إعداد شرائح مجاور للسهمي للتحقيق في ظهري، بطني منظمة من القشرة المخية الأنفية الداخلية القوارض الإنسي

ونحن تصف إجراءات لإعداد وتسجيل الكهربية من شرائح المخ التي تحافظ على محور ظهري، بطني من القشرة المخية الأنفية الداخلية وسطي (MEC). لأن الترميز العصبية من موقع يتبع منظمة ظهري، بطني داخل مجمع الشرق الأوسط، هذه الإجراءات تسهيل التحقيق في الآليات الخلوية مهم للملاحة والذاكرة.

الهدف العام من التجربة التالية هو فحص التنظيم الطبوغرافي للخصائص المشبكية والتكاملية للخلايا العصبية في القشرة الإنسية التي تدخل الرطوبة النسبية. يتم تحقيق ذلك عن طريق تحضير شرائح من قشرة الرطوبة النسبية الإنسية الموجهة في المستوى البطني الظهري. كخطوة ثانية ، يتم إجراء تسجيلات مشبك التصحيح للخلايا العصبية لقشرة الرطوبة النسبية للتحقيق في خصائصها المشبكية والتكاملية.

بعد ذلك ، يتم تحديد موقع الخلايا العصبية المسجلة لتقييم التنظيم البطني الظهري للخصائص المقاسة الفيزيولوجية الكهربية. تم الحصول على النتائج التي تظهر التنظيم الطبوغرافي للخصائص الجوهرية للخلايا النجمية في الطبقة الثانية بناء على قياسات مقاومة المدخلات وثابت وقت الغشاء وعتبة جهد الفعل ، ويوضح الإجراء هيو باستيل ، طالب دراسات عليا من مختبري. الميزة الرئيسية لهذه التقنية على الطرق الحالية مثل شرائح الدماغ الموجهة أفقيا ، هي أنه يمكن تسجيل موضع الخلايا العصبية المسجلة على طول المحور البطني الظهري للقشرة الداخلية بدقة.

لبدء هذا الإجراء ، قم بإزالة الدماغ من الفأر وضعه على الفور في القطع البارد. السائل النخاعي الدماغي الاصطناعي يغمر بالكربوجين. بعد ثلاث دقائق ، قم بإزالة الدماغ بعناية من قطع السائل الدماغي النخاعي باستخدام ملعقة.

ضعه برفق في وضع رأسي على ورق الترشيح المبلل بقطع السائل الدماغي النخاعي. ثم استخدم ماكينة حلاقة أو مشرط لإزالة أكبر قدر ممكن من المخيخ دون التأثير على القشرة المعوية الإنسية ، والتي تقع في الطرف الحري من المخ. قم بإزالة الجزء المنقاري من المخ عن طريق التقسيم في المستوى الإكليلي.

بعد ذلك ، الدماغ في المستوى الرأسي لخط الوسط. بعد ذلك ، أعد نصفي الكرة الأرضية إلى قطع السائل الدماغي النخاعي لمدة دقيقة ونصف قبل التركيب. تأكد من أن حافة القطع للشفرة الاهتزازية مائلة بزاوية 20 درجة من الأفقي على سطح التثبيت ، قم بعمل شريط ضحل من الغراء الفائق موازيا للشفرة الاهتزازية ، بعرض نصف الكرة الأرضية تقريبا ، وطويل بما يكفي لاستيعاب نصفي الكرة الأرضية من طرف إلى طرف.

ثم انقل كل نصف كرة من قطع السائل الدماغي النخاعي إلى سطح التركيب عن طريق وضع نصف الكرة الأرضية بحيث يستقر سطحه الإنسي على الملعقة ويواجه امتدائها الظهري نحو شفرة النغمة الاهتزازية. حرك نصف الكرة برفق على شريط الغراء الفائق وتأكد من أن السطح الإنسي لكل نصف كرة مواز لقاعدة الاهتزاز. بعد ذلك ، اغمر نصفي الكرة الأرضية على الفور في القطع البارد.

السائل الدماغي النخاعي. حافظ على درجة الحرارة والسيارة والتشبع طوال عملية التقطيع. باستخدام الاهتزاز ، قم بإزالة القشرة من نصفي الكرة الأرضية في المستوى السهمي حتى يتم تحديد الجزء الجانبي من القشرة المعوية الإنسية في كل نصف كرة على الأقل 600 ميكرومتر من السطح الجانبي.

