الاسفنجة كحول البولي فينيل نموذج زرع

الهدف العام من هذا الإجراء هو استخدام إسفنجة من كحول البولي فينيل لنمذجة التئام الجروح في الفئران. ويتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق ترطيب الإسفنجة وتحميلها تمهيداً لزراعتها. بعد ذلك، يتم إدخال الإسفنجة في جيب بين العضلة البطنية وجلد الفأر.

بعد الزرع، يمكن حقن كل إسفنجة بالعلاج. وتتمثل الخطوة النهائية في إزالة الإسفنجات من الفأر. وفي نهاية المطاف، يمكن إجراء التقطيع والتلوين والمقايسات الكمية لملاحظة التغيرات والتباينات في عملية التئام الجروح.

على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر رؤية متعمقة حول التئام الجروح، إلا أنه يمكن تطبيقها أيضاً في مجالات دراسية أخرى مثل تكوّن الأوعية الدموية في الأورام، وإيصال الأدوية، وبقاء الخلايا المزروعة واندماجها. ابدأ بترطيب الإسفنج عن طريق التحريك طوال الليل في محلول كلوريد الصوديوم المائي بتركيز 0.9%. بعد ذلك، قم بتعقيم 75 milliliters من معلق الإسفنج المرطب بجهاز الأوتوكلاف لمدة 25 دقيقة عند 121 درجة مئوية.

لتعقيم الإسفنج، ضع محلول إسفنج الأوتوكلاف داخل غطاء معقم، ثم استخدم ملقطاً معقماً لالتقاط إسفنجة واحدة، واعصر الإسفنجة باستخدام الملقط، واستخدم طرف شفاط تفريغي لإزالة أكبر قدر ممكن من المحلول من الإسفنجة. الآن، ضع الإسفنجة المعصورة في طبق زراعة أنسجة، مع الحرص على ترك مسافة بين الإسفنجات، ثم انقل محلول المعالجة باستخدام الماصة مباشرة إلى مركز الإسفنجة. بعد ذلك، اضغط برفق على الإسفنجة باستخدام طرف الماصة للمساعدة في امتصاص الإسفنجة للمحلول.

بمجرد تحميل جميع الإسفنجات، تُحفظ الصفيحة على الثلج حتى يتم زرع الإسفنجات في الفأر. بعد التأكد من التخدير عن طريق اختبار منعكس القرص، ابدأ بوضع الفأر في قناع أنفي في وضعية الاستلقاء الظهري. ثم باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية، قم بإزالة الشعر من منطقة تبلغ مساحتها بوصة واحدة في بوصة واحدة من الجانب البطني السفلي للفأر أسفل القفص الصدري.

مسح المنطقة لتنظيفها من الشعر المقصوص بعد ذلك. تعقيم المنطقة المحلوقة بـ Betadine، يليه كحول 70%. بعد ذلك، شد الجلد جيداً.

استخدم المشرط لإجراء شق عمودي، يتراوح طوله من مرة ونصف إلى مرتين قطر الإسفنج المراد إدخاله، مع الحرص على عدم قطع تجويف الجسم. استخدم الملاقط للإمساك بحافة الجلد.

بعد ذلك، استخدم مقص ميتزنباوم (Metzenbaum) لفصل الجلد ببطء عن العضلة على جانبي الشق. قم بتوسيع الجيب على عرض الفأر ومن القفص الصدري وصولاً إلى القوائم الخلفية. الآن، استخدم الملاقط لالتقاط الإسفنجة الأولى المراد وضعها في الحيوان عن طريق الضغط عليها من الجانبين.

بعد ذلك، انقل الإسفنجة إلى ملقط مستقيم بحيث يتم إمساكها من الأعلى والأسفل. تالياً، أمسك حافة الجلد وارفعها بملقط آخر، ثم أدخل الإسفنجة ببطء، مع تجنب لمس الجلد أو العضلات الموجودة تحته. وبمجرد إدخال جميع الإسفنجات، استخدم ملقطاً لضم جانبي الشق معاً، ثم مرر خيط الجراحة عبر طبقتي الجلد.

أحكم ربط الرمية الأولى بما يكفي فقط لتقريب حواف الجلد، ثم أكمل العقدة المربعة برمية إضافية من الاتجاه المعاكس، مع شد العقدة جيداً هذه المرة. بعد ذلك، اربط عقدتين مربعتين إضافيتين لإنهاء الغرزة.

ضع غرزاً إضافية لإغلاق الشق الجراحي بالكامل. وأخيراً، أخرج الحيوان من جهاز التخدير وراقبه حتى يستعيد وعيه. يجب أن يبدأ الفأر في الحركة سريعاً ويعود إلى مستوى قدرته الحركية ما قبل الجراحة.

ابدأ بملء محقنة بالمحلول المطلوب وقم بتركيب إبرة قياس 28 في المحقنة. بعد ذلك، وبعد التأكد من التخدير عن طريق قرص إصبع القدم، أدخل الإبرة في الحيوان بزاوية 45 درجة عبر الجلد في مركز الإسفنج للتأكد من أن الإبرة موجودة داخل الإسفنج. ارفع الإبرة ببطء بشكل عمودي.

إذا كانت الإبرة داخل الإسفنجة، فستتحرك الإسفنجة للأعلى مع الإبرة. بعد ذلك، يتم حقن المادة ببطء داخل الإسفنجة ثم تُسحب الإبرة. وبعد التضحية بالحيوان، تُمسك البشرة بملقط ويتم إجراء شق جراحي بالقرب من الإسفنجة المطلوبة.

أخيرًا، افصل الإسفنج بعناية عن الكبسولة المحيطة، مع تجنب جمع أنسجة إضافية محيطة بالإسفنج المستخرج. يمكن تخزين الإسفنج في ظروف مختلفة اعتمادًا على نوع التحليل الذي سيتم إجراؤه. وبالنسبة لعملية التقطيع، يمكن دمج الإسفنج المسترجع في وسط تجميد، مثل مركب درجة حرارة القطع المثالية (optimal cutting temperature compound)، أو وضعه في formalin بتركيز 10% لدمجه وتقطيعه في قوالب البارافين، كما تم القيام به في هذه العينات من الإسفنج المصبوغة بصبغة h and e.

وفي هذه المقاطع من الإسفنج المصبوغ بـ trireme، يتم الحصول على أفضل نتائج التقطيع عندما يتم قطع الإسفنج إلى نصفين عبر القطر كما هو موضح هنا، ثم يتم تضمينه بحيث يكون السطح المقطوع موجهاً لأسفل. وكما هو موضح هنا، يجب أخذ مقاطع من الإسفنج بحيث يظهر العرض الكامل للإسفنج في هذا الشكل. لقد تم تضمين أو تقطيع الإسفنج الموجود على اليسار بشكل غير صحيح، وهو ما يتضح من خلال حدود الأنسجة المتمزقة على طول الجانب الأيمن من المقطع، بينما تمت معالجة الإسفنج السليم الموجود على اليمين بشكل صحيح.

بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تحضير إسفنج كحول البولي فينيل وزراعته وحقنه وإزالته لدراسة التئام الجروح في الفئران.