June 4th, 2012
نموذج تجريبي الشغاف الفئران بسبب المقاومة للميثيسيلين س. الذهبية.
الهدف العام من هذا الإجراء هو إنشاء نموذج تجريبي لالتهاب الشغاف المعدي في الفئران. يتم تحقيق ذلك عن طريق زراعة الهالة أولا وإعداد قسطرة الجراحة للعدوى. بعد ذلك ، يتم تحضير المنطقة الجراحية ويتم تخدير.
بمجرد تخدير ، يتم إدخال قسطرة عبر الشريان السباتي الأيمن باتجاه القلب. الخطوة الأخيرة هي إصابة بالأوريوس عن طريق حقن وريد الذيل. في النهاية ، يتم تشريح الأنسجة المستهدفة وإعدادها للثقافة الكمية.
الميزة الرئيسية لهذه التقنية على الطرق الحالية ، مثل نموذج التهاب الشغاف السريع ، هي أنه يمكن استخدام نموذج التهاب الشغاف الأحمر مع نظام التصوير في الجسم الحي. إيفوس. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على السؤال الرئيسي في مجال التسبب الفموي التدريجي ، مثل ضراوة وفعالية العامل المضاد للميكروبات. بشكل عام ، سيكافح الأفراد الجدد في هذه التقنية لأن الإجراء الجراحي يمثل تحديا.
قم أولا بتلقيح حلقة مليئة بثقافة M SSA من مخزون مجمد إلى علبة رحلة دم الأغنام. تحتضن صفيحة مثقاب الصويا الثقافة بين عشية وضحاها عند 37 درجة مئوية بعد التأكد من عدم وجود تلوث. اختر مستعمرة واحدة من اللوحة واستخدمها لتلقيح خمسة ملليلتر من مرق الصويا في أنبوب غطاء سعة 15 ملليلترا.
احتضان اللقاح عند 37 درجة مئوية طوال الليل في حاضنة اهتزازية. اضبط على 200 دورة في الدقيقة لتحضير القسطرة أولا. قطع أنابيب البولي إيثيلين إلى أطوال 10 سم وتعقيم القسطرة في محلول تطهير cex لمدة 30 دقيقة.
بعد ذلك ، قم بإذابة أحد طرفي الأنبوب المعقم عن طريق الضغط على الحافة ملقط معقم ساخن لإنشاء قسطرة تنتقل من الشريان السباتي الأيمن إلى البطين الأيسر وتسبب تلفا للشغاف عندما ينبض القلب. ثم قم بتخدير الفئران عن طريق وضعها في غرفة تحتوي على خليط أكسجين الفلور واحد لواحد حتى يصبح المخدر ساري المفعول. تأكد من التخدير عن طريق التحقق مما إذا كانت العضلات مسترخية وغائبة ردود الفعل الدواسة.
والحفاظ على حالة التخدير أثناء الجراحة باستخدام مخروط الأنف المتصل بخليط الغاز. تنظيف منطقة الجراحة بالبيتادين و 70٪ إيثانول باستخدام تقنية معقمة طوال الجراحة. ضع الجرذ في وضع ظهري وقم بعمل شق عمودي من خلال طبقة جلد الرقبة فوق القص باستخدام تشريح حاد.
افصل اللفافة لكشف الشريان السباتي الأيمن. يقع الشريان السباتي الأيمن على يمين خط الوسط قليلا فوق الترقوة. اسحب الشريان بحذر لأعلى من تجويف الرقبة وضع خياطتين حريريتين بطول 10 سم تحت الشريان لربطه في الطرف الرأسي المكشوف.
ثم ضع مشبكا على الشريان لمنع النزيف. قم بعمل ثقب صغير في الجزء العلوي من الشريان باستخدام مدخل القسطرة باستخدام الملقط. أدخل الطرف غير المغلق للقسطرة من خلال الفتحة الموجودة في الشريان.
قم بإزالة المشبك وادفع القسطرة لأسفل باتجاه القلب. حتى يتم إدخال المقاومة بشكل صحيح ، يجب أن تمتد القسطرة من أربعة إلى خمسة سنتيمترات في الشريان ويجب أن تنبض بنبض مع نبضات قلب الفئران. بمجرد وضع القسطرة في مكانها ، اربط خياطة فضفاضة حول طرف الشريان وقم بتثبيت القسطرة في مكانها.
