Name: الاسفنجة كحول البولي فينيل نموذج زرع (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 23 s
Description: تعلم نموذج التئام الجروح في الفئران باستخدام إسفنجة حمض البولي فينيل. تتيح هذه التقنية زرع الإسفنجات وحقنها بالعلاجات لتحليل العمليات البيولوجية والتئام الجروح بدقة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

التمويل المقدم من قبل المعاهد الوطنية للصحة (NIH) منحة R01-HL088424؛ المحاربين القدامى جائزة الجدارة لشؤون PPY.

1. الاسفنجة تحضير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هيدرات الإسفنج خلال إثارة بين عشية وضحاها في 0.9٪ (W / V) مائي محلول كلوريد الصوديوم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطهير اسفنجات المائية عن طريق جهاز الأوتوكليف لهم. لمدة 75 الأوتوكلاف، مل لمدة 25 دقيقة في 121 درجة مئوية. </li></ol> ملاحظة: الإسفنج تحميل مع العلاج كما هو موضح أدناه هو اختياري. <ol start="3" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في غطاء محرك السيارة العقيمة مع الأدوات المعقمة، واختيار واحدة من الاسفنج الحل باستخدام ملاقط. ضغط الاسفنجة مع ملاقط واستخدام معلومات سرية فراغ لإزالة حل أكبر قدر ممكن من الاسفنجة. وضع انتزعها الاسفنج في نسيج طبق ثقافة، والحرص على ترك مسافة بين الإسفنج. ويمكن استخدام لوحات متعددة جيدا لفصل العلاجات المختلفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة الحل علاج مباشرة على مركز من الإسفنج. اضغط برفق على الإسفنج مع طرف ماصة بعد أن تم وضع حل على الاسفنج، وهذا يساعد على امتصاص الاسفنج الحل. ملاحظة: 6MMقطر بواسطة الإسفنج 2،75 ملم سميكة أن نتبعها هي قادرة على الاستمرار بحد أقصى 25 ميكرولتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة يتم تحميل جميع الإسفنج، يمكن تخزين لوحة هم على الجليد في حين أنها تزرع في الماوس. </li></ol> 2. إجراء العمليات الجراحية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الحيوان بشكل مناسب وإدارة وقائي مسكن. والإجراء بأكمله تستمر حوالي 20 دقيقة لكل حيوان. للحصول على 30 لترا ز 1،5 الفأر في الدقيقة الواحدة من الأوكسجين مع يستخدم 1.5٪ Isoflurane للحث على المحافظة على والتخدير. عندما الحيوان لم تعد تستجيب لقرصة اختبار رد الفعل، في مكان مخروط الأنف في موقف ضعيف. استخدام ماكينة حلاقة كهربائية لحلاقة (أ) 1 بوصة بواسطة 1 بوصة منطقة في الجانب السفلي بطني أسفل القفص الصدري. مسح نظيفة من قص الشعر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعقيم منطقة حلق عن طريق تنظيف مع betadine تليها الكحول 70٪. كرر هذا التطهير betadine الكحول ثلاث مرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في حين الضغط على الجلد تدريسها، واستخدام مشرط لجعل شق عمودي 1،5-2 مرات دياتدرج متر من الإسفنج، والحذر لئلا يقطع تجويف الجسم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملاقط لعقد حافة الجلد وتبدأ ببطء فصل الجلد من العضلات على جانبي الفتحة باستخدام مقص Metzembaum. ينبغي للجيب تذهب عبر عرض من الفأرة ومن القفص الصدري لرجليه الخلفيتين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملاقط لالتقاط الإسفنج الأولى التي يتم وضعها في الحيوانات عن طريق اختلاس من الجانبين. نقل الاسفنجة إلى ملاقط مستقيم بحيث يتم عقد من أعلى وأسفل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملاقط لعقد حافة الجلد ورفع بحيث يمكن إدراجها الاسفنجة. إدراج ببطء الاسفنجة في محاولة لتجنب ملامسة الجلد أو العضلات وتحت مثل الاسفنجة سيكون من الصعب التحرك بمجرد أن لمست الأنسجة. كرر لجميع الإسفنج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بمجرد أن يتم إدخال جميع الإسفنج، ومكان اثنين أو ثلاثة من الغرز لإغلاق الجرح. استخدام زوج من ملاقط لعقد كلا الجانبين من شق معا، والخيط sutu<html> إعادة على حد سواء من خلال طبقات الجلد. تشديد رمي 1 يكفي لإغلاق حواف الجلد. الانتهاء من عقدة مربع مع واحدة من أكثر رمي الاتجاه الآخر، وهذه المرة سحب عقدة ضيق. التعادل ثم اثنين عقدة أكثر مربع لإنهاء خياطة (الشكل 2). وضع الغرز إضافية لإغلاق شق كامل. ويمكن استخدام طرق أخرى تربط الجرح مثل dermabond، مقاطع الجرح، أو المواد الغذائية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الحيوان من نظام التخدير ورصد في الوقت الذي استأنفت وعيه. وينبغي أن تبدأ بسرعة حيوان التجول والعودة إلى ما قبل المرجع التنقل. أؤكد أنها قادرة بما فيه الكفاية للوصول إلى الغذاء والماء. ويمكن وضع بعض المواد الغذائية مبلل في الجزء السفلي من القفص للمساعدة في التعافي. تواصل رصد حيوان يوميا بحثا عن علامات الضيق أو عدم الراحة، والتحقق من موقع شق ل، عدوى التهاب تفزر و،. اتخاذ الإجراءات المناسبة إذا تم العثور على أية مضاعفات على الانتعاش. </li></ol> 3. اختياري حقن معشوقة = &quot;jove_content&quot;&gt; ملاحظة: مرة واحدة وقد تم زرع الإسفنج إلى الحيوان ويمكن حقنها بمحلول مكون من خلايا، والأدوية، عوامل النمو وما إلى ذلك وهذا ما يسمح لتحليل الآثار المترتبة على مادة المحقونة في أوقات مختلفة لتوفير وإدارة الأنظمة. فإذا ما فعلت الحقن دائما عنصر تحكم استخدامها. