Granger, J. P., Drummond, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+salt+enhances+benzamil-sensitive+component+of+myogenic+constriction+in+mesenteric+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Dietary salt enhances benzamil-sensitive component of myogenic constriction in mesenteric arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, H409-H420 (2008).</li>
<li>Stapleton, P. A., Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+mechanisms+of+endothelium-dependent+dilation+in+skeletal+muscle+arterioles+with+genetic+hypercholesterolemia%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Altered mechanisms of endothelium-dependent dilation in skeletal muscle arterioles with genetic hypercholesterolemia.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 293, R1110-R1119 (2007).</li>
<li>Goodwill, A. G., Stapleton, P. A., James, M. E., d'Audiffret, A. C., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+arachidonic+acid-induced+thromboxane+generation+impairs+skeletal+muscle+arteriolar+dilation+with+genetic+dyslipidemia%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Increased arachidonic acid-induced thromboxane generation impairs skeletal muscle arteriolar dilation with genetic dyslipidemia.</a> Microcirculation. 15, 621-631 (2008).</li>
<li>Baumbach, G. L., Hadju, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanics+and+composition+of+cerebral+arterioles+in+renal+and+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Mechanics and composition of cerebral arterioles in renal and spontaneously hypertensive rats.</a> Hypertension. 21, 816-826 (1993).</li>
<li>Uchida, E., Bohr, D. F., Hoobler, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+studying+isolated+resistance+vessel+from+rabbit+mesentery+and+brain+and+their+responses+to+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">A method for studying isolated resistance vessel from rabbit mesentery and brain and their responses to drugs.</a> Circ. Res. 4, 525-536 (1967).</li>
<li>Davis, M. J., Kuo, L., Chilian, W. M., Muller, J. M. I. solated Chapter 23. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDavis%2C+MJ+%22Isolated%2C+perfused+microvessels.+In%3A+Clinically+Applied+Microcirculation+Research%22">Isolated, perfused microvessels. In: Clinically Applied Microcirculation Research</a>. Barker, J. H., Anderson, G. L., Menger, M. D. 32, CRC Press, Inc. 435-456 (1995).</li>
<li>Lombard, J. H., Liu, Y., Fredricks, K. T., Bizub, D. M., Roman, R. J., Rusch, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+and+mechanical+responses+of+rat+middle+cerebral+arterieal+to+reduced+PO2+and+prostacyclin%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Electrical and mechanical responses of rat middle cerebral arterieal to reduced PO2 and prostacyclin.</a> Am. J. Physiol. 276, H509-H516 (1994).</li>
</ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

