قياس ضغط البطين الأيسر في وقت متأخر من الفئران الجنينية وحديثي الولادة

الهدف العام من هذا الإجراء هو قياس ضغط البطين الأيسر (LV) في الفئران في المراحل الجنينية المتأخرة وفي مرحلة حديثي الولادة. أولاً، يتم تجهيز المعدات، حيث يجب محاذاة إبرة متصلة بمحول ضغط مع مسبار الموجات فوق الصوتية.

بعد ذلك، يتم تجهيز الفأر وتصوير البطين الأيسر (LV) باستخدام الموجات فوق الصوتية. ثم يتم إدخال الإبرة في تجويف البطين الأيسر (LV) وتسجيل قياسات الضغط النابض. وفي النهاية، تظهر النتائج ضغوط الانقباض في أجنة الفئران في المراحل المتأخرة وفي المواليد الجدد في المراحل المبكرة باستخدام عملية القسطرة المملوءة بسائل والموجهة بالموجات فوق الصوتية.

تتمثل الميزة الرئيسية لهذه التقنية مقارنة بالطرق الحالية، مثل نظام السيرفو (servo) أو القثطرات الصلبة أو الطرق التي تفتقر إلى قياسات الضغط، في إمكانية قياس الضغط في أجنة الفئران في المراحل المتأخرة وفي الفئران حديثة الولادة بطريقة قوية وقابلة للتكرار. وبشكل عام، سيواجه الأشخاص الجدد في هذه التقنية بعض الصعوبات نظراً لصعوبة الحفاظ على توجيه الجنين داخل الكيس الجنيني لأن الجنين يميل إلى الدوران. وعند استخدام مسبار الموجات فوق الصوتية، يتم اختيار مسبار وملؤه بالماء المقطر بناءً على مرحلة نمو الفأر المراد دراسته.

ضع المسبار في الحامل القابل للتعديل الخاص بنظام الموجات فوق الصوتية. اضبط الحامل بحيث يوفر رؤية للمحور الطولي للبطين الأيسر (LV) لفأر مثبت على المنصة، مع توجيه قمة البطين الأيسر (LV apex) نحو ذراع الحقن. يتكون نظام الضغط من مضخم جسري لمحول ضغط مملوء بسائل، ونظام الحصول على البيانات، ومخطط معملي (lab chart).

تُستخدم حزمة برمجيات، ومحقنة سعة 20 milliliter مملوءة بمحلول ملحي بهيبارين بتركيز 10% لشطف الأنابيب. تأكد من عدم انحباس فقاعات الهواء داخل الأنابيب أو فوق المحول. يتم توصيل الأنابيب بالمحول عن طريق صمامات إيقاف ثلاثية الاتجاهات، وأقفال لور (lure locks)، ووصلات خراطيم مسننة.

قم بمعايرة نظام محول ضغط الضغط باستخدام مانومتر، ثم قم بتركيب الأنابيب الإبرية والغلاف في ذراع الحقن. استبدل المانومتر بغلاف لتثبيت الأنابيب بذراع الحقن. هذا الغلاف هو ببساطة جسم سرنجة سعة 3 مل معدلة.

ثبّت محول ضغط القياس في حلقة. قف عند الارتفاع التقريبي لمنصة التصوير لتجنب حدوث انسداد. قم بتوصيل أكبر مقاس ممكن من الإبر بأنبوب الإبرة، ثم احقن المزيد من المحلول الملحي المضاف إليه الهيبارين حتى تظهر بضع قطرات.

أخرج الإبرة مرة أخرى. تأكد من عدم وجود فقاعات محبوسة في الأنابيب أو فوق المحول. الآن، ضع كمية من هلام الموجات فوق الصوتية على منصة التصوير.

قم بتدوير الإبرة من جسم المحقنة سعة 3 mL بحيث تكون الحافة المائلة للإبرة متجهة للأعلى. ثم باستخدام الحامل القابل للتعديل، قم بمحاذاة المسبار بعناية بحيث يمكن دفع الإبرة مباشرة إلى داخل الهلام. يجب أن تكون الإبرة تحت مركز مسبار التصوير على مسافة كافية أسفل المسبار لتجنب ثقب غطاء المسبار، ولكن قريبة بما يكفي لتكون ضمن عمق البؤرة الخاص بالمسبار.

إذا لزم الأمر، يمكن ثني الإبرة يدويًا بحيث تظل في المستوى الصحيح طوال مسار حركتها. ومع الحفاظ على الاستقامة، اسحب الإبرة وارفع مسبار التصوير لوضع الفأر على منصة التصوير. استبدل الإبرة قبل البدء في تخدير الفأر.

يمكن تخدير أنثى فأر حامل في وقت محدد أو فأر حديث الولادة عن طريق الاستنشاق المستمر لـ 1.5%Isof fluorine، حيث يمكن إدخال أنبوب في مخروط أنفي قياسي ليتناسب مع الرأس الصغير للفأر حديث الولادة. بالنسبة للفئران حديثة الولادة، يتم تثبيت الفأر على منصة التصوير الخاصة بنظام الموجات فوق الصوتية في وضع الاستلقاء الظهري مع توجيه قمة LV نحو ذراع الحقن. وبالنسبة للفئران حديثة الولادة، يجب الحفاظ على درجة حرارة أجسامها باستخدام مصباح حراري خارجي.

