Name: إعداد عامل نمو الخلايا T من Splenocytes الجرذ (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-31T22:24:33.000+00:00
Duration: 18 min 27 s
Description: تعلم إعداد عامل نمو الخلايا T من خلايا الطحال في الجرذان باستخدام محفز الكونكانافالين أ. يوفر هذا البروتوكول طريقة فعالة لدعم توسع الخلايا اللمفاوية T المحددة للمستضد في المختبر.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأخذ الطحال الفئران لويس (الجرذان بين 200G - 160 هي الأفضل). Dilacerate على الجليد في طبق بتري تحتوي على المضادات الحيوية PBS + (PBS - PS) باستخدام مصفاة الخلية. وضعت في أنبوب 50 مل. تمتلئ PBS - PS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدور لمدة 10 دقيقة على 4 إلى خلايا بيليه درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الخلايا مرتين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend الكرية في NH 4 الكلورين 0.15 متر (5 مل في الطحال). المزيج بلطف وبشكل مستمر مع الماصة لمدة 3 دقائق على الجليد لليز في الكريات الحمراء. ملء الأنبوب مع المتوسط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدور لمدة 10 دقيقة على 4 إلى خلايا بيليه درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الخلايا مرتين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عدد الخلايا. والطحال الفئران يعطي 200-250000000 الخلايا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بذور الخلايا بنحو 2 مليون لكل مل في المتوسط ​​الكامل : 50 مل لكل 75 قارورة 2 سم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اسمحوا تنمو لمدة 48 ساعة في الحاضنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدور لمدة 15 دقيقة عند 4 درجة مئوية إلى خلايا بيليه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع طاف ؛ تجاهل الخلايا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 15 ملغ / مل a mannoside الميثيل إلى طاف. مزيج دقيق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصفية (0.2 ملم) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قسامة وتخزينها في -20 درجة مئوية. يمكن الاحتفاظ بها في 4 درجات مئوية لمدة 10 أيام إذا لزم الأمر. </li></ol>

<ol><li>Beeton, C., Barbaria, J., Devaux, J., Benoliel, A. -M., Gola, M., Sabatier, J. -M., Bernard, D., Crest, M., Beraud, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+blocking+of+voltage-gated+K%2B+channels+treats+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+and+inhibits+T-cell+activation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation.</a> J. Immunol. 166, 936-944 (2001).</li>
<li>Beeton, C., Wulff, H., Barbaria, J., Clot-Faybesse, O., Pennington, M., Bernard, D., Cahalan, M. D., Chandy, K. G., Beraud, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+blockade+of+T+lymphocyte+K%2B+channels+ameliorates+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%2C+a+model+for+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad%22%5BJournal%5D)">Selective blockade of T lymphocyte K+ channels ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis, a model for multiple sclerosis.</a> Proc. Natl. Acad. 98, 13942-13947 (2001).</li>
<li>Mor, F., Cohen, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propagation+of+Lewis+rat+encephalitogenic+T+cell+lines%3A+T-cell-growth-factor+is+superior+to+recombinant+IL-2%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Propagation of Lewis rat encephalitogenic T cell lines: T-cell-growth-factor is superior to recombinant IL-2.</a> J. Neuroimmunol. 123, 76-82 (2002).</li>
</ol>

ليس لدى المؤلفين أي تعارضات مصالح للإفصاح عنها.

نحن نستعد TCGF من splenocytes الفئران لويس لأننا الموت ببطء بانتظام الفئران ساذج من هذه السلالة لحصاد المصل والتوتة لتحفيز خلايا الفئران خطوط لويس تي في المختبر. ويمكن استخدام هذا TCGF لتعزيز النمو والبقاء على قيد الحياة من خطوط الخلايا التائية من سلالات الفئران الأخرى. ويمكن أيضا أن تكون مستعدة TCGF من سلالات أخرى من الفئران.