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لحقن الاسفنج مع الحل المنشود، أولا تحديد كمية من المواد الخاضعة للإدارة على الماوس. المادة يجب أن تتركز بحيث حجم حقن أقل من نصف إجمالي حجم الاسفنجة يمكن أن تعقد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحضير حقنة لحقن (بالنسبة للفئران التي نستخدمها إبرة G 28). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الحيوانات في الحصول على الحقن تحت التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن عند الحيوان لم يعد يستجيب لاختبار قرصة أن تعطى الحقن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لإعطاء حقن دفع الإبرة في الجلد 45 درجة زاوية شامل في مركز الاسفنجة. ثم دفع إبرة في الاسفنج لن يؤدي الا في منتصف الطريقمن خلال سمكها. والهدف من ذلك هو حقن في وسط الدقيق الاسفنجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لفحص للتأكد من أن الإبرة في الاسفنج، ورفع ببطء الإبرة عموديا. إذا كانت الإبرة في الاسفنجة، الاسفنجة يجب نقل ما يصل مع الإبرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن ببطء في الاسفنج وإزالة إبرة. إذا كان هناك الإسفنج متعددة تتطلب الحقن فمن الممكن أن يتم دفع بعض من السائل تحقن من المواقع السابقة للحقن. </li></ol> 4. إزالة الاسفنجة ملاحظة: أثناء إزالة الاسفنجة، والتعامل مع الاسفنجة بمزيد من الحذر. تجنب اختراق الاسفنج مع الأدوات الجراحية ومنع النزيف في الاسفنج عن طريق تجنب الشرايين الرئيسية في جميع أنحاء الأنسجة المحيطة بها. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد هذا الحيوان هو الموت الرحيم، وإزالة الاسفنجة من خلال عقد الجلد باستخدام الملقط، وجعل شق إغلاق الاسفنج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعناية فصل الإسفنج من الكبسولة المحيطة<html> الثانية وتجنب حصاد الأنسجة المحيطة اضافية الاسفنجة. لفحوصات مثل تسليم المخدرات أو قياس الأشكال، المطلوب أقل دقة عن الختان. </li></ol> 5. ممثل النتائج ويمكن تخزين الإسفنج إزالة تحت ظروف مختلفة تبعا لنوع من التحليل الذي سيتم تنفيذه. لباجتزاء، يمكن أن تكون جزءا لا يتجزأ من الإسفنج في استرجاع وسيلة لتجميد مثل درجة الحرارة المثلى للقطع (أكتوبر) مركب أو وضعها في 10٪ من الفورمالين لتضمين وباجتزاء في كتل البارافين (الشكل 3A وباء). ويتم الحصول على أفضل النتائج لباجتزاء عندما يتم قطع الاسفنج في نصف عبر القطر، وجزءا لا يتجزأ من قطع السطح إلى الأسفل (الشكل رقم 4A وباء). وكان ينبغي أن تؤخذ أجزاء من الاسفنج بحيث كامل عرض الاسفنجة موجودا. 3A ويبين الشكل 2 الإسفنج، وجزءا لا يتجزأ من الاسفنجة اليسار / مقطوع بشكل غير صحيح، وتمت معالجة الاسفنجة اليمين بشكل صحيح. والأنف والحنجرة &quot;&gt; للتحليل، ويمكن وضع اسفنج في أنبوب إيبندورف وتخزينها في -20 درجة مئوية حتى على استعداد لتجهيز يجب وضع الحمض النووي الريبي والكمية الحقيقية الإسفنج تحليل PCR مرة في أنبوب إيبندورف، فلاش المجمدة، وتخزينها في. - 80 درجة مئوية وبالإضافة إلى ذلك، يمكن استخدام المواد الحافظة 1 الحمض النووي الريبي، مثل RNAlater من QIAGEN، لتحقيق الاستقرار في الحمض النووي الريبي لتخزين آمن عند ارتفاع درجات الحرارة. السائل بالجروح التي يمكن جمعها عن طريق الضغط على الإسفنج عبر أنبوب، وتجميع معا من السائل ويمكن أيضا أن الإسفنج متعددة للحصول على عينة تمثيلية. الخلايا الحية، مثل الضامة، الخلايا الليفية والخلايا اللمفية، يمكن استخراجها من الإسفنج. بعد إزالة من الحيوان، والإسفنج يمكن أن يكون في مكان وسائل الإعلام المناسبة لنوع المطلوب من الخلايا، ويمكن قطع إسفنج تتم معالجتها للافراج عن الخلايا الجسدية من قبل وسائل (أي كولاجيناز) (أي تنميق) أو الأنزيمية. <img alt="الشكل 1." src="/files/ftp_upload/3885/3885fig1.jpg" /> الشكل 1. Dehydraتيد PVA الأقراص الاسفنج في ثلاثة أحجام مختلفة. <img alt="الشكل 2." src="/files/ftp_upload/3885/3885fig2.jpg" /> الشكل 2. صورة من نموذج التئام الجروح الماوس يظهر موقف من الجرح الجانبية وأربعة الإسفنج بولي. <img alt="الشكل 3." src="/files/ftp_upload/3885/3885fig3.jpg" /> الشكل 3. (أ) H &amp; E تلطيخ في 4x و(B) تلوين ثلاثي الألوان في 10X من الإسفنج البارافين مقطوع المضمنة. <img alt="الشكل 4." src="/files/ftp_upload/3885/3885fig4.jpg" /> الشكل 4. (أ) صورة من قطع الاسفنج في نصف طول القطر. (B) PVA الاسفنج نصف العام، جزءا لا يتجزأ من خفض الجانب السلبي في أكتوبر

