استئصال المبيض و17β استراديول، مع تبديل في الجرذان والفئران: تظاهرة البصرية

يتمثل الهدف العام من هذا الإجراء في تحقيق تحكم صارم في تركيزات الإستروجين في المصل، والتي تكون متذبذبة بطبيعتها لدى إناث الجرذان والفئران. ويتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق إزالة المبيضين من خلال الجذر الظهري. بعد ذلك، يتم تحضير كبسولات مرنة من السليلوز ومزيج من النوتيلا.

أخيرًا، يتم إدخال كبسولة تحت الجلد، أو يتم إعطاء خليط النوتيلا عن طريق الفم. وفي النهاية، يمكن الحصول على النتائج باستخدام المقايسة المناعية الشعاعية التي تظهر تركيزات مستقرة أو متذبذبة من 17 beta estradiol في المصل لطريقتي الكبسولة والنوتيلا على التوالي. والميزة الرئيسية لهذه التقنيات مقارنة بالطرق الحالية مثل الكريات بطيئة التحلل، هي أنه قد ثبت قدرتها على إنتاج تركيزات فسيولوجية من estradiol لفترات زمنية ممتدة.

يمكن لهذه الطريقة أن تساعد في الإجابة على أسئلة رئيسية في مجال الإستروجين، مثل الاختلافات في التأثيرات بين طرق الإعطاء والجذور والجرعات. بعد تخدير الحيوان، ضعه في وضعية الانكباب على لوحة تدفئة متصلة بميزان حرارة شرجي. يتم تطبيق IGEL ولتسكين الآلام بعد الجراحة تحت الجلد في الجانب الوحشي من رقبة الحيوان.

يتم حقن 5 mg/kg من IL في محلول ملحي أماميًا من منطقة بمساحة 4×4 cm عند كاشطة العرف الحرقفي. بعد ذلك، يتم تعقيم المنطقة بمطهر قبل تغطية الحيوان بملاءة جراحية ذات فتحة بمساحة 4×4 cm. يتم إجراء شق في الخط المتوسط بطول 2 إلى 3 cm، ثم يتم تشريح الجلد تشريحًا غير حاد من اللفافة الكامنة تحته، على بُعد 1 cm جانبيًا من الخط المتوسط.

قم بعمل شق آخر عبر اللفافة. ثم، وبأكثر طريقة سطحية ممكنة، قم بإجراء تشريح كليل جانبيًا تحت هذه اللفافة حتى يتم الوصول إلى التجويف البطني. باستخدام الملاقط، أمسك بالنسيج الدهني الذي يحيط بالمبيض في التجويف البطني واسحبه بلطف للخارج.

حدد موقع المبيض وقم بربط قرني الرحم والأوعية الدموية على مسافة 0.5 إلى 1 سنتيمتر من الجهة القريبة من هذا التركيب. استأصل المبيض والأنسجة الدهنية المربوطة، ثم أعد الأنسجة المتبقية إلى التجويف البطني.

قم بإجراء شق آخر في اللفافة المقابلة واستأصل المبيض الآخر. أغلق الجروح، وإذا لم يتم إعطاء 17 beta estradiol فوراً، فاترك الحيوان يستفيق من التخدير.

ضع الحيوان في قفص مدفأ لمدة ساعتين على الأقل بعد الجراحة. يتم إسكان الجرذ بشكل منفصل خلال الأيام القليلة الأولى بعد العملية الجراحية. بعد 24 ساعة من الجراحة تحت الجلد.

احقن الحيوانات بخمسة mg/kg أخرى من IL لإعطاء 17 beta estradiol عبر كبسولات scholastic. اخلط الكمية المطلوبة جيداً في زيت السمسم. باستخدام الملقط، اقطع أنابيب scholastic بطول 3 cm وعيدان تطبيق خشبية بطول 5 mm لسدها.

أدخل سدادة خشبية واحدة في الكبسولة التعليمية قبل حقن محلول 17 beta estradiol في زيت السمسم. لملء الكبسولة بالكامل، قم بتغطية الطرف المفتوح من الكبسولة التعليمية برفق بسدادة خشبية أخرى. احضن الكبسولات في محلول 17 beta estradiol المتبقي طوال الليل قبل عملية الزرع.

بعد إغلاق شقوق الاستئصال، قم بحلاقة وتطهير منطقة مربعة بمساحة 2*2 سنتيمتر على الجانب الظهري من رقبة الجرذ. قم بإجراء شق بطول 1 سنتيمتر، ثم قم بالتسليك جانبياً وبشكل غير حاد. قم بتشريح جيب تحت جلدي لتوفير مساحة كافية للكبسولة.

امسح الكبسولة التعليمية ثم أدخلها برفق عبر الشق. بعد ذلك، أغلق الشق باستخدام غرزة جراحية. تأكد من أن الكبسولة تضغط على الجلد بأقل قدر ممكن، خاصة حول الجرح.

لاستخدام كريمة المكسرات Nutella كوسط لإعطاء الإستروجين، قم بإذابة 17 beta estradiol تماماً في زيت السمسم، ثم اخلط زيت السمسم مع كريمة المكسرات. قم بتحضير كريمة مكسرات وهمية (placebo) خالية من 17 beta estradiol لمدة خمسة أيام قبل التجربة. قم بتدريب الجرذان على تناول كريمة المكسرات الخالية من الهرمونات في الأيام من الأول إلى الثالث.

يتم تدريب الحيوانات في مجموعات في اليومين الرابع والخامس. وتُغذى الحيوانات على كريم المكسرات في أقفاص منفصلة طوال فترة التجارب. كما توضع الحيوانات في أقفاص منفصلة عند تغذيتها بالمصل الفسيولوجي لكريم المكسرات.

تتراوح تركيزات 17 beta estradiol، التي تهدف الطرق الحالية إلى إعادة إنتاجها، ما بين 5 إلى 140 picograms per milliliter للجرذان، ومن 5 إلى 35 picograms per milliliter للفئران. كما هو موضح هنا. عند إعطائها لجرذان إناث من سلالة Sprague Dawley تزن 300 gram.

تنتج الكبسولات المرنة التي تُحقن تحت الجلد تركيزات من 17 beta estradiol في المصل تتناقص ببطء من حوالي 40 picograms per milliliter في اليوم الثاني إلى 10 picograms per milliliter بحلول اليوم 35. ومع ذلك، يمكن توقع حدوث ذروة في تركيز المصل تصل إلى حوالي 1000 picogram per milliliter مباشرة بعد الإعطاء، والتي تنخفض إلى النطاق الفسيولوجي في غضون ثماني ساعات عند إعطاء الكبسولات لإناث الفئران من سلالة C 57 black six بوزن 25 gram.

انخفض تركيز المصل ببطء من حوالي 90 picograms per milliliter في اليوم الثاني إلى 25 picograms per milliliter في اليوم 35 عند إدارته عبر كريم الأنف لجرذان من سلالة Sprague Dawley تزن 300 grams. وتذبذبت المستويات الفسيولوجية لـ 17 beta estradiol يومياً بين 10 إلى 70 picograms per milliliter في الفئران.

تذبذبت مستويات 17 beta estradiol بين 20 و120 picograms per milliliter. وبمجرد إتقانها، يمكن إتمام تقنية ectomy وزرع الكبسولة في غضون 10 دقائق إذا نُفذت بشكل صحيح. وأثناء محاولة إجراء هذه العملية، من المهم تذكر الالتزام الصارم بالإرشادات الصحية.