Name: المستحث الطفيلي قيادة وراثيا القلب المناعة الذاتية ومرض شاغاس في نموذج الدجاج (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: اكتشف دمج kDNA من Trypanosoma cruzi في جينوم الدجاج وآثاره على صحة القلب. يوفر هذا النموذج رؤى جديدة حول آليات مرض شاغاس الوراثية والمناعية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

نحن مدينون لنانسي ر. شتورم، قسم علم المناعة، علم الأحياء الدقيقة والبيولوجيا الجزيئية، وديفيد جيفن في كلية الطب، جامعة كاليفورنيا في لوس انجليس، لقراءة نقدية للمخطوطة. وأيد المجلس الوطني للبحوث، CNPq، ومؤسسة البحوث للتنمية، FAPDF، والبرازيل، والدراسة. نشكر المساعدات الفنية من اليساندرو O. سوزا، ماريا Guimaro جيم، كورديرو سيرو، آنا دي روزا كاسيا، ألفيس Roseneide، واندرادي رافائيل، من جامعة برازيليا، البرازيل.

<ol><li>Teixeira, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+chagas%27+disease%3A+parasite+persistence+and+autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22CMR%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of chagas' disease: parasite persistence and autoimmunity.</a> CMR. 24, 592-630 (2011).</li>
<li>Teixeira, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chagas+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Postg.+Med.+J%22%5BJournal%5D)">Chagas disease.</a> Postg. Med. J. 82, 788-798 (2006).</li>
<li>Teixeira, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trypanosoma+cruzi+in+the+chicken+model%3A+Chagas-like+heart+disease+in+the+absence+of+parasitism%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Negl.+Trop.+Dis%22%5BJournal%5D)">Trypanosoma cruzi in the chicken model: Chagas-like heart disease in the absence of parasitism.</a> PLoS Negl. Trop. Dis. 5, e1000(2011).</li>
<li>Hecht, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inheritance+of+DNA+transferred+from+American+trypanosomes+to+human+hosts%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Inheritance of DNA transferred from American trypanosomes to human hosts.</a> PLoS One. 5, e9181(2010).</li>
<li>Xing, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+the+ERK+MAPK+in+the+regulation+of+proinflammatory+and+apoptotic+responses+in+chicken+macrophages+infected+with+H9N2+avian+influenza+virus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Virol%22%5BJournal%5D)">Roles of the ERK MAPK in the regulation of proinflammatory and apoptotic responses in chicken macrophages infected with H9N2 avian influenza virus.</a> J. Gen. Virol. 91, 343-351 (2010).</li>
<li>Kim, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIK+and+IKKbeta+interdependence+in+NF-kappaB+signalling--flux+analysis+of+regulation+through+metabolites%5BTitle%5D)+AND+%22Biosystems%22%5BJournal%5D)">NIK and IKKbeta interdependence in NF-kappaB signalling--flux analysis of regulation through metabolites.</a> Biosystems. 99, 140-149 (2010).</li>
<li>Karakhanova, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ERK%2Fp38+MAP-kinases+and+PI3K+are+involved+in+the+differential+regulation+of+B7-H1+expression+in+DC+subsets%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">ERK/p38 MAP-kinases and PI3K are involved in the differential regulation of B7-H1 expression in DC subsets.</a> Eur. J. Immunol. 40, 254-266 (2010).</li>
<li>Finsterer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+heart+in+human+dystrophinopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiology%22%5BJournal%5D)">The heart in human dystrophinopathies.</a> Cardiology. 99, 1-19 (2003).</li>
<li>Nitz, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heritable+integration+of+kDNA+minicircle+sequences+from+Trypanosoma+cruzi+into+the+avian+genome%3A+insights+into+human+Chagas+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Heritable integration of kDNA minicircle sequences from Trypanosoma cruzi into the avian genome: insights into human Chagas disease.</a> Cell. 118, 175-186 (2004).</li>
<li>Simpson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetoplast+DNA+in+trypanosomid+flagellates%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+Rev.+Cytol%22%5BJournal%5D)">Kinetoplast DNA in trypanosomid flagellates.</a> Int. Rev. Cytol. 99, 1-19 (1986).</li>
<li>Bonney, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat-killed+Trypanosoma+cruzi+induces+acute+cardiac+damage+and+polyantigenic+autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Heat-killed Trypanosoma cruzi induces acute cardiac damage and polyantigenic autoimmunity.</a> PLoS One. 6, e14571(2011).</li>
<li>Moser, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+Trypanosoma+cruzi+by+DNA+amplification+using+the+polymerase+chain+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Detection of Trypanosoma cruzi by DNA amplification using the polymerase chain reaction.</a> J. Clin. Microbiol. 27, 1477-1482 (1989).</li>
<li>Sturm, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitive+detection+and+schizodeme+classification+of+Trypanosoma+cruzi+cells+by+amplification+of+kinetoplast+minicircle+DNA+sequences%3A+use+in+diagnosis+of+Chagas%27+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biochem.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Sensitive detection and schizodeme classification of Trypanosoma cruzi cells by amplification of kinetoplast minicircle DNA sequences: use in diagnosis of Chagas' disease.</a> Mol. Biochem. Parasitol. 33, 205-214 (1989).</li>
<li>Teixeira, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+and+pathology+in+chagas+disease--a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Mem.+Inst.+Oswaldo+Cruz%22%5BJournal%5D)">Evolution and pathology in chagas disease--a review.</a> Mem. Inst. Oswaldo Cruz. 101, 463-491 (2006).</li>
<li>Yurchenko, V. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+of+Leishmania+minicircle+kinetoplast+DNA+classes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Structure of Leishmania minicircle kinetoplast DNA classes.</a> J. Clin. Microbiol. 37, 1656-1657 (1999).</li>
<li>Simpson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genomic+organization+of+guide+RNA+genes+in+kinetoplastid+protozoa%3A+several+conundrums+and+their+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biochem.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">The genomic organization of guide RNA genes in kinetoplastid protozoa: several conundrums and their solutions.</a> Mol. Biochem. Parasitol. 86, 133-141 (1997).</li>
<li>Thomas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+non-universal+transcription+factor%3F+The+Leishmania+tarentolae+TATA+box-binding+protein+LtTBP+associates+with+a+subset+of+promoters%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">A non-universal transcription factor? The Leishmania tarentolae TATA box-binding protein LtTBP associates with a subset of promoters.</a> Int J. Parasitol. 36, 1217-1226 (2006).</li>
</ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