بروتوكول قدم يصف إقناء؛ إدخال القنية العزلة، وإزالة مزدوج من microvessel العضلات والهيكل العظمي، على الرغم من أن هذه التقنية يمكن تطبيقها بسهولة العامة لمعظم الأنسجة. لمخطوطة الحالية، وقد استخدم مصطلح &quot;شرين&quot; من قبل المؤلفين لوصف سفينة مقاومة تتراوح بين 70-120 ميكرون في القطر تحت نغمة نشط الراحة، والتي هي أيضا مساهما رئيسيا في تنظيم مقاومة نضح لجهاز أو الأنسجة. مع بعض التعديلات، ويمكن تركيب هذا النظام عل...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> الكواشف والمعدات </td><td> شركة </td><td> تعليقات / كتالوج # </td></tr><tr><td> سفينة غرفة </td><td> عرف </td><td> ديف ايك (MCW) </td></tr><tr><td> حمام ساخن المياه اعارة </td><td> PolyScience وHaake </td><td> Haake DC 10 </td></tr><tr><td> Pipets </td><td> فريدريك الحائر وشركاه </td><td> الأنابيب الشعرية 2.0 مم × 1.0 مم OD رقم (27-33-1) </td></tr><tr><td> ضغط مراقب </td><td> الآلات الدقيقة العالم </td><td></td></tr><tr><td> خزان المياه جاكت </td><td> عرف </td><td></td></tr><tr><td> الضوء مصدر خارجي </td><td> الآلات الدقيقة العالم </td><td> Novaflex </td></tr><tr><td> الماصة بولير </td><td> الجزئية الآلات </td><td> PMP102 Micropipet بولير </td></tr><tr><td> كامل مجمعاتمنة من الأدوات الجراحية </td><td> أدوات العلم غرامة </td><td> دومون </td></tr><tr><td> الملقط الجميلة جدا </td><td> أدوات العلم غرامة </td><td> INOX # 5 </td></tr><tr><td> حرير خياطة الموضوع </td><td> Ethilon </td><td> # 10-0 أو 9-0 </td></tr><tr><td> ستيريو المجهر </td><td> أوليمبوس </td><td> أوليمبوس SZ-11 </td></tr><tr><td> الفرجار الفيديو التناظرية </td><td> Boeckeler </td><td> عبر المراقب المالي (عن طريق-100) </td></tr><tr><td> ارتفاع دقة الكاميرا النظير </td><td> باناسونيك </td><td> GP-MF 602 </td></tr><tr><td> الأكسجين تانك </td><td> إقليمي </td><td> ثاني أكسيد الكربون بنسبة 21٪ النيتروجين التوازن و٪ 5 2 ميزان النتروجين </td></tr><tr><td> أنبوب </td><td> Tygon </td><td></td></tr><tr><td> استنزاف مضخة </td><td> كول Parmer شركة الصك </td><td></td></tr><tr><td> PSS الجرذ تعديل </td><td> انظر الوصفة أدناه </td><td></TD&gt; </tr><tr><td> فان Breemen في جهاز الأمن الوقائي المرخي </td><td> انظر الوصفة أدناه </td><td></td></tr></tbody></table> الجدول رقم 1. وهناك قائمة من المكونات الرئيسية لمحطة معزولة microvessel الإعداد المقدمة في هذه الارقام. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> تعديل وصفة الجرذ PSS </td><td> لجعل لترين من جهاز الأمن الوقائي </td><td> 20X سهم الملح (2L) </td><td> 20X المخزون الاحتياطي (2L) </td></tr><tr><td> كلوريد الصوديوم </td><td></td><td> 278،0 ز </td><td></td></tr><tr><td> بوكل </td><td></td><td> 14،0 ز </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4-7H 2 O </td><td></td><td> 11،5 ز </td><td></td></tr><tr><td> CaCl 2-H 2 O </td><td></td><td> 9،4 ز </td><td></td></tr><tr> &lt;TD&gt; NaHCO 3 </td><td></td><td></td><td> 80،8 ز </td></tr><tr><td> EDTA </td><td></td><td></td><td> 0.4 غرام </td></tr><tr><td> ناه 2 PO 4 </td><td> 0،28 غرام </td><td></td><td></td></tr><tr><td> جلوكوز </td><td> 1،98 غرام </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x وملح الأسهم </td><td> 100 مل </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x والمخزون الاحتياطي </td><td> 100 مل </td><td></td><td></td></tr><tr><td> الماء المقطر </td><td> 1800 مل </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> الجدول 2. وصفة لمعيار محلول ملحي الفسيولوجية (PSS) المستخدمة في بروتوكولات microvessel معزولة. تعليقات على وصفة: اصنع 2 لتر من أسهم ملح و 2 لتر من المخزون الاحتياطي. هذه ج1 أن يكون المبرد عندما لا تستخدم، ولكن يهز لهم الخير، وغالبا ما قبل إعداد جهاز الأمن الوقائي. تضاف المكونات الإضافية في ذلك الوقت من إعداد جهاز الأمن الوقائي النهائي. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> فان Breemen في جهاز الأمن الوقائي المرخي </td><td> لجعل 2 ليتر من جهاز الأمن الوقائي </td><td> 20X سهم الملح (1L) </td><td> 20X المخزون الاحتياطي (1L) </td></tr><tr><td> كلوريد الصوديوم </td><td></td><td> 107،4 ز </td><td></td></tr><tr><td> بوكل </td><td></td><td> 7،0 ز </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4-7H 2 O </td><td></td><td> 5،76 غرام </td><td></td></tr><tr><td> MgCl 2-6H 2 O </td><td></td><td> ز 81.32 </td><td></td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td></td><td></td><td> 40،4 ز </td></tr><tr><td> بتوقيت شرق الولايات المتحدةA </td><td></td><td></td><td> 0.2 غرام </td></tr><tr><td> EGTA </td><td></td><td></td><td> 15.22 </td></tr><tr><td> ناه 2 PO 4 </td><td> 0،28 غرام </td><td></td><td></td></tr><tr><td> جلوكوز </td><td> 1،98 غرام </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x وملح الأسهم </td><td> 100 مل </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x والمخزون الاحتياطي </td><td> 100 مل </td><td></td><td></td></tr><tr><td> الماء المقطر </td><td> 1800 مل </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> الجدول 3. وصفة لفان Breemen في ارتخاء محلول ملحي الفسيولوجية (PSS) المستخدمة في بروتوكولات microvessel معزولة في ظل ظروف من لهجة نشط صفر. تعليقات على وصفة: جعل 1 لتر من أسهم الملحالثانية 1 لتر من المخزون الاحتياطي. يمكن ان تكون هذه المبردة عندما لا تستخدم، ولكن يهز لهم الخير، وغالبا ما قبل إعداد جهاز الأمن الوقائي. تضاف المكونات الإضافية في ذلك الوقت من إعداد جهاز الأمن الوقائي ارتخاء النهائي.