لإعداد كاملة مستنبت إضافة التالي لزجاجة 500 مل من RPMI 1640 ومعقمة فلتر : 10 ٪ FCS (1) ؛ زجاجة من باريس سان جيرمان ، 5 مل الفيتامينات RPMI ؛ البيروفات الصوديوم 5 مل و 5 مل غير الأحماض الأمينية الأساسية ، و 50 أوقية بيتا المركابتويثانول ؛ 2 ميكروغرام / مل كونكانافالين A.

إعداد عامل نمو الخلايا t من splenocytes الجرذ

Preparing T Cell Growth Factor from Rat Splenocytes

صيانة خطوط محددة مستضد الخلايا التائية أو استنساخ في الثقافة يتطلب جولات من مستضد التي يسببها تفعيل مفصولة مراحل التوسع 1،2 الخلية. إضافة انترلوكين 2 إلى وسائل الإعلام الثقافة خلال مرحلة التوسع ضروري لمنع موت الخلايا وكافية للحفاظ على المدى القصير خطوط الخلايا T ولكن ثبت لزيادة الاستقطاب TH1 3. استبدال انترلوكين 2 بواسطة الخلايا التائية عامل النمو (TCGF) الذي يحتوي على مزيج من السيتوكينات هو أكثر فعالية من انترلوكين 2 في الحفاظ على المدى الطويل خطوط الخلايا التائية في المختبر 3. وعلاوة على ذلك ، يمكن بسهولة TCGF تكون مستعدة بكميات كبيرة في المختبر ، وأرخص بكثير من المؤتلف انترلوكين 2. هنا ، وتبين لنا كيفية تحضير TCGF من الفئران supernatants ثقافة خلية طحالية. لهذا الإجراء ، ونحن الحصاد الطحال من الفئران لويس السذاجة الموت الرحيم لجمع الدم والغدة الصعترية. نحن نستعد وحيدة الخلية الحذف من الطحال ، lyze خلايا الدم الحمراء من صدمة ناضح ، والبذور splenocytes في المتوسط ​​الثقافة. يتم تحفيز الخلايا مع كونكانافالين A ، وهو أن mitogen غير انتقائي تنشيط الخلايا اللمفية تي جميع الفئران ، الأمر الذي أدى إلى إنتاج السيتوكينات. يتم جمع supernantant الثقافة بعد 48 ساعة كونكانافالين andexcess منضما إلى mannoside الميثيل ألفا لمنعها من تفعيل خطوط الخلايا التائية التي ستضاف TCGF. وTCGF غير معقمة ، ثم تمت تصفيتها ، aliquoted ، وتخزينها في -20 درجة مئوية.

وصفنا إعداد الخلايا التائية عامل النمو المستخدمة في المختبر في التوسع من الفئران محددة مستضد خطوط تي اللمفاوية.

إعداد عامل نمو الخلايا T من Splenocytes الجرذ

يتطلب الحفاظ على خطوط الخلايا التائية أو النسائل المتخصصة لمستضد معين في المزارع الخلوية دورات من التنشيط المستحث بالمستضد، تفصل بينها مراحل من التوسع الخلوي 1،2. ...