وعلى النقيض من الثدييات عرضة لمدى الحياة ت. التهابات الكروزية، دجاجة وهي لصهر إلى T. الكروزية عدوى. والميزة الرئيسية لنظام الدجاج النموذج هو القضاء على هذا المرض في وقت مبكر في تطوير الجهاز المناعي الجنينية. وبالتالي، تم دمج الحمض النووي طفيلي الوحيدة المتبقية داخل الجسم الدجاج في مواضع عدة. استخدم كمية الأمثل للT. ضراوة الكروزية trypomastigotes لتطعيم البيضة الخصبة هو خطوة حاسمة نحو الحصول على التكامل بين minicircles kDNA في الدجاج جينوم الجنين. معدل فقس بيض الدجاج الحي من تلقيح مع 100 trypomastigotes هو أربعة أضعاف أعلى من تلك التي تم الحصول عليها مع 500 الطفيليات. ينبغي الحرص على تطعيم تعليق طفيليات في 10 ميكرولتر من مستنبت داخل البويضة غرفة الهواء. وينبغي أن يكون هناك أي تسرب من بياض البيض. في الظروف المثالية، وإصابة الخلايا الطفيلية يأخذ واي مكانرقيق بعد بضع ساعات من الضرب وحضانة طفيلي داخل الخلايا المضيفة العائدات لمدة أسبوع، بعد ذلك يتم التخلص من العدوى من المناعة الفطرية. التكامل kDNA يتطلب عدوى المعيشة، وتلقيح minicircles عارية في وقت مبكر بيض الدجاج الجنين لا يؤدي إلى التكامل. وينبغي أن يضم الأجنة kDNA إيجابية والضوابط تحت ظروف خاضعة للرقابة على 37،5 درجة مئوية والرطوبة 65٪. يتم الاحتفاظ في أقفاص الدجاج لمدة أسبوعين عند 33 درجة مئوية درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك يتم الاحتفاظ بها في أقفاص الدجاج على رفوف معلقة فصل بمقدار 1.5 متر في عرض الممرات غرفة في 22 درجة مئوية مع الهواء التي تمت تصفيتها وتحت ضغط إيجابي استنفاد مستمر لتأمين ظروف رعاية الحيوان. ويتم تغذية الكبار الدجاج طعام والشراب شرب المياه الجارية لتحقيق النمو والنضج الكامل، وضع البيض في خمسة أشهر من العمر. صيانة الإجراءات الصحية ضرورية لاستنساخ نتائج عند العمل مع ت. الكروزية تلقيحفي بيض الدجاج الخصبة. في الدجاج نظام النموذج T. يتم القضاء على العدوى الكروزية بعد تطوير نظام المناعة في الفترة المبكرة من نمو الجنين. وبالإضافة إلى ذلك إلى كونها خالية من العدوى، والدجاج الذي يفقس من T. الكروزية تلقيح البيض، في عدم وجود أجسام مضادة محددة، ومتسامحون للمستضدات الطفيلي. ويعتبر رفض خلايا القلب الهدف بواسطة الخلايا اللمفية السامة للخلايا (الحد الأدنى من وحدة الرفض، الشكل 3) في دجاجة kDNA-تحور تظهر التعديلات التركيب الوراثي وانهيار المراقبة المناعية 3. وتعديل genotypically الخلايا التائية رفض تقديم المتسارع للأنسجة النفس في الجسم. الموقع آفة الرئيسي هو القلب، والذي هو السمة المميزة لمرض شاغاس. ويعتبر الممر من الفسيولوجية (المراقبة) لدولة