و خارج الحي متفرقة التحضير microvessel الهيكل العظمي للتحقيق في التفاعل الأوعية الدموية

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

إعداد microvessel المعزولة هو إعداد الجسم الحي السابق الذي يسمح للفحص من مساهمات مختلفة من العوامل التي اوعية السيطرة، وبالتالي، مقاومة نضح 1-5. هذا هو إعداد الكلاسيكية التجريبية التي كانت، إلى حد كبير، وصفت في البداية من قبل يوشيدا وآخرون. 15 قبل عدة عقود. قدم هذا الوصف الأولي أساسا للتقنيات التي تم تعديلها على نطاق واسع وتعزيزه، في المقام الأول في مختبر الدكتور برايان Duling في جامعة فرجينيا 6-8، ونحن تقديم النهج الحالي في الصفحات التالية. وهذا إعداد تشير بالتحديد إلى شرين الناحلة في الفئران كما microvessel من خيار، ولكن يمكن بسهولة إعداد الأساسية يمكن تطبيقها على السفن معزولة عن الأنسجة الأخرى أو أي ما يقرب من الجهاز عبر الأنواع 9-13. ويمكن بسهولة الميكانيكية (أي الأبعاد) التغييرات في microvessels معزولة يمكن تقييمهاردا على مجموعة واسعة من الفسيولوجية (على سبيل المثال، نقص الأكسجين، والضغط داخل الأوعية الدموية، أو القص) أو التحديات الدوائية، ويمكن أن توفر نظرة ثاقبة العناصر الميكانيكية التي تضم استجابات متكاملة في حالها، على الرغم من الأنسجة السابقين، الجسم الحي. أهمية هذا الأسلوب هو أنه يتيح للتلاعب السهل من التأثيرات على تنظيم متكامل لقطر microvessel، في الوقت الذي تسمح أيضا للسيطرة على العديد من المساهمات من مصادر أخرى، بما في ذلك الضغط داخل الأوعية الدموية (عضلي)، تعصيب اللاإرادي، الدورة الدموية ( على سبيل المثال، إجهاد القص)، تعتمد على البطانية المنبهات أو مستقل، هرمونية، والتأثيرات متني، لتقديم قائمة جزئية. في ظل الظروف التجريبية المناسبة ومع أهداف مناسبة، وهذا يمكن أن تكون بمثابة ميزة على في الجسم الحي أو في الأعمال التحضيرية للنسيج / عضو في الموقع، التي لا تسمح بسهولة لمراقبة سهلة من المتغيرات أوسع النظامية. أماهالحد الأردن من إعداد هذا هو في الأساس نتيجة لقوتها. بحكم التعريف، وتجري دراسة سلوك هذه السفن في ظل الظروف التي تم فيها إزالة كثير من أكبر المساهمين في تنظيم مقاومة الأوعية الدموية، بما في ذلك العصبية، الخلطية، التمثيل الغذائي، وما إلى ذلك وعلى هذا النحو، وحذر المحقق لتجنب الإفراط في تفسير واستقراء البيانات التي يتم جمعها باستخدام هذا الإعداد. منطقة أخرى كبيرة من القلق فيما يتعلق بهذا الإعداد هو أنه يمكن أن يكون من السهل جدا إلى تلف المكونات الخلوية مثل بطانة بطانة الأوعية الدموية أو العضلات الملساء، ويمكن عرض هذه أن مصدر متغير من الخطأ. فمن المستحسن أن المحقق فرد الاستفادة من القياسات المناسبة لضمان جودة إعداد، سواء في البدء في التجربة وبشكل دوري طوال فترة بروتوكول.

