نوفمبر 8, 2013
تحسين فهمنا للوقدرتنا على إدارة العديد من الفيروسات النباتية التي تنقلها الحشرات يتطلب استخدام ناقلات. انتقال الحشرة من الفيروسات النباتية هو التفاعل tritrophic، وعلى هذا النحو يتطلب التلاعب من الحشرات والفيروسات والنبات. يجب أن تربى ناقلات بأعداد كبيرة والتلاعب في مثل هذه الطريقة لضمان ارتفاع معدلات انتقال العدوى إلى محطات الاختبار. أساسيات تربية والتلاعب الذبابة البيضاء، Bemisa الذبابة البيضاء ( نصفيات الجناح: Aleyrodidae)، ويرد متجه من الفيروسات النباتية ينتمون إلى عدة أجناس فيروس الناشئة النبات، وهو ما يمثل عدد كبير من الفيروسات الهامة اقتصاديا.
الهدف العام من التجربة التالية هو نقل الفيروسات النباتية باستخدام الذباب الأبيض. يتم تحقيق ذلك من خلال إنشاء وصيانة مستعمرة من الذباب الأبيض الذي يزود الذباب الأبيض البالغ الناشد حديثا على أساس أسبوعي ، والذي لا يتلوث بالنواقل ومسببات الأمراض المحتملة الأخرى. يتم الحفاظ على المستعمرات عن طريق إضافة الذباب الأبيض بانتظام إلى النباتات الصغيرة الخالية من الحشرات التي يتم إنتاج بالغين جدد منها.
بعد 17 إلى 20 يوما كل أسبوع ، يمكن نقل البالغين الناشحين حديثا إلى نباتات الاختبار إما للحصول على انتقال الفيروس أو نقله. عادة ما يتم الحصول على كفاءات تقارب 100٪ ، وعادة ما تبدأ معدلات النقل منخفضة وترتفع مع التحسين المنهجي. الجانب الأكثر تحديا في استخدام الذباب الأبيض لتلقيح الفيروسات هو تربية الذباب الأبيض بطريقة يتم استبعاد مسببات الأمراض والحشرات غير المرغوب فيها.
ستقلل مسببات الأمراض ، وخاصة الفطريات المتعفنة للجذور ولفحات الأوراق ، من جودة النباتات المضيفة للفيروس. يمكن للحشرات غير المرغوب فيها مثل التوفير أن تمنع تكاثر الذبابة البيضاء بالإضافة إلى الإضرار بجودة النبات المضيف للفيروس. ستظهر الإجراءات هيذر كابا بيانكو ، فنية من مختبري.
يجب الحفاظ على مستعمرات الذبابة البيضاء في غرفة نمو نظيفة وخاضعة للرقابة. يعد التحكم في الرطوبة النسبية ودرجة الحرارة وفترة الصورة وشدة الضوء أمرا ضروريا للمستعمرة التي تتطور من بويضة إلى شخص بالغ في غضون 18 يوما ، استخدم الإعدادات التالية. يجب ضبط درجة الحرارة بين 26 و 30 درجة مئوية ، ويجب أن تكون الرطوبة النسبية بين 30 و 50٪ من الناحية المثالية إذا تجاوزت الرطوبة النسبية 70٪ من المحتمل أن تصبح مسببات الأمراض الفطرية الحشرية والنباتات مشكلة.
فترة الصورة المثالية هي 14 ساعة. يجب أن تكون شدة الضوء عالية إلى حد ما ، ويمكن أن تنتج مصابيح الفلورسنت VHO شمعة من 800 إلى 1000 قدم في مظلة النبات. يجب أيضا تقليل معدلات الأسمدة والري لتثبيط مسببات الأمراض الفطرية ، وكذلك تراكم الملح يجب أن تسمح الأقفاص البيضاء بالتهوية وسهولة الوصول والمساحة الكافية لتزايد عدد السكان الأبيض.
تم الحصول على نتائج جيدة من خلال فحص الأورجانزا العضوي بالإضافة إلى فحص الألمنيوم ، بالإضافة إلى الدليل الأبيض يعد فحص أنواع النباتات أحد الاعتبارات المهمة. أولا ، يجب أن تكون سريعة النمو ، ولكن لا تفرط في نمو الغرفة. ثانيا ، يجب أن يكون النبات قويا بما يكفي لدعم عدد كبير من الحشرات دون الانهيار.