مرحباً، أنا كريستين بيتون، باحثة مساعدة في مختبر جورج تشن في قسم الفسيولوجيا والفيزياء الحيوية بجامعة كاليفورنيا في إرفاين. وسأوضح لكم على مدار اليومين القادمين كيفية تحضير TCGF، وهو اختصار لعامل نمو الخلايا التائية (T cell growth factor).بالنسبة لزراعة الخلايا اليومية، عندما لا نحتاج إلى معرفة دقيقة بتركيب السيتوكينات في وسط الزراعة، فإننا نستخدم عامل نمو الخلايا التائية (T-cell growth factor)، وهو عبارة عن سائل طافي من زراعة طحال الجرذان يحتوي على السيتوكينات اللازمة للمساعدة في تكاثر الخلايا التائية. وتتم طريقة تحضير TCGF من خلال التضحية بجرذان لويس السليمة، ثم استئصال طحالها، وتحضير معلق من الخلايا المفردة، والتخلص من خلايا الدم الحمراء عن طريق تحللها، ومن ثم نقوم بتحفيز الخلايا أحادية النواة باستخدام con A، مما سيؤدي إلى تحفيز الخلايا التائية لإنتاج جميع السيتوكينات المطلوبة لنموها. ولتوليد TCGF، نحتاج إلى تنشيط الخلايا.تتمثل الطريقة التي نتبعها في إضافة ليكتين Concanavalin A، والمختصر بـ Con A، إلى المزرعة الخلوية. فعندما نضيف Con A إلى المزرعة الخلوية، فإنه سيرتبط بمعقد مستقبلات الخلايا T المغلذفة بالجليكوزيل، ومن خلال الارتباط بعدة معقدات في آن واحد، سيؤدي ذلك إلى ما نسميه "التغطية" (capping). وبذلك سيعمل على تجميع كافة المستقبلات في عنقود على سطح الخلية، مما سيؤدي إلى تحفيز إشارة تنشيط في الخلايا اللمفاوية T.لذلك، بعد تنشيط الخلايا، ستبدأ في عملية الانفجار (blast)، حيث يتزايد حجمها ثم تبدأ في إفراز السيتوكينات. في الأصل، كنا نعتقد أن عامل نمو الخلايا التائية (TCGF) هو بشكل أساسي إنترلوكين 2، ولكننا نعلم الآن أن الأمر ليس كذلك حقاً.كما أنه يحتوي على interferon gamma وTNF alpha وربما أيضاً بعض السيتوكينات بكميات صغيرة جداً تكون ضرورية فقط لإبقاء الخلايا حية بعد 48 ساعة. في المزرعة، أنتجت الخلايا جميع السيتوكينات التي نحتاجها. لذا سنقوم بإزالة الخلايا، وعندما نزيل الخلايا ونحصل على السائل الطافي فقط، سيظل هناك بعض الـ conal الحر في السائل الطافي. وسيشكل ذلك مشكلة لأننا نريد حقاً استخدام عامل نمو الخلايا التائية (T-cell growth factor) للحفاظ على نمو خطوط الخلايا التائية.وإذا تركنا الـ Con A حراً في المحلول، فسوف يقوم بتنشيط الخلايا في وقت لا نريد فيه تنشيطها. لذا، ولتجاوز هذه المشكلة، سنضيف فائضاً من سكر يرتبط بكل الـ Con A الحر الموجود. وبذلك سيتم تثبيطه تماماً ولن يرتبط بالمستقبلات المغلوزة الأخرى الموجودة على الخلايا عند إضافة TCGF إلى المزرعة.فلنبدأ الآن. تتمثل الخطوة الأولى في هذه التجربة في استخراج الطحال من الجرذ فور القتل الرحيم. وهذا ما سأقوم به على الفور باستخدام أدوات معقمة.وبمجرد استخراج الطحالين، سأضعهما في محلول PBS مدعم بالمضادات الحيوية، وأستخدم البنسلين والستربتومايسين كمضادات حيوية. لذا دعونا نبدأ. أقوم الآن برش الجرذ بـ 70% ethanol لضمان عدم حدوث أي تلوث في المزرعة.