و<em&gt; خارج الحي</emيوصف&gt; تمهيدا لعزل أكبر الشرايين الناحلة مقاومة العضلات لاستجواب كل من ردود الأوعية الدموية لمحفزات فعال في الأوعية وتقييم الخصائص الهيكلية الأساسية عن طريق آليات الجدار المبني للمجهول.

و خارج الحي متفرقة التحضير Microvessel الهيكل العظمي للتحقيق في التفاعل الأوعية الدموية

تعد تحضيرة الأوعية الدقيقة المعزولة تحضيرة خارج الجسم الحي (ex vivo)، تتيح فحص المساهمات المختلفة للعوامل التي تتحكم في الوعاء...

يتمثل الهدف العام من هذا الإجراء في عزل الشرايين المقاومة الفردية جراحيًا، وإزالتها، وتركيب كانيولات مزدوجة فيها. ولغرض الدراسة في بيئة خارج الجسم (ex vivo)، يتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق تحديد الأوعية الدقيقة وعزلها جراحيًا في حيوان تحت التخدير. وبعد نقل الأوعية الدقيقة إلى غرفة الأوعية، يتم تركيب كانيولات في كل من الطرفين القريب والبعيد للأوعية الدقيقة.وأخيراً، تُعرّض الأوعية الدموية الدقيقة لمحفزات دوائية أو فسيولوجية وتدخلات تجريبية لتقييم الآليات الكامنة وراء الوظيفة أو الخلل الوظيفي المتأصل في الوعاء الدموي نفسه. وفي نهاية المطاف، تُظهر النتائج أنماط والآليات المساهمة في التفاعلية الوعائية في بيئة معزولة من خلال محفزات وتدخلات مستهدفة بدقة. وبشكل عام، سيواجه الأشخاص المبتدئون في هذه الطريقة صعوبة لأن هذا التحضير يتطلب ليس فقط تطوير مهارات جراحية ممتازة يتم تنفيذها تحت المجهر، بل يتطلب أيضاً الصبر والتحكم الدقيق في المهارات الحركية اللازمة لإجراء كانيولة مزدوجة للأوعية الدقيقة المعزولة التي غالباً ما يكون قطرها أقل بكثير من مئة ميكرون.يجب تنفيذ ذلك بأقل قدر ممكن من الصدمات التي قد تلحق بالوعاء الدموي، وإلا فإن الإجراء بأكمله سيؤدي فقط إلى وعاء غير مستجيب. الشخص الذي سيقوم بشرح هذا الإجراء هو جوشوا بوتشر، طالب الدراسات العليا من مختبري، وذلك قبل إجراء تجارب الأوعية الدموية الدقيقة المعزولة. التحضير: ابدأ بثني الماصات الزجاجية الدقيقة التي تم تحضيرها مسبقاً لتأخذ الشكل المناسب عن طريق تسخينها فوق لهب بوتان. ثم استخدم ملقطاً دقيقاً لكسر الأطراف حتى تصل إلى القطر المناسب.ضع ماصتين دقيقتين في وضع متقابل داخل حوامل الماصات الخاصة بغرفة الأوعية الدقيقة، مع توجيههما بحيث تكون الرؤوس في نفس المستوى الرأسي والأفقي داخل غرفة الأوعية. بعد ذلك، قم بتحضير محلول ملحي فيزيولوجي (PSS) وتحقق من ضبط pH عند المستويات المناسبة لظروف التجربة المحددة. وباستخدام مقياس دم أو مقياس ميكرومتري لمنصة المجهر، قم بمعايرة الفرجار الرقمي للفيديو الذي سيُستخدم لقياس قطر الوعاء.استخدم خيط جراحة عيني مقاس 8-0 أو أصغر لتحضير عروات ذات طرف واحد لتثبيت الأوعية الدقيقة في الماصات. خزن العروات في طبق بتري على شريط صغير من الشريط اللاصق ملفوف حول شريحة مجهرية في يوم التجربة. قم بتشغيل غازات الموازنة في حجرة الوعاء وفي خزانات PERFUSE 8 و SUSE 8.املأ جميع الخزانات والأنابيب والغرف بمحلول PSS. وإذا لزم الأمر، استخدم محقنة لدفع محلول PSS برفق عبر الماصة بالكامل للتأكد من أنها غير مسدودة وممتلئة تماماً. حافظ على ضغط التدفق ضمن الحدود المعقولة لتجنب إتلاف محولات طاقة الضغط.