باستخدام خياطة الحرير ، قم بقطع النهايات الزائدة والقسطرة ، ثم ثني الأطراف تحت جلد الرقبة. أغلق الجلد بمشابك الجلد. ضع الجرذ في قفص نظيف واحتفظ به في مكان دافئ حتى يتعافى من التخدير.
وفر الطعام والماء وفحص الفئران بشكل متكرر ، أثناء وبعد التعافي. يمكن إجراء العدوى بين يوم وسبعة أيام بعد الجراحة ، ولكن يجب أن يظل الوقت ثابتا ضمن التجارب. نظف ذيل الفئران بنسبة 70٪ من الإيثانول وحقن 0.5 مل من ثقافة MRSA في الخلية المرغوبة.
عد في الوريد الذيل. باستخدام إبرة قياس 27 نصف بوصة ، اضغط على موقع الحقن حتى يتوقف أي نزيف قبل إعادة الفئران إلى قفصها. بعد التضحية بالجرذ ، امسح الصدر بنسبة 70٪ من الإيثانول ثم قم بعمل شق على شكل حرف V في الصدر أسفل القص.
قطع غضروف الضلوع على كل جانب من جوانب القص. لكشف القلب، اسحب القلب برفق لأعلى وقم بقص الأنسجة القريبة من الشريان الأورطي وقم بتشريحها لأعلى لتحرير القلب. ضع القلب على طبق بتري معقم مبطن بشاش أربعة × أربع بوصات ، ثم قم بعمل قطع من خلال الجدار الداخلي للبطين الأيسر وافتح الغرفة على الجانب الأيسر.
تحقق للتأكد من وضع القسطرة الصحيح ، ثم قم بإزالتها. افحص وقم بإزالة الغطاء النباتي من الصمام بالمقص والملقط. قم أيضا بإزالة الكلى والطحال ، وبعد وزن الأنسجة والنباتات وتجانسها ، قم بعمل تخفيفات متسلسلة في PBS للثقافة الكمية.
يظهر هنا قسطرة موضوعة بشكل صحيح كما هو موضح في السهم الموجود في أقصى اليسار. يمتد عبر الصمام الأبهري إلى الجانب الأيسر من حجرة القلب ، وتظهر العديد من النباتات حول الصمامات الأبهرية كما هو موضح في السهمين الأوسط واليمين. يقدم هذا الجدول مثالا على ضراوة سلالة ssus في نموذج التهاب الشغاف في الفئران.
تحدت جميع بالعينين من 10 إلى الخامس و 10 إلى السادس. طورت CFU التهاب الشغاف مع كثافة عالية في الغطاء النباتي للقلب وكذلك في الكلى والطحال بمجرد إتقانه. يمكن إجراء هذا الإجراء الجراحي في غضون 10 دقائق إذا تم إجراؤه بشكل صحيح.
أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر الحفاظ على في حالة تقييم أثناء الجراحة بعد هذا الإجراء. لا يمكن تنفيذ طرق مثل ivus للإجابة على أسئلة إضافية مثل المراقبة في الوقت الفعلي لفعالية العوامل المضادة للميكروبات والتعبير الجيني في الجسم الحي بعد تطويره. هذه التقنية هي السبيل للباحث في مجال الخطوة أو الخيال لاستكشاف عامل الفوعة المسببة للأمراض في عدوى الأوعية الدموية.
بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إنشاء نموذج التهاب الشغاف التجريبي في الفئران. لا تنس أن العمل مع MRA يمكن أن يكون خطيرا للغاية ويجب اتخاذ الاحتياطات مثل ارتداء المختبر والمعطف والقفازات أثناء تنفيذ هذا الإجراء.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
تصف هذه المقالة إنشاء نموذج تجريبي لالتهاب الشغاف المعدي في الفئران باستخدام المكورات العنقودية الذهبية المقاومة للميثيسيلين. تتضمن الإجراء تكاثر البكتيريا، وإعداد القسطرات الجراحية، وإصابة الحيوانات عن طريق حقن في الوريد الذيلي.
Establishing a controlled rat model of MRSA endocarditis enables reproducible evaluation of antimicrobial efficacy and virulence mechanisms, addressing a critical need in anti-infective drug development. This model supports mechanistic de-risking by providing quantitative tissue burden data and consistent host-pathogen interactions, which are essential for lead optimization and go/no-go decisions in preclinical pipelines. By minimizing inter-animal variability, it enhances predictive confidence in translating candidate therapies to clinical settings.
This model fits within the preclinical infectious disease workflow, bridging early target validation with lead optimization through quantifiable infection burden and therapeutic response metrics.