بعد ذلك، وباستخدام أدواتي، سأقوم بإجراء قطع صغير في الجلد هنا. ثم أزيل طبقة من العضلات ليظهر الطحال هنا تماماً. لذا، سأستخدم ملقطاً آخر لسحب الطحال برفق دون إتلافه.أقوم بإزالة الأنسجة الضامة بهذا الشكل. وهكذا أصبح لدي الآن طحال. وبالطبع، أتوخى الحذر الشديد لعدم إتلاف أي شيء آخر داخل التجويف البطني، لأن أي ضرر يلحق بالأمعاء سيؤدي إلى تلوث فوري للطحال.بعد ذلك، سأقوم بنقل الطحال إلى أنبوب يحتوي على PBS بالإضافة إلى المضادات الحيوية. وأحتفظ بهذا الأنبوب على الثلج. وهكذا، أكون قد انتهيت من استخراج الطحال من ثلاثة جرذان.لقد أصبحنا مستعدين الآن لتحضير معلق خلوي أحادي من هذه الطحالين. وبما أنني حصلت على الطحالين، فقد نقلتهما إلى غطاء تدفق هوائي لزراعة الأنسجة لتحضير معلق خلوي أحادي منهما باستخدام مصافٍ خلوية بمسامية 70 micron. سأحتاج إلى عدة أشياء لتحضير المعلق الخلوي الأحادي من الطحالين.أحتاج إلى أدوات معقمة، ملقط واحد ومقص واحد. ثم أضع مكبس حقنة معقمة سعة 1 mL في طبق بتري. سأقوم بوضع الطحال في PBS مضاف إليه مضادات حيوية.وفي طبق بتري آخر، وضعت مصفاة خلايا بمسامية 70 ميكرون في 10 milliliters من PBS مضافاً إليه مضادات حيوية. لذا، فإن الخطوة الأولى هي التأكد من نظافة الطحال، لأنه كما تلاحظون هنا، لا تزال هناك قطع صغيرة من النسيج الضام، وسأقوم بإزالتها لأنها ستؤدي إلى انسداد مصفاة الخلايا بسرعة كبيرة. وللقيام بذلك، أقوم ببساطة بقص الأجزاء غير المرغوب فيها والتخلص منها في غطاء طبق بتري.لقد أصبحت الطحال الآن نظيفة في الغالب، لذا سأقوم بأخذ الطحال واحدًا تلو الآخر، ووضعها في مصفاة الخلايا (cell trainer) وتقطيعها إلى قطع صغيرة، ثم أمزج الطحال الثلاثة معًا. الخطوة التالية هي تحضير معلق خلوي أحادي. وبالطبع، نظرًا لرغبتي في الحفاظ على تعقيم كل شيء، لن ألمس مصفاة الخلايا على الإطلاق، وسأستخدم مكبس حقنة معقمة سعة 1 mL لضغط قطع الطحال عبر مصفاة الخلايا.وكما ترون في الجزء الخارجي من جهاز تدريب الخلايا، يتم تحضير معلق من الخلايا المفردة. لذا، في الدورة الأولى، لا تزال هناك بعض القطع الصغيرة من الطحال، ولكنني سأقوم بالفعل بسحب معلق الخلايا المفردة، وقد نقلته بالفعل إلى أنبوب سعة 50 مل أقوم بحفظه على الثلج.سأقوم بإعادة ملء مصفاة الخلايا بـ 10 mL إضافية من PBS والمضادات الحيوية. لذا، سآخذ حوالي 10 mL أخرى من PBS مع المضادات الحيوية، ولا يشترط أن تكون الكمية 10 mL بدقة شديدة، فنحن نقوم بعملية غسيل فقط. أضعها في مصفاة الخلايا ثم أتبع نفس الإجراء.أعود إلى مكبس المحقنة وأضغط من خلال الـ ocid قليلاً بعد. وبطبيعة الحال، لن تتمكن أبداً من تمرير كل شيء لأن هناك أنسجة ضامة وقطعاً صغيرة من الدهون لم أتمكن من إزالتها وسوف تظل في مصفاة الخلايا. ولكن يجب أن تمرر غالبية الطحال إلى مصفاة الخلايا.