<ol><li>Efron, D. T., Barbul, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subcutaneous+sponge+models%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">Subcutaneous sponge models.</a> Methods Mol. Med. 78, 83-93 (2003).</li>
<li>Gottrup, F., Agren, M. S., Karlsmark, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+for+use+in+wound+healing+research%3A+a+survey+focusing+on+in+vitro+and+in+vivo+adult+soft+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair%22%5BJournal%5D)">Models for use in wound healing research: a survey focusing on in vitro and in vivo adult soft tissue.</a> Wound Repair. 8, 83-96 (2000).</li>
<li>Sprugel, K. H., McPherson, J. M., Clowes, A. W., Ross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+growth+factors+in+vivo.+I.+Cell+ingrowth+into+porous+subcutaneous+chambers%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Effects of growth factors in vivo. I. Cell ingrowth into porous subcutaneous chambers.</a> Am. J. Pathol. 129, 601-613 (1987).</li>
<li>Alaish, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+polyvinyl+alcohol+sponge+and+expanded+polytetrafluoroethylene+subcutaneous+implants+as+models+to+evaluate+wound+healing+potential+in+human+beings%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair%22%5BJournal%5D)">Comparison of the polyvinyl alcohol sponge and expanded polytetrafluoroethylene subcutaneous implants as models to evaluate wound healing potential in human beings.</a> Wound Repair. 3, 292-298 (1995).</li>
<li>Davidson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+wound+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Dermatol.+Res%22%5BJournal%5D)">Animal models for wound repair.</a> Arch. Dermatol. Res. 290, 1-11 (1998).</li>
<li>Alfaro, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((sFRP2+suppression+of+bone+morphogenic+protein+%28BMP%29+and+Wnt+signaling+mediates+mesenchymal+stem+cell+%28MSC%29+self-renewal+promoting+engraftment+and+myocardial+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">sFRP2 suppression of bone morphogenic protein (BMP) and Wnt signaling mediates mesenchymal stem cell (MSC) self-renewal promoting engraftment and myocardial repair.</a> J. Biol. Chem. 285, 35645-35653 (2010).</li>
<li>Andrade, S. P., Ferreira, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+sponge+implant+model+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">The sponge implant model of angiogenesis.</a> Methods Mol. Biol. 467, 295-304 (2009).</li>
<li>Diegelmann, R. F., Lindblad, W. J., Cohen, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+subcutaneous+implant+for+wound+healing+studies+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">A subcutaneous implant for wound healing studies in humans.</a> J. Surg. Res. 40, 229-237 (1986).</li>
<li>Efron, D. T., Most, D., Shi, H. P., Tantry, U. S., Barbul, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+of+studying+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">A novel method of studying wound healing.</a> J. Surg. Res. 98, 16-20 (2001).</li>
<li>Lindblad, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Considerations+for+selecting+the+correct+animal+model+for+dermal+wound-healing+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomater.+Sci.+Polym.+Ed%22%5BJournal%5D)">Considerations for selecting the correct animal model for dermal wound-healing studies.</a> J. Biomater. Sci. Polym. Ed. 19, 1087-1096 (2008).</li>
</ol>

