نموذج تجريبي من التهاب الشغاف مقاومة مثسلين

الهدف العام من هذا الإجراء هو إنشاء نموذج تجريبي لالتهاب الشغاف العدوائي في الجرذان. يتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق زراعة بكتيريا aureus وتجهيز قساطر جراحية للعدوى. بعد ذلك، يتم تحضير المنطقة الجراحية وتخدير الحيوان.

بمجرد تخدير الحيوان، يتم إدخال قسطرة عبر الشريان السباتي الأيمن باتجاه القلب. وتتمثل الخطوة الأخيرة في إصابة الحيوانات بـ aureus عن طريق الحقن في وريد الذيل. وفي النهاية، يتم تشريح الأنسجة المستهدفة وتحضيرها للزراعة الكمية.

تتمثل الميزة الرئيسية لهذه التقنية مقارنة بالطرق الحالية، مثل نموذج التهاب الشغاف السريع، في إمكانية استخدام نموذج التهاب الشغاف الأحمر مع نظام التصوير الحي Ivus. ويمكن لهذه الطريقة أن تساعد في الإجابة عن أسئلة جوهرية في مجال مسببات الأمراض الفموية، مثل الفوعة وفعالية العوامل المضادة للميكروبات. وبشكل عام، قد يواجه الأشخاص المبتدئون في هذه التقنية صعوبة لأن الإجراء الجراحي يتسم بالتحدي.

أولاً، يتم تلقيح عروة كاملة من مزرعة M SSA من مخزون مجمد في وعاء شريحة دم أغنام. يتم تحضين المزرعة في طبق صويا أجار طوال الليل عند 37 درجة مئوية بعد التأكد من عدم وجود تلوث. يتم اختيار مستعمرة واحدة من الطبق واستخدامها لتلقيح 5 mL من مرق الصويا تريبتون في أنبوب بسعة 15 mL ذو غطاء ضاغط.

يتم تحضين اللقاح عند 37 درجة مئوية طوال الليل في حاضنة هزازة. اضبط السرعة على 200 RPM لتحضير القساطر أولاً. قم بقص أنابيب البولي إيثيلين إلى أطوال تبلغ 10 centimeter وعقم القساطر في محلول التطهير cex لمدة 30 دقيقة.

بعد ذلك، قم بصهر أحد طرفي أنبوب معقم عن طريق الضغط على الطرف باستخدام ملقط معقم ومسخن لإنشاء قسطرة تمر من الشريان السباتي الأيمن إلى البطين الأيسر وتسبب تلفاً في شغاف القلب عند خفقان القلب. ثم قم بتخدير الجرذ بوضعه في غرفة تحتوي على خليط من isof fluorine والأكسجين بنسبة واحد إلى واحد حتى يبدأ مفعول التخدير. تأكد من حدوث التخدير من خلال التحقق من استرخاء العضلات وغياب المنعكسات الأخمصية.

مع الحفاظ على حالة التخدير أثناء الجراحة باستخدام قمع أنفي متصل بمزيج الغاز. يتم تنظيف المنطقة الجراحية بمحلول Betadine وإيثانول 70% باستخدام تقنية معقمة طوال فترة الجراحة. يوضع الجرذ في وضعية الظهر ويتم إجراء شق عمودي عبر طبقة الجلد في الرقبة فوق القص باستخدام التشريح غير الحاد.

افصل اللفافة للكشف عن الشريان السباتي الأيمن. يقع الشريان السباتي الأيمن إلى اليمين قليلاً من الخط الناصف فوق الترقوتين. اسحب الشريان بعناية خارج تجويف الرقبة وضع خيطين من الحرير بطول 10 centimeter تحت الشريان لربطه عند الطرف الرأسي المكشوف.

بعد ذلك، ضع مشبكاً على الشريان لمنع النزيف. اصنع ثقباً صغيراً في الجزء العلوي من الشريان باستخدام مُدخل القسطرة وبمساعدة ملقط. أدخل الطرف غير المختوم من القسطرة عبر الثقب الموجود في الشريان.