وبعد ذلك، سأكرر تماماً ما فعلته سابقاً؛ حيث سأقوم بجمع معلق الخلايا المفردة وإضافته إلى السن نفسه. في هذه المرحلة، لم يتبقَّ شيء تقريباً من المادة الموجودة على المنخل في جهاز غربلة الخلايا، كما أن محلول PBS الناتج أصبح أكثر صفاءً بكثير. وسأقوم ببساطة بالغسل مرة أخرى، ومن المفترض أن نكون قد استخرجنا معظم الخلايا الآن.الآن لديّ معلق الخلايا المفردة من خلايا PLE، وسأقوم بطردها مركزياً ببساطة لترسيبها. سيكون الطرد المركزي لمدة 8 إلى 10 دقائق كافياً. لقد قمنا الآن بطرد خلايا PLE مركزياً وأصبح لدينا راسب جيد.سأقوم الآن بالتخلص من الطافي، ثم سأعمل على تحلل خلايا الدم الحمراء. لذا، سأقوم بتعليق الخلايا العضلية في كلوريد الأمونيوم؛ حيث سأستخدم محلولاً من كلوريد الأمونيوم بتركيز 0.15 molar، وبكمية 5 milliliters لكل طحال.بما أن لدي ثلاثة طحالات، فسأستخدم 15 milliliters من كلوريد الأمونيوم وسأقوم بذلك على الثلج. ولتحليل كريات الدم الحمراء، سأقوم بسحب السائل وإطلاقه بلطف باستخدام الماصة لمدة ثلاث دقائق. حسناً، سنستخدم هذه اللقطة ذات التعريض الأعلى هنا.لقد انتهيت الآن من تحليل الخلايا الكهربائية لمدة ثلاث دقائق. سأقوم بملء الأنبوب بمحلول PBS، كما يمكنكم استخدام الوسط الزرعي أيضاً؛ وذلك لإعادة أسمولية المحلول إلى النطاق الطبيعي للخلايا.وسأقوم بطرد الخلايا مركزياً كما فعلت سابقاً لمدة 8 إلى 10 دقائق لترسيبها. ثم سأقوم بغسلها مرتين باستخدام محلول PBS نفسه المحتوي على المضادات الحيوية. والآن نقوم بطرد الخلايا مركزياً بعد تحلل الخلايا الكهربائية، ولا تقلقوا فنحن لا نحصل أبداً على تحرر كامل بنسبة 100% للخلايا الكهربائية.وبذلك ستظل الرواسب حمراء، ولكن السائل الطافي سيكون أكثر نقاءً. والآن سأقوم بتفريغ السائل الطافي، وتفكيك الرواسب، ثم إضافة محلول PBS حتى 50 mil، والتدوير بالطرد المركزي، وتكرار هذه الخطوة مرة أخرى لضمان إجراء غسلتين. وبعد ذلك سأتمكن من عد الخلايا بنفسي. لقد قمت بغسل الخلايا العضلية Twice، ثم علقتها في وسط زراعة، وقم بتعدادها باستخدام مقياس الخلايا.كما هو متوقع. حصلتُ من ثلاثة طحالين على حوالي 600 مليون خلية، وهو أمر متوقع بما أن الطحال الواحد يعطينا عادةً من 200 إلى 250 مليون خلية. لذا، سأقوم الآن بزراعة الخلايا بكثافة 2 مليون خلية لكل مل في الوسط الزرعي المدعم بـ 10% fetal calf serum.وسأقوم بإضافة 2 µg/mL من conc A إلى ذلك الوسط لتحفيز الخلايا. وبعد ذلك، سأضع الخلايا ببساطة في الحاضنة لمدة 48 ساعة. لقد بقيت الخلايا الآن في الحاضنة لمدة 48 ساعة، وكما سأوضح لكم، فقد نمت بشكل جيد جداً.تحول لون الوسط إلى البرتقالي. لذا، نحن الآن مستعدون لإنهاء تحضيرنا لـ TCGF. كما تتذكرون، لقد أضفت con carnaval إلى معلق الخلايا الخاص بي لتنشيط الخلايا.إذًا، مادة concanavalin A هي ليكتين، حيث ترتبط بالسكريات الموجودة على جميع مستقبلات الخلية التائية (T-cell) وتعمل على تنشيط جميع تلك الخلايا بشكل اصطناعي. والمشكلة التي تواجهنا الآن هي أنه لا يزال هناك بعض من مادة concanavalin A في الطافي (supernatant) للخلية.