بعد تخدير الحيوان وكشف الأوعية الدقيقة، قم بإزالة الأوعية الدقيقة باستخدام ملقط دقيق للإمساك بالجانب الخارجي والقص على طول الوعاء. توخَّ الحذر الشديد لتجنب شد أو سحب الوعاء. بعد ذلك، ضع الوعاء في حمام مائي مملوء، وباستخدام زوج من الملاقط الدقيقة ومعدل تروية معتدل، أمسك كل جانب من جدار لمعة الوعاء القريب وقم بتنسيب الطرف القريب على ماصة التدفق الداخلي.بعد ذلك، قم بتمرير الوعاء الدموي على رؤوس الكانيولا ودفعه على الرأس إلى النقطة التي يمكن عندها حلقات T تثبيت الوعاء. ضع حلقة T عند الطرف البعيد للوعاء وقم بتوصيله بكانيولا التدفق الخارج، مع تثبيته باستخدام حلقات T. اضبط الكانيولا حتى يتم تقليل التشوه في الوعاء إلى أدنى حد وبحيث يقارب الوعاء الطول الموجود في الجسم الحي.ضع حجر فقاعات صغير يمد الحمام بخليط الغاز المناسب، ثم ضع غطاءً بلاستيكياً أو غطاءً زجاجياً فوق الغرفة لتجنب تطاير السوائل على عدسة المجهر. قم بإغلاق أنبوب المخرج بالمشبك بشكل دوري لتحديد ما إذا كانت الوعاء يحقق درجة الضغط المطلوبة.افحص الأوعية للتأكد من عدم وجود تسريبات عن طريق زيادة الضغط داخل الوعاء وإغلاق خطوط التدفق الخارج ثم خطوط التدفق الداخل. إذا كان الضغط داخل اللمعة مستقراً، فهذا يعني عدم وجود تسريبات ملحوظة. وإذا كان الوعاء يحتوي على فرع جانبي صغير يسرب، فقم بربطه بعقدة واحدة باستخدام خيط جراحي رمدي 10-0. بعد قسطرة الأوعية الدقيقة، وموازنة الضغط والتحقق من سلامتها، ابدأ التجربة لتحديد استجابات التحكم الأولية.على سبيل المثال، بالنسبة لمحفز فسيولوجي مثل التنشيط العضلي أو التضيق الناجم عن الضغط، قم بتغيير الضغط داخل التجويف عشوائيًا عبر النطاق المطلوب، واترك للوعاء وقتًا للاستجابة للتحدي باستخدام الفينيل إيفرين بتركيزات متفاوتة من العقار وبترتيب عشوائي. بعد مرور وقت التدخل المناسب، ابدأ جولة ثانية من جمع البيانات إما عن طريق إجراء تدخلات إضافية أو بغسل المحلول الأولي أو إزالة التحدي الفسيولوجي والتحقق من عودة الوعاء إلى حالة التوازن. وبمجرد أن يفقد الوعاء النغمة النشطة، يتم إنهاء التجربة أو، إذا رغبت في ذلك، جمع بيانات حول ميكانيكا جدار الوعاء.عند اكتمال التجربة، قم بغسل جميع الخطوط والغرف باستخدام PSS وكميات وفيرة من الماء المقطر أو منزوع الأيونات، ثم اتركها لتجف تماماً. يظهر هنا وعاء دقيق مُقنّب مع وجود ماصات للدخول والخروج، بالإضافة إلى الحلقات بتكبير عالٍ. ويتضح هنا أن القطر الداخلي يبلغ 12 ميكرون كما تم تحديده باستخدام الفرجار الرقمي.يظهر وعاء دموي دقيق مُقنّب بعد مرحلة التوازن. وهنا يظهر الوعاء نفسه بعد تمدده استجابةً للتحفيز باستخدام acetylcholine. وأخيراً، هذا هو الوعاء المنقبض بعد التحفيز باستخدام phenylephrine.تلخص هذه الرسوم البيانية استجابات الأوعية الدقيقة المعزولة عند تعريضها لنقص الأكسجة، أو تراكيز متزايدة من الأسيتيل كولين، أو تغيرات في الضغط داخل الأوعية تحت ظروف التحكم، ثم في وجود محلول PSS خالٍ من الكالسيوم. وبمجرد إتقان هذه التقنية، يمكن تنفيذها في غضون ساعة واحدة تقريبًا إذا نُفذت بشكل صحيح، ويمكن للوعاء أن يظل حيويًا بسهولة لعدة ساعات داخل الحجرة مع الحفاظ على درجة الحرارة والغاز المناسبين وظروف SUSE eight أو perfuse eight.