ليس لدينا ما يكشف.

<p class="jove_content"&gt; هذا النموذج من الاسفنج التئام الجروح لديه اختلافات متعددة، ويمكن لا يمكن أن يؤديها في الكثير من مختلف الأنواع بما في ذلك البشر والاسفنج وكذلك يتم زرع ظهريا<sup&gt; 1،2،8</sup&gt;. للدراسات في البشر، وبعض الأنواع الأخرى، قد الإسفنج يجب أن توضع في أنبوب السيليكون المسامي لمنع الاسفنج من يتم تغليف والسماح لسهولة إزالة<sup&gt; 4،8</sup&gt;. ويمكن تغيير مكان زرع الاسفنجة بناء على النتائج المرجوة ومهارة فني. ويمكن غرس الظهرية تسمح للإسفنج على التحرك تحت الجلد، في حين يزرع بطني أكثر صعوبة نظرا لاحتمال قطع طريق إلى تجويف البطن. يمكن تعيين الإسفنج مع القسطرة بحيث تسليم المخدرات هو ثابت، وتسيطر عليها، مما يلغي الحاجة لحقن متعددة<sup&gt; 9</sup&gt;. ويمكن حتى أصغر، والإسفنج أنبوبي يتم حقنه من خلال إبرة<sup&gt; 8</sup&gt;. ولا يقتصر تكوين الإسفنج &#39;إلى كحول البولي فينيل فقط. ويمكن تحضيرها من العديد من المواد على وجه الحصر أو في تركيبة<sup&gt; 7</sup&gt;.</p&gt;<p class="jove_content"&gt; ومن المهم للغاية لإعداد الاسفنج والتنسيب في الحيوان لتكون متسقة وفهمها بشكل صحيح. إذا تم قطع الإسفنج من أوراق يجب أن تكون من الوزن مماثلة للمقارنة. إذا كان الاسفنج هو أن محملة الخلايا أو العلاج، ويجب أن يوضع المبلغ في كل اسفنجة على وجه الدقة. لا يمكن للعملية الشفاء تختلف استنادا إلى موقع للتوظيف من الاسفنجة في الحيوان وتضميد الجراح وسوف تنخفض المسافة من زيادات رأس<sup&gt; 1،10</sup&gt;.</p

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم المادة </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> PVA الإسفنج </td><td> ميدترونيك </td><td> CF120 </td><td> حجم والمسامية من الاسفنجة يعتمد على التجربة </td></tr><tr><td> مشرط حجم شفرة 15 </td><td> الإنسي دينار بحريني </td><td> 371115 </td><td></td></tr><tr><td> Metzembaum مقص </td><td> الحرارية العلمية </td><td> 79-211 </td><td></td></tr><tr><td> المرقأة الملقط </td><td> أدوات العلم غرامة </td><td> 13004-14 </td><td></td></tr><tr><td> إبرة حامل </td><td> أدوات العلم غرامة </td><td> 12004-16 </td><td></td></tr><tr><td> 5-0 النايلون خاط </td><td> Ethilon </td><td> 698 </td><td></td></tr><tr><td> أكتوبر compouالثانية </td><td> الأنسجة تيك </td><td> 4583 </td><td></td></tr></tbody></table>