وبما أننا سنستخدم السنا ت (snat) في مستنبتات أخرى للخلايا التائية (T cell) لتوسيع الخلايا، فإننا لا نريد وجود الكون كارنافال (con carnaval) في تلك المستنبتات الخلوية. لذا، وللتخلص منه، سأقوم بإضافة كمية فائضة من السكر الذي يرتبط به الكون نافال (con naval)، وهو ميثيل ألفا دي سايت (methyl alpha D cyte) الموضح هنا. وسأقوم بإضافة كمية فائضة من هذا السكر وإذابته تماماً.سوف يرتبط بكل ما تبقى من conc naval، وبمجرد الانتهاء من ذلك، سأقوم بترشيح رواسب الخلايا باستخدام مرشح معقم، ثم سأقوم بتجميد جميع السوائل لاستخدامها في الأسابيع أو الأشهر القليلة القادمة. لذا، لنبدأ بهذه الخطوة الأخيرة؛ حيث أقوم الآن بإضافة سائل زراعة الخلايا إلى أنابيب سعة 50 mil لنتمكن من إجراء عملية الطرد المركزي للتخلص من الخلايا.لذا، أقوم ببساطة بملء عدد الأنابيب اللازمة، ولا أفعل ذلك داخل غطاء زراعة الخلايا؛ يمكنني القيام بذلك، ولكن بما أنني سأحتاج في النهاية إلى ترشيح المحلول لأنني أضفت السكر، وهو غير معقم، فإنني أقوم بذلك ببساطة على طاولة المختبر، فهذا أسهل. لقد سكبت الآن جميع الخلايا والسائل الطافي في أنابيب فالكون سعة 50 mil.لذلك، سأنقلها إلى جهاز الطرد المركزي وأقوم بتدويرها لمدة 10 دقائق تقريبًا. والسبب الوحيد لتدويرها هو ترسيب الخلايا حتى أحصل على طافٍ نقي. لقد تم ترسيب الخلايا الآن، لذا أصبح الطافٍ نقيًا، وهذا هو ما أردت جمعه.سأقوم بتجميع كل السائل الطافي في دورق نظيف بسعة 150 سنتيمتراً مربعاً. وسأضيف السكر إلى هذا الدورق. وبينما كانت الخلايا تترسب أثناء الطرد المركزي، قمت بوزن كمية كافية من السكر لإضافة 15 milligram per ml من السائل الطافي.سأتركه يذوب تماماً، وبعد ذلك سأقوم بإجراء ترشيح معقم للطاف مادة الرائق. والآن سأضيف السكر بتركيز 15 mg/ml من الرائق. سأعيد وضع الغطاء، وبما أنني لا أعمل في ظروف معقمة، فلا يهم إذا التصق بعض السكر بالغطاء، لذا سأقوم بالخلط حتى يذوب كل السكر.من المفترض أن تكون هذه العملية سريعة للغاية. نعم، لقد ذاب كل السكر الآن. لذا، كل ما علي فعله هو ترشيح السائل الطافي باستخدام مرشح معقم، ومن ثم سأقوم بتقسيمه إلى حصص صغيرة.عادةً ما أقوم بتوزيع العينات في حصص حجم كل منها 10 إلى 15 مل وأقوم بتخزينها عند درجة حرارة -20 °C. ويمكن تخزين هذه الحصص لعدة أشهر. كما يمكنك تخزين TCGF في الثلاجة، وفي هذه الحالة، سأستخدمه خلال الـ 10 إلى 15 يوماً القادمة.على مدار اليومين الماضيين، أوضحتُ لكم كيفية تحضير عامل نمو الخلايا التائية، وهذا الطافي بسيط جداً في تصنيعه وغير مكلف في تحضيره. لذا، فإننا نستخدمه بشكل متكرر في المختبر للحفاظ على خطوط الخلايا التائية في المزارع الخلوية دون الحاجة إلى شراء مجموعات باهظة الثمن من السيتوكينات. أتمنى لكم التوفيق في تجاربكم.