فيزيوباثي في الدجاج kDNA-تحور تظهر clonally انتشار الخلايا اللمفية السامة للخلايا 3. تينظام له نموذج transkingdom يظهر الطفيلي التي يسببها، وراثيا يحركها أمراض المناعة الذاتية (الشكل 6)، الناجمة عن التعديلات الوراثية التي ت. الكروزية kDNA minicircle التكامل. لا ينظر إلى هذه التعديلات في الكتاكيت فقس البيض من رطل تلقيح. هذه الظاهرة تشير إلى أن علاجا تجريبيا من اعتلال عضلة القلب والتهابات المناعة الذاتية في kDNA-تحور الدجاج قد تتطلب قمع المخدرات من السلف نخاع العظم من النمط الظاهري تي خلية محددة التسلل الى عضلة القلب، وزرع نخاع العظم متوافق نسيجيا صحي لمنع رفض الأنسجة الذاتي.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> طق بوليميريز الحمض النووي المؤتلف </td><td> إينفيتروجن </td><td> 11615-010 </td><td></td></tr><tr><td> البوليميراز البلاتين طق الحمض النووي </td><td> إينفيتروجن </td><td> 10966-030 </td><td></td></tr><tr><td> عشوائية وصفها DNA نظام الاشعال </td><td> إينفيتروجن </td><td> 18187-013 </td><td></td></tr><tr><td> الايكولوجية RI </td><td> إينفيتروجن </td><td> 15202-021 </td><td></td></tr><tr><td> أنا مبو </td><td> إينفيتروجن </td><td> 15248-016 </td><td></td></tr><tr><td> dNTP مجموعة، حلول 100mM </td><tد&gt; شركة جنرال الكتريك للرعاية الصحية </td><td> 28-4065-51 </td><td></td></tr><tr><td> أمرشام Hybond - N + - ن قطة. </td><td> جنرال إلكتريك للرعاية الصحية </td><td> RPN303B </td><td></td></tr><tr><td> PlasmidPrep البسيطة سبين عدة </td><td> جنرال إلكتريك للرعاية الصحية </td><td> 28-9042-70 </td><td></td></tr><tr><td> NSI أنا </td><td> SIGMA الدريخ </td><td> R5884 1KU </td><td></td></tr><tr><td> الحمض النووي، والسمك ملح الصوديوم الحيوانات المنوية </td><td> AMRESCO </td><td> 0644-10G </td><td></td></tr><tr><td> الماوس المضادة للدجاج بو-1B </td><td> SouthernBiotech </td><td> 8370-02 </td><td></td></tr><tr><td> الماوس المضادة للدجاج CD45 </td><td> SouthernBiotech </td><td> 8270-08 </td><td></td></tr><tr><td>الماوس المضادة للدجاج TCRγδ </td><td> SouthernBiotech </td><td> 8230-08 </td><td></td></tr><tr><td> الماوس المضادة للدجاج CD8α </td><td> SouthernBiotech </td><td> 9220-02 </td><td></td></tr><tr><td> الماوس المضادة للدجاج الوحيدات / بلعم </td><td> SouthernBiotech </td><td> 8420-02 </td><td></td></tr><tr><td> MyCycle Termocycler </td><td> الحيوي راد مختبرات </td><td> 580BR 5501 </td><td></td></tr></tbody></table>