لهذه الأسباب ، تتخذ أصناف الأدغال القزمية أو الأدغال خيارات نباتية جيدة. ثالثا ، يجب أن يكون النبات إما قادرا على استضافة الفيروس المستخدم أو غير قادر على استضافة الفيروس المستخدم اعتمادا على نوع المستعمرة التي يتم تربيتها نظرا لأن المستعمرة يمكن أن تنهار بسبب العث أو THPs أو الذباب الأبيض البري أو الحشرات الغازية الأخرى ، يجب زراعة الأصناف المختارة في بيئة محمية لاستبعاد الحشرات الأخرى.
يجب أن يكون الذباب الأبيض الأول لمستعمرة جديدة خاليا من فيروسات النبات والحشرات الأخرى ومسببات الأمراض الحشرية. إذا تم جمع الذباب الأبيض من الحقل ، فقم بتربيته لمدة ثمانية أسابيع على الأقل على النباتات التي ليست مضيفة للفيروس خلال هذا الوقت ، وتحقق من عدم وجود أعراض النبات. بمجرد الحصول على ذباب أبيض نظيف ، أدخل ما بين 20 و 100 إلى قفص من النباتات عن طريق الشفط أو هزها برفق من نبات مصدر آخر.
كلأسبوع يجب إنشاء قفص جديد. في الأسابيع الثلاثة الأولى ، استخدم الذباب الأبيض في النباتات غير ST لإنشاء القفص الجديد. بدءا من الأسبوع الرابع ، استخدم الذباب الأبيض البالغ من القفص البالغ من العمر ثلاثة أسابيع لإنشاء القفص التالي.
خلال الأسبوع الأول في القفص ، يضع الذباب الأبيض البيض على الجانب السفلي من أسطح أوراق النبات. في الأسبوع الثاني ، سيظهر الذباب الأبيض غير الناضج وسيظل بعض البالغين على قيد الحياة. في الأسبوع الثالث ، سيظهر العديد من الذباب الأبيض البالغ الجديد ، ويجب أن تكون هناك زيادة ملحوظة للغاية في عدد الذبابة البيضاء البالغة.
يمكن استخدام هذه الذباب الأبيض في تجارب النقل. في الأسبوع الرابع ، يجب نقل البالغين البالغين البالغين لمدة أسبوع واحد إلى قفص جديد. يجب إزالة القفص القديم والتخلص من نباتاته. دقيق.
يتم النقل اللطيف للذباب الأبيض باستخدام جهاز الشفط وقوارير التجميع لا تستنشق أبدا. يتم تضمين الذباب الأبيض الذي يتغذى على النباتات عند تغذية الأنماط البيضاء في النبات وسوف ينكسر إذا تم سحبه بعيدا عن النبات. جعل الذبابة البيضاء عديمة الفائدة لجمع الذباب الأبيض بيد واحدة ، أمسك واقيا بلاستيكيا أصفر داخل قفص المستعمرة باليد الأخرى.
اضغط برفق على النباتات لتشجيع الذباب الأبيض البالغ على الطيران. سينجذب الذباب الأبيض إلى البطاقة الصفراء حيث يمكن جمعها. باستخدام الشفاط والشفط اللطيف للغاية ، لا يضيف أكثر من 20 ذبابة بيضاء إلى كل قارورة مجموعة.
ثم اضغط على القارورة لإرباك الذباب وتغطية القارورة بالبارام. لضمان انتقال الفيروس بنجاح ، جرب 15 إلى 40 شابا من النباتات المصابة بالفيروس إلى النباتات السليمة ، اعتمادا على الفيروس والنبات المضيف. تحتاج البروتوكولات الأخرى مثل الفحص المقاوم إلى مجموعات أكبر من المبتدئين.
في هذه الحالة ، هز النباتات المصابة بالفيروس ، والتي تنتشر فيها الذباب الأبيض فوق النباتات التي تحتاج إلى التطعيم. بمجرد وضع الذباب الأبيض على نبات مصاب بالفيروسات ، اسمح له بالتغذي لمدة 48 إلى 72 ساعة للحصول على فيروسات تنتقل باستمرار. لا يؤدي المزيد من الوقت عموما إلى زيادة معدل انتقال الفيروسات المنقولة بطريقة مستمرة غير مستمرة أو ذكية.