preparing-t-cell-growth-factor-from-rat-splenocytes

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

توسيع فيفو السابقين الخلايا T ورم التفاعل من قبل وسائل 1/Ionomycin Bryostatin وصياغة سلسلة غاما المشتركة السيتوكينات

يوضح هذا الفيديو فحص المركبات المعدلة للمناعة عن طريق الفحص القائم على الفلورسنت. يتم التعامل مع الخلايا الليمفاوية التائية المشتقة من الفئران المعدلة وراثيا مع أشرطة تعبير البروتين الفلوري الأخضر بهذه المركبات. تتيح إشارات GFP المحسنة والمصغرة تحديد التأثيرات التحفيزية والمثبطة للمركبات ، على التوالي.

اختبار قائم على التألق باستخدام الخلايا الليمفاوية المصممة هندسيا لفحص المركبات المعدلة للمناعة

يعرض الفيديو فحصا قائما على قياس التدفق الخلوي لفحص الهيمنة المناعية في الخلايا الليمفاوية التائية السامة للخلايا أو استجابات CTL. تظهر الخلايا المستهدفة الفلورية المحقونة مضان متفاوتة تتوافق مع الحلقات المناعية. يكشف جمع وفرزة ما بعد الطحال عن انخفاض في الخلايا الفلورية عالية الكثافة ، مما يؤكد الهيمنة المناعية في استجابات CTL.

اختبار لتقييم الهيمنة المناعية في استجابات الخلايا الليمفاوية التائية السامة للخلايا

يوضح هذا الفيديو تقنية لتوليد خارج الجسم الحي للخلايا التائية لمستقبلات المستضد الخيمري الخاصة بمستضد الورم (CAR). يتم خلط نواقل الفيروسات القهقرية التي تحمل الحمض النووي الريبي المعدل وراثيا مع خلايا الطحال في وسط مكمل بالإنترلوكين -2 لتعزيز بقاء الخلايا التائية وانتشارها. ثم يتم نقل الخليط إلى صفيحة مغلفة بشظايا فيبرونيكتين بشرية مؤتلفة ويتم طردها مركزيا لتسهيل اندماج الفيروس مع الخلية ، مما يسمح للحمض النووي الريبي بالاندماج في الجينوم المضيف وإنتاج CARs مرتبطة بالسطح تستهدف مستضد الورم.

تقنية ex vivo لتوليد خلايا تائية لمستقبلات المستضد الخيمري الخاصة بالورم

يوضح هذا الفيديو تقنية لتوليد الخلايا التائية لمستقبلات المستضد الخيمري (CAR) الخاصة بالمستضد من خلال نقل الفيروسات القهقرية. تضاف خلايا الفئران CD8 + T المنشطة إلى صفيحة ميكروويل مغطاة بشظايا فيبرونيكتين مؤتلفة. ثم يتم إدخال نواقل الفيروسات القهقرية التي تحتوي على الحمض النووي الريبي المعدل وراثيا الذي يشفر مستقبلات مستضد خيميرية خاصة بالمستضد (CAR) ، ويتم طرد اللوحة لتسهيل التنبيغ. بعد الحضانة ، تعبر الخلايا المنقولة عن CARs الخاصة بالمستضد على سطحها.