المستحث الطفيلي قيادة وراثيا القلب المناعة الذاتية ومرض شاغاس في نموذج الدجاج

Parasite Induced Genetically Driven Autoimmune Chagas Heart Disease in the Chicken Model

والكروزية الالتهابات الحادة المثقبية المكتسبة في سن الرضاعة والطفولة تبدو أعراض، ولكن ما يقرب من ثلث الحالات المصابة بشكل مزمن تظهر داء شاغاس تصل إلى ثلاثة عقود أو في وقت لاحق. المناعة الذاتية والمثابرة طفيلي تتنافس النظريات لتفسير الآلية المرضية لداء شاغاس 1 و 2. إلى أدوار منفصلة لعبت من قبل استمرار طفيلي والمناعة الذاتية في مرض شاغاس نحن تطعيم في T. الكروزية في غرفة الهواء من البويضات المخصبة. النظام المناعي الدجاج ناضج هو حاجز ضيق البيولوجية ضد ت. يتم القضاء على الكروزية والعدوى وعلى تطوير نظام المناعة في نهاية الأسبوع الأول من نمو 3. الكتاكيت هي خالية من طفيلي عند الفقس، ولكنها تحتفظ دمجها طفيلي الميتوكوندريا kinetoplast الحمض النووي (kDNA) minicircle ضمن الجينوم الخاصة بهم التي يتم نقلها إلى ذريتها. تم الحصول على وثائق من التكامل kDNA minicircle في جينوم الدجاج من قبل targeted رئيس الذيل PCR، التهجين الجنوبية، والاستنساخ، والتسلسل 3 و 4. وkDNA minicircle التكامل تمزق الإطارات القراءة مفتوحة للنسخ والعوامل الجهاز المناعي، والفوسفاتيز (GTPase)، محلقة الأدينيلات وphosphorylases (بي كي سي، NF-B كابا المنشط، PI-3K) المرتبطة فسيولوجيا الخلية، والنمو، والتمايز 3، 5 - 7 وظائف الجينات الأخرى. ويعتبر التهاب عضلة القلب شديدة بسبب الرفض من ألياف قلب الهدف بواسطة الخلايا اللمفية المستجيبات السامة للخلايا في الدجاج kDNA تحور، مبديا التهابات عضلة القلب شبيهة بتلك التي شوهدت في مرض شاغاس الإنسان. وجدير بالذكر أن فشل القلب والهيكل العظمي وضعف العضلات موجودة في الدجاج الكبار مع تمزق kDNA من الجين dystrophin في كروموسوم 1 8. وترتبط التعديلات genotipic مماثلة مع تدمير الأنسجة التي تقوم بها المستجيبات CD45 +، + CD8γδ، CD8α الخلايا اللمفية. وبالتالي يمكن لهذه العدوى الأوالي حمل أمراض المناعة الذاتية يحركها وراثيا.

وتلقيح<em&gt; المثقبية الكروزية</em&gt; في البيض الخصبة قبل الحضانة يجعل kDNA طفيلي minicircle التكامل في جينوم خلايا الجنين. تهجين يكشف عن نقل عمودي من الطفرات إلى ذرية. وkDNA يدمج الترميز مناطق عدة في الصبغيات (الكروموسومات) والدجاجة تموت مع مرض القلب الذاتية للالتهابات.

تبدو حالات العدوى الحادة بطفيل Trypanosoma cruzi المكتسبة في مرحلتي الرضاعة والطفولة عديمة الأعراض، ولكن نحو ثلث الحالات المصابة بالعدوى المزمنة...