الاسفنجة كحول البولي فينيل نموذج زرع

The Polyvinyl Alcohol Sponge Model Implantation

التئام الجروح هو معقد، عملية متعددة الخطوات التي تنطوي على العديد من أنواع الخلايا، وعوامل النمو والمركبات 1-3. وبسبب هذا التعقيد، ودراسات التئام الجروح هي الأكثر شمولا عندما نفذت في الجسم الحي. وهناك العديد من النماذج في الجسم الحي المتاحة لدراسة حاد التئام الجروح، بما في ذلك الجراحي، والفضاء، استئصالية الميت، وحروق. نماذج الفضاء القتلى هم الاصطناعي، ويزرع التي يسهل اختراقها والتي تستخدم لدراسة تشكيل الأنسجة وآثار المواد على الجرح. بعض النماذج الفضاء الميت تستخدم عادة تشمل البولي فينيل الكحول (PVA) الإسفنج، واسطوانات شبكة أسلاك الفولاذ، وسعت بولي تترافلوروإيثيلين مادة (ePTFE)، و1،2 Cellstick. كل نموذج الفضاء الميت والقيود الخاصة بها على أساس تركيب المواد الأولية وغرس الأساليب. وشبكة أسلاك الفولاذ نموذج اسطوانة لديه مرحلة متخلفة من تسلل بعد غرس ويتطلب قدرا طويلة من الزمن قبل تشكيل النسيج الحبيبي begiنانوثانية 1. ويتم تحليل أفضل مراحل لاحقة من التئام الجروح باستخدام نموذج 1،4 ePTFE. وCellstick ليفة السليلوز داخل نموذج أنبوب السيليكون الذي يستخدم عادة لدراسة الجروح جراحة الإنسان وجرح السائل 2. ويقتصر الاسفنجة بولي لدراسات حاد لأنه مع الوقت أن تبدأ في إثارة رد فعل الجسم الغريب الذي يؤدي إلى رد فعل الخلية العملاقة في الحيوان 5. خلافا لغيرها من المواد، والإسفنج PVA سهلة لإدخال وإخراج، مصنوعة من مواد خاملة وغير القابلة للتحلل، وحتى الآن هي لينة بما يكفي لتكون مقطوع للتحليل النسيجي 2،5. في التئام الجروح الاسفنجة بولي أمر مفيد للغاية لتحليل تحبيب تكوين الأنسجة، وترسب الكولاجين، وجرح تكوين السائل، وآثار المواد على عملية الشفاء 1،2،5. بالإضافة إلى استخدامه في دراسة مجموعة واسعة من سمات من التئام الجروح، كما تم الاسفنجة بولي المستخدمة في العديد من أنواع أخرى من الدراسات. انها ساعةكما استخدمت للتحقيق في الأوعية الدموية السرطانية، تسليم المخدرات وبقاء الخلية الجذعية وengraftment 1،2،6،7. مع تحريف الكبير، الاستخدام المكثف قبل، والنتائج التي يمكن استنساخه، الاسفنجة بولي هو نموذج مثالي ل1،2 العديد من الدراسات. هنا، فإننا سوف تصف إعداد وغرس واسترجاعها من الأقراص الاسفنجة بولي (الشكل 1) في الفأر نموذج من التئام الجروح.

يوصف أداة مفيدة لتحليل آثار المخدرات، وعوامل النمو، و / أو خلايا التلاعب في نموذج حيواني لإصلاح الجرح. وتستخدم هذه التقنية الخصائص من الاسفنج البولي فينيل (PVA) لتقديم المشروبات الكحولية، وتحتوي على علاج المطلوب، وأيضا توفير منبر يمكن استئصاله وتحليلها.

