التحقيق في الالتهابات المعوية الناجمة عن مفاجآت صيف دبي موديل IBD

وقد سمحت نماذج تجريبية لمرض التهاب الامعاء لنا لدراسة معقدة الاستجابات المناعية الفطرية والتكيفية المرتبطة المرضية. باستخدام سجل النسيجية ، وتحديد حجم السيتوكينات الموالية للالتهابات ونشاط الميلوبيروكسيديز ، يمكن للمرء أن يبدأ في تقييم هذه الاستجابات ينظر في مرض التهاب الامعاء.

الهدف العام من هذا الإجراء هو تقييم الاستجابة المناعية المعوية التي يسببها كبريتات ديكسترون الصوديوم عن طريق تحديد كميات نشاط بيروكسيداز النخاع والسيتوكينات المؤيدة للالتهابات المنتجة استجابة للالتهاب. يحدث التهاب القولون الأول DSS في الفئران من خلال إدخال محلول DSS SALT في مياه الشرب. بعد ذلك ، يتم تقييم شدة مرض التهاب القولون عن طريق التسجيل العياني ويتم إزالة القولون لمزيد من التحليل.

ثم يتم تقسيم القولون المقطوع إلى ثلاث قطع لعلم الأنسجة ، وقياس كمية السيتوكين ، ونشاط NPO. أخيرا ، يتم تجانس أنسجة القولون ويستخدم المادة الطافية لتحديد نشاط MPO. في النهاية ، يمكن تحديد التغييرات في نشاط MPO من خلال بيانات الامتصاص التي تم جمعها باستخدام مقياس الطيف الضوئي.

يمكن أن توفر هذه الطريقة نظرة ثاقبة للمعلومات المزمنة لنماذج مختلفة من مرض التهاب الأمعاء ، مثل التهاب القولون الناجم عن DSS و TNBS. بالإضافة إلى ذلك ، يمكنك استخدام هذه الطريقة في أعضاء أخرى مثل الرئة والكبد قبل البدء في الإجراء. استبدل مياه الشرب في كل قفص فأر بمحلول DSS لإحداث الالتهاب.

أعط الفئران التحكم في الأوتوكلاف مياه الشرب بدون DSS. ثم في يوم التجربة ، قم بتشريح القولون كما هو موضح سابقا في مقالة JoVE بقلم ويثام ويليامز وويليامز. اضغط على البراز بحذر خارج القولون بالكامل باستخدام زوج من الملقط المثني ، واجمعه في ورق وزن عن طريق شطف المنديل باستخدام PBS معقم.

قم بتقييم البراز باستخدام زوج من الملقط للضغط على البراز لتحديد تناسقه لتحديد درجة الدم في البراز. لاحظ لون البراز وتحقق من صحة التقييم باستخدام اختبار الدموي ، والذي يتضمن تلطيخ البراز على ورق دموي ، وإضافة مطور ، ثم تدوين اللون الأزرق يشير إلى اختبار براز إيجابي للدم. ثم استخدم هذا الجدول لتحديد قيمة لكل شرط من الشروط.

بعد ذلك ، مع الحفاظ على الاتجاه القريب إلى البعيد للقولون ، قم بتقطيع القولون إلى ثلاثة أقسام متساوية. ثم خذ شظايا عينة من الأقسام القريبة والوسطى من القولون ، وضع العينات في أنابيب eph فردية سعة 1.5 ملليلتر. لتقييم الضرر النسيجي لشدة التهاب القولون ، استخدم الجزء الأقصى من الأنسجة في القولون وقم بقص جزء صغير بطول نصف إلى سنتيمتر واحد.

ضع الجزء في كاسيت مناديل واغمر الكاسيت في محلول فورمالين مخزن 10٪. ثم بعد تحضير المقاطع العرضية المدمجة في البارافين لشظايا الأنسجة ، قم بتلطيخ الأقسام باستخدام الهيماتين eoin للتسجيل من قبل مراقب أعمى. أخيرا ، قم بتجميد العينات من الأقسام القريبة والوسطى في النيتروجين السائل وتخزينها حتى استخدامها عند 70 درجة مئوية تحت الصفر.

بعد إزالة عينات القولون من التخزين تحت الصفر 70 درجة مئوية ، ضعها على الجليد. ثم باستخدام ملقط مثني لإزالة أي براز أو دهون مرئية ، ووضعها في أنابيب فردية ملليلترة مناسبة للاستخدام في الخالط. ثم تحديد وتسجيل وزن كل عينة.