يُعد مرض تشا (Cha's disease) الحالة السريرية التي تتبع الإصابات المزمنة بـ ate prot و tno mausi. يهاجم المرض قلب الأشخاص المصابين بشكل مزمن بعد عدة عقود من اكتساب العدوى. ويظهر نظام نموذج عبر الممالك أن بيض الدجاج يسمح بإصابات Taz macro cruise.خلال الأسبوع الأول من نمو الجنين، تُظهر التجارب أن الدجاج الخالي من العدوى الذي يحتفظ بالطفيلي KA في جينوماته يموت بسبب مرض شاغاس القلبي، بينما يضمن السكن الممتاز وإمدادات الغذاء والماء رفاهية الحيوان. تم الحصول على كتلة ثلاثية الرحلة، وأشكال سباحة جيدة من المزارع النسيجية. يتم إجراء إضاءة نافذة لـ tio والبيض لإظهار تحكم الفقاعة الخاص بها.لا تتلقى البيضات أي تلقيح متوازي. يتم تلقيح البيضات في مجموعة الضبط الصورية بـ 10 µL من وسط الزرع. يتم سد الفتحة باستخدام شريط لاصق 100 viral FL mania.يعتبر البرازيليون محترفين في هذا المجال. يتم تلقيح الغرفة الهوائية لبيضة دجاج مخصبة بـ 100 فيروس، ويتم حبس macro triple master goats في 10 µL من وسط الكالسيوم لتلقيح الغرفة الهوائية لبيضة دجاج مخصبة. يتم تحضين البيض عند 37 °C ورطوبة 65% لمدة تتراوح من يوم إلى يومين مع تدوير لطيف كل 30 دقيقة، وتفقس الكتاكيت بشكل متساوٍ من البيض الملقح بـ renoso macro ومن ضوابط mark.تنمو الأسماك حتى تصل إلى مرحلة البلوغ. يتم سحب عينات الدم من أوردة الزعانف. يُنقل الدم إلى أنابيب مخروطية سعة 15 Ml.يتم فصل الخلايا أحادية النواة عن طريق الطرد المركزي باستخدام تدرج FICO، ثم يتم غسل طبقة الخلايا البيضاء والتخلص من سائل الفصل. يتم استخلاص الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين الجينومي من الخلايا أحادية النواة في الدم، وتوضع في أنابيب مخروطية سعة 1.5 ml وفقاً لتصميم تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). يُجرى تفاعل PCR لتضخيم chroy nuclear G-N-A-N-G-N-A و pls GNA kg NA. وباستخدام مجموعات بادئات محددة، توضع أنابيب التفاعل في الجهاز الدوراني الحراري (thermocycler) ثم يتم تشغيله.أخرج الأنابيب من جهاز التدوير الحراري (Thermocycler). قم بتحليل نواتج تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). يتم فصل نواتج الـ PCR بواسطة الرحلان الكهربائي لهلام الأغاروز (Agarrose gel electrophoresis).يتم نقل حزم GNA في الهلام إلى غشاء نايلون مشحون إيجابياً. وتجرى عملية التهجين باستخدام مجسات محددة معلمة إشعاعياً للفصل بين الأدوار التي يؤديها كل من استمرار الطفيلي والاستجابة المناعية بشكل مستقل. وفي دراسة إمراضية مرض شاغاس، استخدمنا نموذج دجاج مقاوم لعدوى TNO cruise إلا خلال مرحلة النمو الجنيني المبكرة التي تسبق تطور الجهاز المناعي؛ حيث تكون الكتاكيت التي فقست من بيوض محقونة بـ TNO cruise خالية من العدوى، ولكن يتم الاحتفاظ بـ A KG A الميتوكوندريا الخاص بالطفيلي في الجسم.