أزل المشبك وادفع القسطرة لأسفل باتجاه القلب. لضمان الإدخال بشكل صحيح حتىما يتم مواجهة مقاومة، يجب أن تمتد القسطرة من أربعة إلى خمسة سنتيمترات داخل الشريان وأن تنبض مع ضربات قلب الجرذ. وبمجرد استقرار القسطرة في مكانها، اربط خيط جراحي مرتخٍ حول الطرف المقطوع من الشريان وثبّت القسطرة في مكانها.

باستخدام خيط جراحي حريري، قم بقص الزيادات من الخيط ونهايات القسطرة، ثم أدخل النهايات تحت جلد الرقبة. أغلق الجلد باستخدام مشابك جلدية. ضع الجرذ في قفص نظيف وأبقه في مكان دافئ حتى يفيق من التخدير.

وفّر الغذاء والماء وافحص الجرذ بشكل متكرر، وذلك أثناء فترة التعافي وبعدها. يمكن إجراء العدوى في غضون فترة تتراوح بين يوم واحد وسبعة أيام بعد الجراحة، ولكن يجب أن يظل هذا التوقيت متسقاً ضمن التجارب. نظّف ذيل الجرذ باستخدام 70%ethanol واحقن 0.5 milliliters من مزرعة MRSA في الخلية المطلوبة.

احقن في الوريد الذيلي. باستخدام إبرة بقياس 27 ومقاس نصف بوصة، ضع ضغطاً على موقع الحقن حتى يتوقف أي نزيف قبل إعادة الجرذ إلى قفصه. بعد التضحية بالجرذ، امسح الصدر بـ 70%ethanol ثم قم بعمل شق على شكل حرف V في الصدر أسفل عظمة القص.

اقطع غضاريف الأضلاع على كل جانب من جانبي عظمة القص. وللكشف عن القلب، اسحب القلب بلطف إلى الأعلى واقطع الأنسجة القريبة من الأبهر ثم قم بالتسليك للأعلى لتحرير القلب. ضع القلب في طبق بتري معقم مبطن بشاش قياس 4 × 4 بوصة، ثم قم بإجراء قطع عبر الجدار الداخلي للبطين الأيسر وافتح الحجرة الجانبية اليسرى.

تحقق للتأكد من وضع القسطرة بشكل صحيح، ثم قم بإزالتها. افحص الصمام وقم بإزالة النبتات (vegetations) باستخدام المقص والملاقط. قم أيضاً بإزالة الكليتين والطحال، وبعد وزن وتجنيس الأنسجة والنبتات، قم بإجراء تخفيفات متسلسلة في PBS من أجل الزرع الكمي.

يظهر هنا قسطرة موضوعة بشكل صحيح كما يشير السهم الموجود في أقصى اليسار؛ حيث تمتد عبر الصمام الأبهري وصولاً إلى الجانب الأيسر من حجرة القلب، كما تظهر العديد من النبتات حول الصمامات الأبهرية كما تشير السهمان الأوسط والأيمن. يوفر هذا الجدول مثالاً على ضراوة سلالة ssus في نموذج التهاب الشغاف لدى الجرذان.

أصيبت جميع الحيوانات التي تم تحديها بلقاح يتراوح بين 10⁵ و 10⁶ CFU بالتهاب الشغاف، مع وجود كثافات عالية من ssus في النبتات القلبية وكذلك في الكليتين والطحال. وبمجرد إتقان هذا الإجراء الجراحي، يمكن إتمامه في غضون 10 دقائق إذا تم تنفيذه بشكل صحيح.

أثناء محاولة تنفيذ هذا الإجراء، من المهم تذكر الحفاظ على الحيوان في حالة مستقرة ومقيمة خلال الجراحة وبعد هذا الإجراء. كما يمكن إجراء طرق مثل ivus للإجابة على أسئلة إضافية، مثل المراقبة في الوقت الفعلي لفعالية العوامل المضادة للميكروبات والتعبير الجيني in vivo بعد تطوره. قد تكون هذه التقنية هي السبيل للباحثين في مجال step orus و fiction لاستكشاف عوامل الضراوة الممرضة في العدوى داخل الأوعية الدموية.

بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إنشاء نموذج تجريبي لالتهاب الشغاف في الجرذان. لا تنسَ أن التعامل مع MRA يمكن أن يكون خطيراً للغاية، ويجب اتخاذ الاحتياطات مثل ارتداء معطف المختبر والقفازات أثناء تنفيذ هذا الإجراء.