بعد ذلك ، أضف حبات الخالط إلى كل أنبوب عينة ، ثم أضف الكمية المناسبة من مخزن علامة التبويب H إلى الأنبوب وفقا لوزن الأنسجة كما هو محدد للتو ، وقم بفصل الشظايا باستخدام مجانس الأنسجة لمدة أربع دقائق عند 30 هرتز. أخيرا ، قم بالطرد المركزي لمحلول الخلية لمدة ست دقائق عند 13 ، 400 مرة درجة مئوية وأربع درجات مئوية. اجمع المادة الطافية في أنبوب جديد ، ثم تأكد من الحفاظ على حبة التجانس وتخلص من الحبيبات الناتجة.

يمكن بعد ذلك تخزين المادة الطافية عند درجة حرارة 70 تحت الصفر حتى الاستخدام. ابدأ هذه الخطوة بإضافة سبعة ميكرولترات من الأنسجة المعدة مسبقا المتجانسة في ثلاث نسخ في صفيحة بئر 96. ثم أضف 50 ميكرولترا من بيروكسيد الهيدروجين المخفف إلى يود OD Dion المحضر حديثا.

باستخدام ماصة متعددة القنوات، أضف 200 ميكرولتر من خليط بيروكسيد الهيدروجين إلى كل بئر. الآن ، قم بقياس امتصاص 550 نانومتر باستخدام مقياس الطيف الضوئي ، مع أخذ ثلاث قراءات على فترات 32. ثم باستخدام بيانات الامتصاص ووزن الأنسجة وحجم المخزن المؤقت ، احسب نشاط NPO في المتجانسات كما هو موضح في حساب العينة هذا.

خلال مدة علاج DSS ، يمكن استخدام مؤشر نشاط المرض لتقييم وتقييم التطور السريري للمرض. تظهر التي عولجت بمتلازمة متلازمة الترصد الديموغرافي انخفاضا كبيرا في الوزن مقارنة بأوزانها الأولية والبرازات الرخوة ونزيف البراز. كلما زادت أهمية الأنظمة العيانية ، ارتفع مؤشر نشاط المرض.

عند التضحية وفحص القولون للفئران التي تم إعطاؤها 5٪ DSS في مياه الشرب لمدة خمسة أيام ، تم تحديد شدة التهاب القولون بناء على التسجيل العياني لتقصير طول القولون ، ونزيف القولون ، ونزيف البراز ، وتخفيف قوام البراز ، وعلامات نزيف المستقيم لهذه التجربة التمثيلية لتكون أسوأ بحوالي خمس مرات من الضوابط المعالجة بالماء فقط كما هو موضح في هذه المقاطع العرضية للبيانات المعالجة من DSS عينات أنسجة القولون ، كما هو الحال مع H و E ، لها درجات نسيجية أعلى من الضوابط المعالجة بالماء. هنا ، يمكن ملاحظة البنية الطبيعية ونقص التسلل الخلوي في المنطقة المشار إليها بعلامة النجمة في هذا المقطع العرضي الملون h و e الذي تم جمعه من تحكم يتلقى الماء فقط. قارن الآن هذا التلوين h و e لعينة من معالج DSS بالشكل السابق.

القولون من هذا المزيد من الضرر النسيجي كما يتضح من المزيد من التسلل الخلوي كما يتضح من علامة الجنيه والمزيد من استنفاد خلايا الكأس وزيادة التشويه. الضرر الذي لحق ببنية سرداب K كما هو موضح في علامة النجمة. لتوصيف مدى شدة المرض في الفئران المعالجة ب DSS ، يمكن تقييم نشاط NPO ، يمكن تقييم علامة بديلة للالتهاب من عينات أنسجة القولون المتجانسة.

كما هو متوقع ، تتمتع القولون المعالجة ب DSS بنشاط NPO أعلى من الضوابط. بالإضافة إلى ذلك ، ترتبط شدة التهاب القولون الناجم عن DSS بزيادة مستويات السيتوكينات المؤيدة للالتهابات ، مثل IL one beta IL six و TNF alpha. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر أن نشاط MPO يمكن أن ينخفض بمرور الوقت.

لذلك ، يجب أن يكون اختبار MPO أحد المقايسات الأولى التي يتم إجراؤها عند تحديد شدة التهاب الأمعاء.