تظهر نطاقات kg فقط في الكتاكيت التي فقست من بيض ملقح بـ tzo macro، بينما لا يتواجد أي DNA في جينوم الدجاج. أما الكتاكيت التي فقست من بيض ملقح بـ pro master goats of Leia Brazilian فلا تحتفظ بتسلسلات mitochondrial in circle في جينوماتها. المسار واحد فارغ، المسار اثنان GNA ضابط، المساران ثلاثة وأربعة mock GS، المسارات من خمسة إلى 14 Gs من كتاكيت فقست من بيض مصاب بـ Las mania Brazilians.المسار 15 يوضح نطاق أمبليكون طوله 750 base pairs تم الحصول عليه باستخدام مجموعات بادئات KDNA النوعية LB three و LB five لـ las mania Brazil. يصور مسح رقعة الشطرنج لـ L-P-C-R-A بادئات gallus guns التي تم استخدامها بعد ثلاث دورات من التضخيم مع تزايد درجة الحرارة في التعشيش المتسلسل. تم إجراء PCR باستخدام مجموعة KDNA PRI مختلفة.تؤدي دورة لويس من الشروط الصارمة (Louis Stringency cycle) إلى إنشاء مواقع للبادئة والركوع ودورة من الشروط الصارمة العالية. وهو ما يعزز من خصوصية نواتج التضخيم. وقد تم استنساخ وتسلسل نواتج PCR الناتجة عن تضخيم أقل والتي تهجنت مع مسبار KA تجارياً.يوضح التسلسل الـ kg NA في الدائرة الزرقاء، ووصلة إعادة التركيب بالتماثل الدقيق المتوسط باللون الأصفر، والـ gallo ga GNA باللون الأخضر. تم تحديد موقع دمج kg NA في جينوم الدجاج بواسطة تقنية PCR المعتمدة على بادئ مستهدف (TP-PCR). وقد أصيبت الدجاجات البالغة الطافرة (Cajun) بمرض شاغاس القلبي.نمت مجموعة الضبط بشكل أكبر وبحياة صحية. أظهرت الدجاجات التي تعاني من طفرة KDNA زيادة في ظلال القلب في صور الأشعة السينية. وأظهر التشريح أن الدجاج في مجموعة الضبط لديه حجم قلب صغير.يُظهر دجاج الـ Cajun، وهو سلالة طافرة من الدجاج، استسقاءً تامورياً وتسمماً مائياً وتضخماً في القلب. ويشبه تضخم القلب هذا ذلك الموجود في مرض شاغاس القلبي. أما قلب الدجاج الذي يتم التحكم به بواسطة Moog فيُظهر نسيجاً طبيعياً.تُظهر الدجاجة الطافرة kg نفقاً في عضلة القلب نتج عن الخلايا اللمفاوية السامة للخلايا التي تقع ضمن ألياف القلب. ويتم الكشف عن تسلسلات الدوائر aian التي تندمج في المناطق المشفرة في عدة كروموسومات عن طريق تقنية PCR المتداخلة المعدلة التي تدمج بادئات kg NA مع مجموعات بادئات محددة لـ GNA المضيف. وتموت الدجاجات الطافرة GNA بسبب فشل القلب وتظهر عليها علامات تضخم القلب.تظهر النتائج المجهرية المرضية وجود التهاب في عضلة القلب يشبه التهاب عضلة القلب الناتج عن داء شاغاس، مما يؤدي إلى تضخم القلب. ويعد مرض الدجاج المتحور في kg NA مرضاً مدفوعاً وراثياً. وهذه هي المرة الأولى التي يتم فيها إعادة إنتاج المظاهر السريرية والمرضية لداء شاغاس في نظام نموذجي نظيف وعابر للممالك.شكرًا لك.