the-ex-vivo-isolated-skeletal-microvessel-preparation-for

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

ويقدم طريقة جديدة لمراقبة تنوعا من دوران الأوعية الدقيقة. فهو يعتبر مناسبة للمراقبة على المدى الطويل ، وعلى تركيبة مع التدخلات البيولوجية pharmacophysiological أو الجزيئي.

في القياس الصغير تداول المجراة في الهيكل العظمي والعضلات التي البينية الحيوية الميكروسكوب

نقدم التحضير لتصور والتلاعب إشارات الكالسيوم في الأم، سليمة الاوعية الدموية الدقيقة البطانة. أنابيب البطانية المعزولة حديثا من الشرايين المقاومة الماوس توريد الهيكل العظمي والعضلات في الاحتفاظ مورفولوجيا الجسم الحي والإشارات الحيوية داخل وبين الخلايا المجاورة. أنابيب البطانية يمكن إعداد من microvessels من الأنسجة والأعضاء الأخرى.

عزل الاوعية الدموية الدقيقة البطانية أنابيب الشرايين ماوس المقاومة

وكثيرا ما تتعرض الأمعاء الدقيقة للسموم التي يمكن أن تؤثر على تدفق الدم وتؤثر سلبا على امتصاص العناصر الغذائية. باستخدام الشريان المساريقي وmultimyograph ويعزل الوريد، المركبات أو السموم من الفائدة يمكن فرزهم لvasoactivity.

عزل وعن طريق أقسام الأبقار الشريان والوريد المساريقي باعتباره الأحيائي لاختبار لVasoactivity في الأمعاء الدقيقة

نقدم بروتوكول لدراسة التفاعلات البطانية-خلية حوطية الإنسان في الماوس باستخدام الاختلاف من هلام مصفوفة المكونات الأوعية الدموية الفحص.