تعد عملية التئام الجروح عملية معقدة ومتعددة الخطوات، تشمل العديد من أنواع الخلايا وعوامل النمو والمركبات 1-3. وبسبب هذه التعقيدات، فإن التئام الجروح ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو استخدام إسفنجة من كحول البولي فينيل لنمذجة التئام الجروح في الفئران. ويتم تحقيق ذلك من خلال ترطيب الإسفنجة وتحميلها أولاً من أجل الزرع. بعد ذلك، يتم إدخال الإسفنجة في جيب بين العضلات البطنية وجلد الفأر.بعد عملية الزرع، يمكن حقن كل إسفنجة بالعلاج. وتتمثل الخطوة النهائية في إزالة الإسفنجات من الفأر. وفي النهاية، يمكن إجراء عملية التقطيع والتلوين والمقايسات الكمية لمراقبة التغيرات والتباينات في عملية التئام الجروح.على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر رؤى حول التئام الجروح، إلا أنه يمكن تطبيقها أيضاً في مجالات دراسية أخرى مثل تكوين الأوعية الدموية في الأورام، وإيصال الأدوية، وبقاء الخلايا المزروعة والاندماج النسيجي. ابدأ بترطيب الإسفنج عن طريق التحريك طوال الليل في محلول كلوريد الصوديوم المائي بتركيز 0.9%. ثم قم بتعقيم 75 milliliters من معلق الإسفنج المرطب بجهاز الأوتوكلاف لمدة 25 دقيقة عند 121 °C.لتعقيم الإسفنج، ضع محلول الإسفنج الخاص بالموصدة (autoclave) داخل غطاء معقم، ثم استخدم ملقطاً معقماً لالتقاط إسفنجة واحدة، واضغط على الإسفنجة باستخدام الملقط، واستخدم رأس شفاط (vacuum tip) لإزالة أكبر قدر ممكن من المحلول من الإسفنجة. الآن، ضع الإسفنجة المعصورة في طبق زراعة أنسجة، مع الحرص على ترك مسافة بين الإسفنجات، ثم انقل محلول المعالجة بواسطة الماصة مباشرة إلى مركز الإسفنجة. بعد ذلك، اضغط برفق على الإسفنجة باستخدام رأس الماصة للمساعدة في امتصاص الإسفنجة للمحلول.بمجرد تحميل جميع الإسفنجات، تُحفظ اللوحة على الثلج حتى يتم زرع الإسفنجات في الفأر. بعد التأكد من التخدير باستخدام اختبار منعكس القرص، ابدأ بوضع الفأر في مخروط أنفي في وضع الاستلقاء الظهري. ثم باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية، قم بإزالة الشعر من منطقة بمساحة بوصة واحدة في بوصة واحدة على الجانب البطني السفلي للفأر أسفل القفص الصدري.مسح المنطقة لتنظيفها من الشعر المقصوص بعد ذلك. تعقيم المنطقة المحلوقة باستخدام Betadine، يليه الكحول بتركيز 70%. بعد ذلك، يتم شد الجلد جيداً.استخدم المشرط لإجراء شق عمودي، يكون طوله مرة ونصف إلى مرتين من قطر الإسفنج المراد إدخاله. مع الحرص على عدم القطع وصولاً إلى تجويف الجسم. استخدم الملقط للإمساك بحافة الجلد.ثم استخدم مقص ميتزنباوم لفصل الجلد ببطء عن العضلات على جانبي الشق. قم بتوسيع الجيب على عرض الفأر ومن القفص الصدري وصولاً إلى الأرجل الخلفية. الآن، استخدم الملاقط لالتقاط الإسفنجة الأولى التي سيتم وضعها في الحيوان عن طريق الإمساك بها من الجوانب.بعد ذلك، انقل الإسفنجة إلى ملقط مستقيم بحيث يتم إمساكها من الأعلى والأسفل. ثم، أمسك طرف الجلد وارفعها باستخدام ملقط آخر، وأدخل الإسفنجة ببطء، مع تجنب لمس الجلد أو العضلة الموجودة تحته. وبمجرد إدخال جميع الإسفنجات، استخدم ملقطاً لإمساك جانبي الشق معاً، ثم مرر خيط الجراحة عبر طبقتي الجلد.أحكم ربط العقدة الأولى بما يكفي لإغلاق حواف الجلد، وأكمل العقدة المربعة برمية واحدة إضافية من الاتجاه المعاكس، مع شد العقدة بإحكام هذه المرة. ثم اربط عقدتين مربعتين إضافيتين لإنهاء الغرزة.ضع غرزاً إضافية لإغلاق الشق الجراحي بالكامل. وأخيراً، أخرج الحيوان من جهاز التخدير وراقبه حتى يستعيد وعيه. يجب أن يبدأ الفأر في الحركة سريعاً والعودة إلى مستوى قدرته على التنقل كما كان قبل العملية.ابدأ بملء محقنة بالمحلول المطلوب وثبت إبرة قياس 28 gauge في المحقنة. بعد ذلك، وبعد التأكد من التخدير عن طريق قرص إصبع القدم، اغرس الإبرة في الحيوان بزاوية 45 درجة عبر الجلد في منتصف الإسفنج للتأكد من وجود الإبرة داخل الإسفنج. ثم ارفع الإبرة ببطء وبشكل عمودي.إذا كانت الإبرة داخل الإسفنجة، فسترتفع الإسفنجة مع الإبرة. بعد ذلك، قم بحقن المادة ببطء داخل الإسفنجة ثم اسحب الإبرة. بعد تضحية الحيوان، أمسك الجلد بملقط وأجرِ شقاً جراحياً بالقرب من الإسفنجة المطلوبة.أخيرًا، افصل الإسفنجيات بعناية عن الكبسولة المحيطة بها، مع تجنب جمع أنسجة إضافية تحيط بالإسفنجية التي تمت إزالتها. يمكن تخزين الإسفنجيات تحت ظروف مختلفة اعتمادًا على نوع التحليل الذي سيتم إجراؤه. ومن أجل التقطيع، يمكن تضمين الإسفنجيات المسترجعة في وسط تجميد، مثل مركب درجة حرارة القطع المثالية، أو وضعها في 10% formalin للتضمين والتقطيع في قوالب البارافين، كما تم القيام به لهذه الإسفنجيات المصبوغة بـ h and e.وفي هذه المقاطع من الإسفنج المصبوغ بـ trireme، يتم الحصول على أفضل نتائج التقطيع عندما يتم قطع الإسفنج إلى نصفين عبر القطر كما هو موضح هنا، ثم يتم تضمينه بحيث يكون السطح المقطوع لأسفل. وكما هو موضح هنا، يجب أخذ مقاطع من الإسفنج بحيث يظهر العرض الكامل للإسفنج في هذا الشكل. لقد تم تضمين أو تقطيع الإسفنج الموجود على اليسار بشكل غير صحيح، كما يتضح من حدود النسيج الممزقة على الجانب الأيمن من المقطع، بينما تمت معالجة الإسفنج السليم الموجود على اليمين بشكل صحيح.بعد مشاهدة هذا الفيديو، سيكون لديك فهم جيد لكيفية تحضير إسفنجات كحول البولي فينيل وزرعها وحقنها وإزالتها لدراسة التئام الجروح في الفئران.

