افعل ذلك بنفسك جهاز لاستخراج العينات Cryopreserved سقطت سهوا في صهاريج التخزين المبردة

الهدف من هذا الإجراء هو تسهيل استرجاع العينات في صناديق التبريد وقوارير التبريد من الخزانات المزدوجة المملوءة بالنيتروجين السائل باستخدام جهاز سهل البناء. يتم تحقيق ذلك عن طريق إزالة واحد أو اثنين من رفوف التجميد من الفاعل لإتاحة مساحة للمناورة وإدخال الجهاز عموديا في الفاعل. الخطوة الثانية هي كشط الجزء السفلي من الفاعل برفق باستخدام الجهاز.

بعد ذلك ، اسحب الجهاز في وضع مستقيم على طول جدران الفاعل لإخراج صندوق الفريزر من الخزان ، فإن الخطوة الأخيرة هي الاستيلاء على الصندوق الذي تم استرداده من أسفل الفاعل واستبدال رفوف الفريزر التي تمت إزالتها. الميزة الرئيسية لهذه التقنية على الطرق الحالية مثل الصب ، القضيب المليء بالنيتروجين السائل هي أنها توفر بديلا سهلا وآمنا وسريعا ، مما يحافظ على سلامة العينة ويمكن تنفيذه بواسطة مشغل واحد. لبدء تجميع الجهاز المقاوم للتبريد ، استخدم الكماشة لتصويب جانب واحد من ربطة عنق قوية ثلاثية الجوانب لعمل ربطة عنق قوية LHA.

كما هو موضح هنا ، يمكن تحديد أبعاد ربطة العنق القوية اعتمادا على قطر عنق الفاعل. يجب عمل رابطتين قويتين للسماح للجهاز باسترداد صناديق التبريد بحجم خمسة ونصف × خمسة بوصات ونصف. قم بتثبيتها بحزام TST قوي برباط باستخدام مسمار التاج وغسالة الجوز والمسمار لتشكيل قاعدة مغرفة التبريد.

يجب أن يظهر الجهاز الآن كما هو موضح هنا. الآن باستخدام لوحة مشقوقة ، قم بمحاذاة الفتحات الموجودة على نقطة الإنطلاق القوية مع الفتحات الموجودة على أحد طرفي اللوحة المشقوقة. ثم قم بتأمين الاثنين مع صواميل ومسامير هيلمان.

قم بحفر ثقوب للتثبيت إذا لم تكن اللوحة المشقوقة والروابط القوية بها ثقوب محفورة مسبقا. إذا رغبت في ذلك ، يمكن تشكيل مقبض عن طريق ثني الطرف الآخر من اللوحة المشقوقة ولفها بالرغوة. لفهم الجهاز بشكل أفضل ، تأكد من إزالة الرغوة قبل الماء cla.

يمكن أيضا تكييف جهاز استرجاع DIY الذي يتحمل التبريد لاسترجاع قوارير التبريد. يتضمن ذلك استبدال القاعدة المسطحة بمصفاة من الفولاذ المقاوم للصدأ معدلة لإخراج القوارير من السائل. لبدء التجميع ، قم أولا بفك صواميل ومسامير التاج ، وقم بربط شريحة الإنطلاق القوية للإطار باللوحة المشقوقة.

ثم قبل ربط مصفاة الفولاذ المقاوم للصدأ باللوحة المشقوقة ، قم بثني عنق المصفاة برفق بمساعدة كماشة لتوجيه القاعدة بزاوية تشبه المغرفة. إذا كانت المصفاة المستخدمة تأتي مع شفاه ، فاستخدم كماشة لثني الشفة لأسفل. هذا سيجعل المناورة مع الجهاز أسهل.

قم بمحاذاة الفتحة الموجودة على مقبض المصفاة جنبا إلى جنب مع الفتحات الموجودة على اللوحة المشقوقة وقم بتأمين المصفاة باستخدام صواميل ومسامير هيلمان. قم بحفر ثقوب إذا كانت المصفاة لا تأتي بثقوب محفورة مسبقا. لبدء استرداد صناديق التبريد من الفاعل ، تأكد أولا من ارتداء القفازات المبردة.

ثم قم بإزالة واحد أو اثنين من رفوف الفريزر من الفاعل لإفساح المجال للمناورة بالجهاز. بعد ذلك ، استخدم جهاز استرجاع DIY المستقيم المقاوم للتبريد والمزود بقاعدة ttra القوية للكشط برفق على طول الجزء السفلي من الفاعل وجمع الصندوق ، والسقوط في قاع خزان المفعل. بعد ذلك ، اسحب الجهاز في وضع مستقيم على طول جدران الفاعل لإخراج صندوق الفريزر من الخزان.

لاحظ أنه يجب إمساك الجهاز عموديا وسحبه بشكل مستقيم لأعلى لتجنب انزلاق الصندوق مرة أخرى إلى الفاعل. لاسترداد قوارير التبريد ، استخدم مغرفة التبريد المزودة بمصفاة لكشط الجزء السفلي من الفاعل برفق على غرار استرجاع صندوق التبريد ، واسحب الجهاز في وضع مستقيم وامسك بالقوارير المجمعة في المصفاة. يتمثل التحدي الرئيسي في دراسات التعبير الجيني في أن جودة الحمض النووي الريبي تعتمد على ظروف التخزين لكل من عينات الأنسجة المجمدة والحمض النووي الريبي المستخرج.

يوضح هذا الشكل تأثير التعامل مع العينة على سلامة إجمالي الحمض النووي الريبي الكلي من نفس مصدر الأنسجة الذي تعرض لمعالجة عينات مختلفة قبل إجمالي التجربة السليمة ، ويظهر معدل إعداد الحمض النووي الريبي نطاقات RNA الريبوزومية الواضحة 28 ثانية و 18 ثانية مع نطاق الحمض النووي الريبي الريبوزومي 28 ثانية ، ما يقرب من ضعف كثافة نطاق الحمض النووي الريبي الريبوزومي 18 ثانية. هذا مؤشر على أن الحمض النووي الريبي سليم. تصور الممرات الثالثة والرابعة عينات ذات تدهور كبير بسبب إزالة التجميد الجزئي المتكرر عن طريق الاسترجاع قصير المدى من الفاعل ، وبالتالي نمذجة التخزين طويل الأجل مع الصب الدوري بسبب ضرورة استرجاع القوارير المتساقطة على الصناديق.

ومع ذلك ، فإن العينات المخزنة في خدمة الفاعل باستخدام جهاز DIY وبالتالي لا تحتوي على إزالة التجميد الجزئي على الحمض النووي الريبي السليم في الممر الثاني. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية استرداد العينات من dvar المملوء بالنيتروجين السائل دون الحاجة إلى صبه.