تكفي فترة وصول اقتناء أقصر من ساعة إلى يوم للتجارب التي تتطلب الحصول عليها من أوراق محددة. يمكن استخدام أقفاص القصاصة ، وإعداد القفص بحيث يمكن الوصول إلى الجانب السفلي من الورقة ، ولا تستخدم أكثر من 10 إناث ذباب أبيض لكل قفص قطره 2.5 سم ، وإلا سينخفض معدل الانتقال بسبب الازدحام. لتلقيح النبات ، حدد القفص المناسب مع مراعاة عدد النباتات.
مصنع واحد ، على سبيل المثال ، يحتاج فقط إلى قفص صغير أكبر قليلا منه لنباتات متعددة ، اختر بين أنبوب PVC أصغر أو قفص مؤطر أو قفص إطار أكبر من الألومنيوم. كلما كانت المساحة المحيطة بمظلة النبات أصغر كلما كان ذلك أفضل. بمجرد إضافة الذباب الأبيض إلى النبات الجديد ، يعتمد مقدار الوقت اللازم للتطعيم على الفيروس والنبات المضيف.
وكما هو الحال بالنسبة للحيازة، فإن مقدار الوقت اللازم للإرسال يتوقف على طريقة الإرسال. ويتطلب الإرسال غير المستمر وقت نفاذ أقصر بكثير من الإرسال شبه المستمر أو المستمر. تأكد من أن الذباب الأبيض يفحص أو يتغذى خلال فترة الوصول إلى التلقيح.
افتح القفص وتحقق من الجانب السفلي لبعض الأوراق في كل نبات. للتلقيح الأطول. تعمل فترات الوصول بشكل دوري على إزعاج النباتات برفق لتشجيعها على إعادة التوزيع على النباتات.
سيؤدي ذلك إلى زيادة معدل الانتقال من خلال مواجهة الميول الطبيعية للذباب الأبيض للتجمع لإنهاء فترة التلقيح. اقتل الذباب الأبيض بمبيدين حشريين ، واحدا تلو الآخر. استخدم أولا مبيدا حشريا ملامسا لإنهاء الذباب الأبيض البالغ بسرعة مثل الصابون المبيد للحشرات.
ثانيا ، استخدم مبيدا حشريا جهازيا لإنهاء أي ذباب أبيض يتطور في الأسابيع التالية. وأي بالغين متبقين ينبعث منها ، قاحلة أو بيرازين هي خيارات فعالة. باستخدام هذه الإجراءات ، من الممكن الحصول بشكل روتيني على معدلات انتقال الفيروس بنسبة 100٪ تعد معدلات انتقال الفيروس المرتفعة هذه ضرورية عند فحص محطات الاختبار بحثا عن مقاومة الفيروسات وهي مرغوبة عند تقييم فعالية المركبات الكيميائية لقدرتها على التدخل في انتقال الفيروس.
بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تربية الذباب الأبيض واستخدامه لنقل فيروسات النبات. يمكن استخدام هذه الإجراءات لأغراض البحث أو للتطوير التجاري للنباتات المقاومة للفيروسات ، أو لاختبار المركبات لقدرتها على التدخل في انتقال الفيروس.
تركز هذه الدراسة على انتقال فيروسات النبات باستخدام الذبابة البيضاء، Bemisia tabaci. توضح الطرق المستخدمة لتربية الذباب الأبيض في بيئة خاضعة للرقابة لضمان معدلات عالية من انتقال الفيروسات إلى النباتات التجريبية.
Establishing reliable whitefly colonies enables consistent plant virus transmission for antiviral compound screening and resistance breeding programs. High-efficiency transmission supports predictive confidence in target validation and mechanistic de-risking of plant-based therapeutic candidates. This method provides a scalable, reproducible system for evaluating virus-host interactions in early discovery workflows.
Positions whitefly-mediated virus transmission as a discovery-to-preclinical enabling technology for antiviral target validation and resistance mechanism elucidation.