تتطلب الفئران الحوامل تحضيراً أكثر. ضع جل الموجات فوق الصوتية على الأطراف لتوفير التوصيل بكاشف ECG المتصل ومراقبة معدل ضربات القلب. أدخل مقياس الحرارة الشرجي للحصول على التغذية الراجعة.

التحكم في درجة حرارة الجسم. يتم إزالة الشعر من منطقة البطن باستخدام كريم إزالة الشعر ثم الشطف بالماء. يتم فتح البطن باستخدام مقص التشريح وملقط منحني.

قم بإخراج أحد قرني الرحم ووضعه على قطعة شاش مبللة بمحلول ملحي دافئ. حافظ على رطوبة جميع الأجنة وبطن الأم طوال هذه العملية. وبإضافة المحلول الملحي الدافئ بشكل دوري، قم بتحريك الجنين بعناية إلى الوضعية المناسبة للحصول على عرض للمحور الطولي الموازي للقص للبطين الأيسر LV باستخدام مسبار الموجات فوق الصوتية، ويمكن استخدام لفة من الشاش للمساعدة في الحفاظ على توجيه الجنين.

باشر بقياس الضغط في جميع الأجنة الموجودة في أحد قرني الرحم قبل تكرار العملية في القرن الرحمي الآخر. ابدأ بوضع هلام Degas للموجات فوق الصوتية المسخن مسبقاً على جنين أو فأر حديث الولادة. ثم اخفض مسبار التصوير واضبط زاوية منصة التصوير للحصول على عرض مثالي للمحور الطولي للبطين الأيسر LV بجانب القص.

لا تقم بتعديل زاوية المسبار لأن ذلك سيؤدي إلى فقدان محاذاة الإبرة. أثناء مراقبة صورة LV على شاشة الموجات فوق الصوتية، قم بدفع الإبرة ببطء حتى تقترب من أسفل المسبار. قم بتعديل موضع الإبرة والمسبار إذا لزم الأمر لتصحيح أي انزياحات في المحاذاة.

تظهر الصورة المأخوذة من فأر حديث الولادة توجهاً مثالياً للـ lv، وهو أمر يصعب تحقيقه مع الجنين. ابدأ بتسجيل بيانات الضغط. اشطف الإبرة برفق بالمحلول الملحي وأغلق صمام الإيقاف المتصل بمحقنة الـ 20 milliliter وبالمحيط الخارجي.

راقب الضغط. قم بالزيادة في البرنامج لضمان تطبيق الحد الأدنى من الضغط على الإبرة. قم بدفع الإبرة ببطء حتى تصبح مرئية عند حافة صورة الموجات فوق الصوتية، ولكن ليس داخل lv بعد.

إذا لزم الأمر، قم بتعديل وضع الإبرة للدخول إلى LV عند القمة. عدّل وضع المسبار إذا لزم الأمر للحفاظ على صورة واضحة للإبرة. قم بدفع الإبرة داخل تجويف LV مع تسجيل بيانات الضغط ومراقبة موقع الإبرة عبر صورة الموجات فوق الصوتية.

يؤكد بدء التسجيلات النبضية من محول ضغط الدم التواجد داخل تجويف الـ LV. إذا بدا أن الإبرة موجودة في تجويف الـ LV ولكن تسجيلات الضغط ليست نبضية، قم بغسل الإبرة بنقرة خفيفة على مكبس المحقنة فقط حتى يتم اكتشاف زيادة في الضغط. يجب أن يكون غسل السائل في أدنى حد لتجنب تغيير سلوك القلب أثناء قياسات الضغط.

إذا لم تكن قراءات الضغط نبضية، فقد تكون الإبرة فوق أو تحت المستوى الصحيح ولم يتم إدخالها في تجويف LV. اسحب الإبرة، واشطفها بمحلول ملحي، ثم ادفعها للأمام مرة أخرى.

إذا لم يتم الحصول على قراءات نبضية، انتقل إلى الفأر التالي واستخدم دائماً إبرة جديدة لكل فأر جديد. يجب تنفيذ الإجراء بأكمله بأسرع ما يمكن لتقليل الضيق الذي تتعرض له الأجنة والمواليد طوال مدة التجربة. تم قياس الضغط البطيني لفئران C 57 Black six J في فأر في مرحلة E 18.

كما كان متوقعاً، كان الضغط قريباً من الصفر عندما كانت الإبرة خارج البطين الأيسر (LV)، وأظهر الضغط قراءة نبضية عندما كانت داخل البطين الأيسر (LV) لفأر في عمر P 14. وقد خمدت قراءة الضغط لأن مقدار الضغط كان أكبر وكان معدل ضربات القلب أعلى. تم تحديد معدلات ضربات القلب من تردد قراءات الضغط النبضية لمختلف الأعمار بين E 18 و P 14.

تم قياس معدلات ضربات القلب وحساب ضغوط البطين الأيسر الانقباضية. وأثناء تنفيذ هذا الإجراء، من المهم تذكر ترطيب الأجنة بشكل دوري ومتابعة حالة الأم. وتمهد هذه التقنية الطريق للباحثين في فيزيولوجيا القلب والأوعية الدموية لاستكشاف تغيرات ضغط الدم في الفئران النامية.