parasite-induced-genetically-driven-autoimmune-chagas-heart-disease

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

علم المناعة والعدوى

يوضح هذا الفيديو إجراء حقن الخلايا السرطانية عن طريق الوريد في الأوعية الدموية لغشاء المشيمة للدجاج لتوليد نموذج ورم خبيث لسرطان الطب التكميلي. تشكل الخلايا المحقونة في النهاية مستعمرات خلايا سرطانية مفردة متناثرة ، مما يسمح بدراسة غزو السرطان ورم خبيث.

الحقن الوريدي للخلايا السرطانية في الأوعية الدموية الغشائية المشيمية للدجاج: إجراء لإنشاء نموذج سرطان الغشاء المشيمي لدراسة غزو السرطان والورم الخبيث

في هذا البروتوكول، المسمى فلوريسسينتلي الكروزية ت تم حقن اليرقات الزرد شفافة، وحركية الطفيلي وقد لوحظ في فيفو استخدام الورقة الضوء الفلورية مجهرية.

إنشاء الزرد اليرقات "نموذج الحيوان" للتحقيق مثقبيه الكروزية حركية في فيفو

مثقبيه الكروزية وكيلاً لمرض شاغاس تنتج الالتهابات أعراض طويلة الأمد التي تتحول فجأة إلى الأمراض سريرياً المعترف بها. بروتوكول البحث التالية توضح دراسة المدى القصير وبائية القائم على الأسرة لكشف الكروزية ت. العدوى تنتقل جنسياً من الأصل إلى النسل.

الاتصال الجنسي من المثقبيات الأمريكية من الذكور والإناث إلى الأصحاب ساذج

سرطان الخلايا الكلوية النقيلي ة الخلايا هو مرض دون نموذج الحيوان شاملة للتحقيق الشامل قبل السريرية. يوضح هذا البروتوكول نموذجين جديدين للحيوانات لهذا المرض: نموذج الماوس المزروع تقويمًا للموضع ونموذج غشاء الدجاج chorioallantoic ، وكلاهما يوضح انبثاث الرئة يشبه الحالات السريرية.

مقارنة النقيلي واضحة خلية الخلايا الكلوية نموذج سرطان الخلايا المنشأة في الكلى الماوس وعلى غشاء Chorioallantoic الدجاج

هنا ، قدمنا طريقة لتحقيق الترانفيس المستقر لطفيليات الأيفريا الدجاج من قبل النيوليوبوكتينغ سبوروزويبس أو الجيل الثاني merozoites. ويمكن استخدام الطفيليات الأيميرية المعدلة وراثياً التي تعبر عن الجينات المغايرة للجينات المغايرة كوسائل لإيصال اللقاح.

النوكليوفوكساتيون وفي فيفو نشر طفيليات الايميريا الدجاج

نقدم نموذج غشاء chorioallantoic الدجاج كبديل، قابل للزرع، في نموذج الجسم الحي لتطعيم خطوط خلايا سرطان النساء والمسالك البولية والأورام المشتقة من المريض.

استخدام غشاء Chorioallantoic الدجاج في نموذج Vivo لدراسة أمراض النساء وسرطان المسالك البولية

تستخدم أجنة الدجاج، كنموذج نمو كلاسيكي، في مختبرنا لتقييم السموم القلبية التنموية بعد التعرض لمختلف الملوثات البيئية. ويرد في هذه المخطوطة وصف لأساليب التعرض وأساليب التقييم المورفولوجية/الوظيفية المقررة.

استخدام جنين الدجاج كأداة قوية في تقييم السموم القلبية التنموية

نحن نصف مقايسة لونية عالية الإنتاجية تقيس نشاط β-galactosidase في ثلاث مراحل دورة حياة من Trypanosoma cruzi ، العامل المسبب لمرض شاغاس. يمكن استخدام هذا الفحص لتحديد مركبات المثقبيات بطريقة سهلة وسريعة وقابلة للتكرار.

في المختبر فحص المخدرات ضد جميع مراحل دورة حياة المثقبيات الكروزية باستخدام الطفيليات التي تعبر عن β-galactosidase

يصف البروتوكول المقدم هنا الخطوات التفصيلية لإجراء دراسات فعالية الدواء في نموذج التوهج الحيوي لعدوى المثقبية الكروزية ، مع التركيز على الحصول على البيانات وتحليلها وتفسيرها. كما يتم توفير إجراءات استكشاف الأخطاء وإصلاحها ومراقبة الجودة لتقليل المشكلات الفنية.

إزالة الغموض عن تصوير التلألؤ الحيوي في الجسم الحي لنموذج فأر مرض شاغاس لدراسات فعالية الأدوية

هذا الفيديو يبين كيف للحث على التهاب النخامية في الفئران SJL الذاتية وكيفية تقييم شدة من خلال التشريح.

تحريض التهاب النخامية الذاتية التجريبية في الفئران SJL

اكتشف دمج kDNA من Trypanosoma cruzi في جينوم الدجاج وآثاره على صحة القلب. يوفر هذا النموذج رؤى جديدة حول آليات مرض شاغاس الوراثية والمناعية.

المستحث الطفيلي قيادة وراثيا القلب المناعة الذاتية ومرض شاغاس في نموذج الدجاج

استكشف المزيد من الفيديوهات