تقنية لتوليد الخلايا التائية المستضدات الخيمرية الخاصة بالمستضد

يمكن الاستفادة من التأثيرات اللمفاوية والمناعية للعلاج الكيميائي ومعيار الرعاية الإشعاعية لتعزيز الفعالية المضادة للأورام للعلاج المناعي للخلايا التائية. نحدد طريقة لتوليد الخلايا التائية لمستقبلات المستضد الخيمري (CAR) الخاصة ب EGFRvIII وإدارتها في سياق معيار الرعاية للورم الأرومي الدبقي.

جيل من الخلايا T CAR للعلاج بالتبني في سياق ورم أرومي دبقي مستوى الرعاية

نقدم هنا، بروتوكولا للتفريق بين الخلايا مساعد (GMحتي) T جرانولوسيتيماكروفاجيكولونيستيمولاتينجفاكتوربرودوسينج مورين من السذاجة خلايا CD4 + T، بما في ذلك عزل من السذاجة خلايا CD4 + T، التفريق بين الآلية العالمية،حتي وو تحليل متمايزة جنرال موتورزحتي الخلايا. يمكن تطبيق هذا الأسلوب للدراسات المتعلقة بتنظيم ووظيفة خلايا تيحالآلية العالمية.

في المختبر التفريق بين الماوس المحببات-بلعم-مستعمرة-حفز عامل (GM-CSF)-إنتاج خلايا مساعد (GMحتي) T

نقدم هنا، بروتوكول بسرعة وتكاثر توليد مستضد أرتيسيفيكال القابلة للتحلل بيولوجيا من وحي، وعرض الخلايا (آبك) مع الانضباطي الحجم والشكل والعرض التقديمي البروتين السطحي للخلية T التوسع السابقين فيفو أو الحية .

تصنيع متباين مستضد الاصطناعية البوليمر عرض خلايا CD8 + تي خلية التنشيط

MALT1 ينظم الحصانة الفطرية ولكن كيف يحدث هذا وتظل غير محددة. كنا مثبط باراكاسباسي MALT1 انتقائية MLT-827 لكشف مساهمة MALT1 الفطرية مما يشير إلى المتلقين للمعلومات من مستقبلات يكتين مثل مثل عدد القتلى أو نوع ج، مما يدل على أن MALT1 وينظم إنتاج السيتوكينات النقوي، والمتلقين للمعلومات ج-نوع يكتين مثل مستقبلات، بشكل انتقائي.

تنظيم مسار الإشارات الفطرية النقوي بنشاط باراكاسباسي MALT1

ونحن هنا وصف تدفق الخلوية التي تستند في الجسم الحيوي قتل الفحص الذي يتيح النظر في المناعية في الاستجابات اللمفاوية T السامة للخلايا (CTL) لنموذج مستضد الورم. ونحن نقدم أمثله علي كيفيه استخدام هذا الفحص الأنيق للدراسات الميكانيكية ولاختبار فعاليه المخدرات.

الخياطة في فيفو الاختبارات الخلوية لدراسة المناعي في الأورام الخاصةCD8 + T الاستجابات الخلية

نقدم بروتوكولات محسنة لنقل الفيروسات القهقرية لمستقبلات الاتجار والتوجيه التنافسي لدراسة وضع الخلايا الليمفاوية الخاصة بالأعضاء والبيئة المكروية بوساطة المستقبلات. تقدم هذه الطريقة رؤى قيمة حول آليات الاتجار بالخلايا المناعية ولها تطبيقات محتملة في البحوث الأساسية والعلاجية المستقبلية.

نقل فعال للفيروسات القهقرية والتوجيه التنافسي للتحقيق في توطين الخلايا التائية بوساطة GPCR في البيئات الدقيقة المتنوعة للأنسجة

تعلم إعداد عامل نمو الخلايا T من خلايا الطحال في الجرذان باستخدام محفز الكونكانافالين أ. يوفر هذا البروتوكول طريقة فعالة لدعم توسع الخلايا اللمفاوية T المحددة للمستضد في المختبر.

إعداد عامل نمو الخلايا T من Splenocytes الجرذ

استكشف المزيد من الفيديوهات