the-polyvinyl-alcohol-sponge-model-implantation

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

الخلايا الجذعية البشرية حول الوعاء (الأمنية) هي الخلايا الجذعية فئة جديدة لتجديد الأنسجة العظمية مشابهة للخلايا الجذعية الوسيطة (MSCS). يمكن أن تكون معزولة الأمنية الخاصة من قبل نظام مراقبة الأصول الميدانية (مضان الفرز الخلية تفعيلها) من الأنسجة الدهنية المشتراة خلال إجراءات عملية شفط الدهون قياسي، ثم مجتمعة مع سقالة محرض عظمي لتحقيق تكوين...

استخدام الخلايا الجذعية البشرية ارتشاح لتجديد العظام

هذا البروتوكول يصف عزل الدهنية المشتقة من الخلايا اللحمية lipoaspirate وإنشاء عيب 4 مم الحرجة الحجم قبي لتقييم تجديد الهيكل العظمي.

إصلاح نموذج الحرجة الحجم عيب قبي طريق الدهنية المشتقة من الخلايا اللحمية المقطوع Lipoaspirate

مصدر:أوشن إي كلارك1 ، رومي أ. دوب1 ، توم هاسيل1 ، جوان إل فوثرجيل1 ، دانيال آر نيل21جامعة ليفربول ، 2 جامعة دندييوضح هذا الفيديو استخدام جهاز مطبوع ثلاثي الأبعاد ومغطى بالسيليكون يحاكي السطح الداخلي للقسطرة البولية لمحاكاة عدوى المسالك البولية المرتبطة بالقسطرة.

جهاز مطلي بالسيليكون مطبوع ثلاثي الأبعاد لنمذجة عدوى المسالك البولية المرتبطة بالقسطرة

في هذا الفيديو، ونحن سوف تظهر تقنيات التغيير لزراعة المعدنية التي يسهل اختراقها لتحسين وظائفها والسيطرة على الهجرة الخلية. وتشمل تقنيات تطوير التدرجات المسام للسيطرة على حركة الخلية في 3D، وإنتاج الغشاء القاعدي يقلد للسيطرة على حركة الخلية في 2-D. أيضا، يتم وصف طريقة تعتمد على HPLC لرصد التكامل زرع في الجسم الحي عن طريق تحليل البروتينات في الدم.