يتم تحديد المدى الجانبي للقشرة المعوية الإنسية من خلال عدم وجود شريط أبيض سميك حول المنحنى الحبلي البطني للحصين. يقطع الشكل غير المحدب لحدوده المنقارية والزاوية الحركية الظهرية الزاوية 400 ميكرون من نصفي الكرة الأرضية حتى يتم الوصول إلى المدى الإنسي للقشرة المعوية الإنسية. بعد كل قطع ، ضع الشرائح على الفور في معيار الكربوجين المشبع A CSF المحفوظ في حمام مائي عند 35 درجة مئوية واحتضانها لمدة 15 دقيقة تقريبا.

بعد 15 دقيقة ، قم بإزالة حامل الشرائح من الحمام المائي واستمر في غلي الكربوجين في درجة حرارة الغرفة لمدة 45 دقيقة على الأقل. انقل شريحة إلى غرفة التسجيل ، والتي يتم غليها باستمرار بمعيار A-C-S-F-A المشبع بالكربوجين 35 درجة مئوية. بعد ذلك ، حدد منطقة تسجيل تقريبية داخل قشرة الرطوبة النسبية الإنسية.

ثم قم بالتبديل إلى هدف التكبير العالي. تحديد الخلايا القابلة للحياة داخل هذه المنطقة. في هذه المرحلة ، يمكن إجراء تجارب باستخدام مشبك رقعة الخلية الكاملة التقليدي لتسجيل إمكانات الغشاء أو تيار الغشاء من الخلايا العصبية المحددة.

يمكن التحقق من هوية الخلايا العصبية من الخصائص الفيزيولوجية الكهربية للخلايا العصبية المسجلة ومن خلال تضمين ملصقات الفلورسنت داخل المحلول داخل الخلايا. بعد التجربة لتحديد موضع الخلايا العصبية المسجلة على طول المحور البطني الظهري ، قم بالتبديل إلى هدف التكبير المنخفض. حدد موقع الاهتمام إما عن طريق تضمين قطب التسجيل في صورة أو عن طريق التنحي إلى أسفل غشاء القزحية المجال.

لترك دائرة ساطعة حول موقع الاهتمام في صورة مكررة ، ومنطقة القشرة الإنسية ومنطقة القشرة النسبية والمناطق المحيطة بالشريحة لتحديد موقع التسجيل داخل الصورة ، يمكن بعد ذلك تثبيت التكرار على الصورة الأولية لموقع التسجيل ومحيطه. قد تكون هناك حاجة إلى ما يصل إلى ثلاث صور منفصلة للتكبير المنخفض لتغطية المنطقة من موقع التسجيل البطني إلى الحدود الظهرية للقشرة الداخلية الإنسية. يمكن بعد ذلك تجميع هذه الصور معا باستخدام برنامج معالجة الصور.

توفر الحدود الظهرية للقشرة المعوية الإنسية معلما مناسبا لقياس الوضع البطني الظهري ، لكن الحدود البطنية للقشرة المعوية الإنسية ليست محددة جيدا. هنا. تظهر الأقسام السهمية DIC و NIAL الحصين الدائري وعدم وجود نتوء دائري في الطبقة الأولى من القشرة المعوية الجانبية على التوالي. هذه صور للشرائح النموذجية التي تحتوي على القشرة المعوية الإنسية.

يتم الكشف عن منطقة paras بوضوح من خلال تلطيخ الصواريخ. في الصور المقابلة ، تكون الحدود الظهرية للقشرة المعوية الإنسية المشار إليها بالسهم الأسود بطنية لمجموعة الخلايا الدائرية التي تبرز بعيدا في الطبقة الأولى كما هو موضح في السهم الأحمر. فيما يلي مثال على صورة مركبة تكبير أربعة أضعاف لشريحة شبه سهمية.

يشار إلى مواضع الخلية الظهرية والخلية البطنية بدوائر مملوءة باللونين الأزرق والأخضر على التوالي. يشير السهم الأسود إلى الحدود الظهرية المقدرة للقشرة الداخلية الإنسية ويمتد إلى الطبقات العميقة بواسطة الخط الأبيض المنقط. الخط الأبيض الصلب هو دليل يوضح المسار الكنتوري ، حيث يتم هنا عرض قياس البكسل للمسافة من الحدود الظهرية للقشرة الداخلية الإنسية إلى تسجيلات الخلية الموجودة في البطن من الخلايا النجمية الظهرية والبطنية المميزة.

تساعد هذه التسجيلات في تحديد هوية الخلايا وتوضيح كيفية دخول الخصائص الكهربائية للقشرة الإنسية r. تختلف الخلايا النجمية في الطبقة الثانية في المواقع الظهرية والبطنية أثناء محاولة هذا الإجراء. من المهم أن تتذكر توخي الحذر بشكل استثنائي أثناء تحضير الشرائح لأن الشرائح عالية الجودة ضرورية للتسجيلات الفيزيولوجية الكهربية المنتجة.