في دراسة فيفو من تفاعل الانسان غشائي-خلية حوطية باستخدام مصفوفة جل التوصيل الفحص في الماوس

ويرد وصف لإجراء صنع الاستعدادات وجهه من الشريان السباتي الماوس والشريان الأبهر. هذه الاستعدادات، عندما ملطخة إمونوفلورزنتلي مع الأجسام المضادة محددة، تمكننا من دراسة توطين البروتينات وتحديد أنواع الخلايا داخل جدار الأوعية الدموية بأكمله من قبل المجهر متحد البؤر.

في إعداد الوجه من ماوس سفن الدم

تستخدم نظم فيديوميكروسكوبي لدراسة الخصائص الفنية للشرايين الأنسجة الدهنية معزولة في الاستجابة للمحفزات الفسيولوجية والدوائية. يمكن استخدام هذا الأسلوب لدراسة ميكروفاسكولار تعمل في مجالات مختلفة من الأنسجة الدهنية في البشر يعانون من السمنة المفرطة.

تقييم الدالة Microvascular الأنسجة الدهنية البشرية باستخدام فيديوميكروسكوبي

ويصف هذه المخطوطة في المختبر بروتوكولات الفحص المجهري الفيديو لتقييم وظيفة الأوعية الدموية في الشرايين الدماغية مقاومة الفئران. ويصف المخطوط أيضا تقنيات لتقييم كثافة ميكروفيسيل مع فلوريسسينتلي المسمى نضح يكتين والأنسجة باستخدام الليزر دوبلر Flowmetry.

تقييم آليات مراقبة الأوعية الدموية استخدام الفحص المجهري الفيديو الشرايين المقاومة المعزولة من الفئران

ويصف هذه المخطوطة بروتوكولا مباشرة لعزل الشرايين من شبكية الفئران التي يمكن استخدامها في الكهربية، الكالسيوم التصوير والضغط ميوجرافي الدراسات.

عزل الشرايين الشبكية للدراسات فيزيولوجيا الخلية السابقين فيفو

هنا، نقدم بروتوكول او تلطيخ مناعة لمراقبة الخلايا البطانية للأبهر الفأر مباشرة. هذه التقنية مفيدة عند دراسة النمط الظاهري الخلوي والجزيئي للخلايا البطانية في أنماط تدفق مختلفة وفي تطوير تصلب الشرايين.

استخدام تلطيخ الفلورة المناعية للوجه لمراقبة الخلايا البطانية الوعائية مباشرة

والهدف من هذا البروتوكول هو عزل الاوعيه المجهرية من مناطق متعددة من الجهاز العصبي المركزي لفقاريات السسينسيفريك والفقريات.

عزل يمكن الاعتماد عليه من الاوعيه المجهرية للجهاز العصبي المركزي عبر خمس مجموعات فقاري

يتم توضيح التحضير المكثف ل "أنابيب" البطانية الدماغية للفئران السليمة من الشرايين المتنية الدماغية لدراسة تنظيم تدفق الدم الدماغي. علاوة على ذلك ، نوضح نقاط القوة التجريبية لنموذج الدراسة البطانية هذا للتصوير الفلوري وقياس الفيزيولوجيا الكهربية لمسارات الإشارات الخلوية الرئيسية ، بما في ذلك التغيرات في داخل الخلايا [Ca2+] وإمكانات الغشاء.

العزل والتحليل الوظيفي للبطانة الشريانية لحمة دماغ الفأر

استكشف تقنية عزل وقسطرة الأوعية الدموية المقاومة خارج الجسم لدراسة وظائفها الوعائية. تتيح هذه الطريقة تقييم الاستجابات الدوائية والفيزيولوجية بدقة عالية.

و خارج الحي متفرقة التحضير Microvessel الهيكل العظمي للتحقيق في التفاعل الأوعية الدموية

استكشف المزيد من الفيديوهات