تعديل متعدد مقياس من يزرع لامع مع التدرجات مسام، مركبات البولي الكتروليت والمراقبة غير المباشرة<em&gt; في الجسم الحي</em

تعتبر السقالات  القادرة على التركيب داخل عيوب العظام القحفية والوجه والفكين (CMF) أثناء إظهار الموصلية العظمية والنشاط الحيوي ذات أهمية. يصف هذا البروتوكول تحضير سقالة ذاكرة الشكل على أساس بولي كابرولاكتون دياكريلات (PCL-DA) باستخدام طريقة ترشيح الجسيمات المصبوبة بالمذيبات (SCPL) باستخدام قالب ملح منصهر وتطبيق طلاء بولي دوبامين نشط بيولوجيا.

تصنيع يستند إلى PCL النشطة بيولوجيا، &quot;تركيب الذاتي&quot; الشكل الذاكرة البوليمرات سقالة

نقدم هنا، بروتوكولا لتقييم تكوين بيوفيلم الشفوي على مواد التيتانيوم وزركونيا للدعائم الأسنان الاصطناعية، بما في ذلك تحليل الجدوى الخلايا البكتيرية والخصائص المورفولوجية. نموذج في الموقع المرتبطة بتقنيات الفحص المجهري قوية يستخدم لتحليل بيوفيلم الشفوي.

تشكيل بيوفيلم الشفوي في المواد المختلفة لزراعة الأسنان

على توسيع عدد الحيوية رواية هندسيا لإصلاح آفات العظام الكبيرة بشكل مستمر بهدف تعزيز شفاء العظام والتغلب على التعقيدات المرتبطة بزرع العظام. وهنا، نقدم استراتيجية متعددة التخصصات للتجارب قبل الإكلينيكية توافق مع الحياة الحيوية لإصلاح العظام.

الشخصية التوافق البيولوجي في الحيوية لتجديد العظام

ويرد أدناه طريقه لغرس مصفوفات أقطاب البوليمر متعددة عبر مناطق الدماغ البعيدة تشريحيا للتسجيل إلكتروفيزيولوجي المزمن في الفئران تتحرك بحريه. يتم وصف الاعداد والغرس الجراحي بالتفصيل ، مع التركيز علي مبادئ التصميم لتوجيه التكيف لهذه الأساليب لاستخدامها في الأنواع الأخرى.

الزرع المزمن للصفائف متعددة البوليمرات المرنة

يصف البروتوكول نموذجا جديدا في الجسم الحي لعدوى زرع العمود الفقري حيث تصاب غرسة الأسلاك الكورية المصنوعة من الفولاذ المقاوم للصدأ بالمكورات العنقودية الذهبية Xen36 ذات الإضاءة الحيوية. تتم مراقبة العبء البكتيري طوليا باستخدام التصوير الحيوي وتأكيده بتعداد وحدات تشكيل المستعمرات بعد القتل الرحيم.

في الجسم الحي نموذج الماوس من عدوى زرع العمود الفقري

هنا، يتم وصف نموذجين التئام الجروح المورين، واحد يهدف إلى تقييم الاستجابات التئام الجروح الخلوية والسيتوكين والآخر لتحديد معدل إغلاق الجروح. ويمكن استخدام هذه الأساليب مع نماذج الأمراض المعقدة مثل مرض السكري لتحديد آليات جوانب مختلفة من الشفاء الجروح الفقراء.

تقييم التئام الجروح الحادة باستخدام دورسال تحت الجلد بوليفينيل الكحول الإسفنج زرع واستئصال الذيل نماذج الجرح الجلد.

ظهرت أنسجة القلب ثلاثية الأبعاد المهندسة بيولوجيا باستخدام خلايا عضلة القلب المشتقة من الخلايا الجذعية كنماذج واعدة لدراسة عضلة القلب البشرية السليمة والمريضة في المختبر مع تلخيص الجوانب الرئيسية لمكانة القلب الأصلية. تصف هذه المخطوطة بروتوكولا لتصنيع وتحليل أنسجة القلب المهندسة عالية المحتوى الناتجة عن خلايا عضلة القلب المشتقة من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات.

تصميم مفاعل حيوي لتحسين الحصول على البيانات ونمذجة إنتاجية أنسجة القلب المهندسة

تعلم نموذج التئام الجروح في الفئران باستخدام إسفنجة حمض البولي فينيل. تتيح هذه التقنية زرع الإسفنجات وحقنها بالعلاجات لتحليل العمليات البيولوجية والتئام الجروح بدقة.

الاسفنجة كحول البولي فينيل نموذج زرع

استكشف المزيد من الفيديوهات